李永鑫
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金新疆维吾尔自治区高校科研计划新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠卵ZP3蛋白的可溶性表达、纯化及免疫活性鉴定
- 2009年
- 哺乳动物卵透明带3(Zona pellucida 3,ZP3)在诱导获能精子发生顶体反应中发挥着重要作用,其在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达。本研究在大肠杆菌中诱导表达可溶性的mZP3融合蛋白,并鉴定该蛋白的免疫活性。将小鼠卵透明带3克隆至pMAL-p2x质粒,转化至大肠杆菌BL21表达菌中。用不同温度、不同IPTG浓度、不同诱导时间及不同浓度的添加剂诱导目的蛋白表达,以筛选出mZP3融合蛋白可溶性表达的最佳条件。大量表达纯化后以Western blotting和ELISA检测蛋白的免疫活性。酶切鉴定及DNA测序表明mZP3已克隆入pMAL-p2x质粒。经优化诱导表达条件,筛选出mZP3融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当A600为0.6时添加0.02 mol/L葡萄糖,以0.6 mmol/L IPTG于25oC条件下诱导表达4 h。ELISA及Western blotting检测结果表明诱导表达的蛋白具有免疫活性。在大肠杆菌中表达并纯化获得可溶性mZP3蛋白,为mZP3免疫不育疫苗研制及其免疫效果检测提供了可溶性抗原。
- 孙美玉马正海李永鑫吕涛陈开旭张富春
- 关键词：卵透明带3可溶性蛋白原核表达
- 一种1型单纯疱疹病毒载体系统的建立被引量：4
- 2015年
- 1型单纯疱疹病毒(HSV-1)作为溶瘤病毒和病毒载体的研究已有很长的历史.本研究利用细菌人工染色体技术建立了一种HSV-1载体系统.首先,将HSV-1内部反向重复序列(internal inverted repeat sequences,IR)两侧的片段克隆入p KO5获得穿梭质粒p KO5/BN,其电转含p HSVBAC的大肠杆菌后筛选获得删除IR区重组DNA的p HSVΔIR-BAC.p HSVΔIR-BAC转染Vero细胞获得删除IR区的重组病毒HSVΔIR(MH1001).上述p KO5/BN和含p HSVΔIR-BAC的大肠杆菌构成了HSV-1载体系统.利用该系统获得了表达绿色荧光蛋白EGFP的重组病毒HSVΔIR/EGFP(MH1002).MH1001和MH1002在感染的Vero细胞中增殖水平略低于野生型HSV-1,但无显著差异;Western印迹检测表明,重组病毒早期蛋白质ICP0、ICP4、ICP8、ICP22、ICP27在感染细胞中的表达水平下降;免疫荧光及激光共聚焦检测表明,重组病毒与野生型病毒均存在于细胞质中.以上结果表明,删除IR区的重组HSV-1保留了复制能力,能够携载并表达外源基因,建立的HSV-1载体系统可用于构建携载外源基因的复制型重组HSV-1.
- 王雪莹赵晓飞李永鑫朱慧马正海
- 关键词：1型单纯疱疹病毒病毒载体细菌人工染色体
- 一种1型单纯疱疹病毒载体系统及其制备方法与应用
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种1型单纯疱疹病毒载体系统及其制备方法。该载体系统包括以HSV-1内部反向重复序列（IR）两侧DNA片段为同源重组臂的穿梭质粒pKo5/BN和含缺失IR区的HSV-1基因组的细菌人工染色体质...
- 马正海毛红艳李永鑫
- 文献传递
- 溶瘤型1型单纯疱疹病毒的研究
- 1型单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus type 1,HSV-1）具天然的嗜神经性和高效的感染能力,已广泛应用于肿瘤治疗研究和临床实验。目前开发的溶瘤HSV-1包括扩增子（Amplicon）、复制缺陷...
- 李永鑫
- 关键词：1型单纯疱疹病毒细菌人工染色体溶瘤病毒
- 文献传递
- 采用报告基因检测HSV-1潜伏相关启动子在神经细胞的特异性激活
- 2011年
- 1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)潜伏相关转录本启动子(latencyassociated transcripts promoter,LATP)在病毒于神经组织中潜伏感染期间保持活性.本研究利用PCR技术扩增获得HSV-1的LATP,并将LATP分别插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)基因和荧光素酶基因前,获得真核表达质粒pcDNA/LATP/EGFP和pGL3/LATP/Luc.pcDNA/LATP/EGFP转染293T细胞后,检测到绿色荧光蛋白基因的表达,表明LATP具有启动子活性,其活性低于PCMV.继而以pcDNA/LATP/EGFP和pGL3/LATP/Luc分别转染HeLa细胞、Eca109细胞、U251细胞和SK-N-SH细胞.结果表明,绿色荧光蛋白基因和荧光素酶基因在U251和SK-N-SH两种神经细胞中表达水平极显著(P<0.01),高于其在HeLa和Eca109两种非神经细胞中的表达.说明LATP能够驱动基因在神经组织细胞中高效表达,可作为神经组织特异性表达元件.
- 郭景霞李永鑫朱慧史茜张彩荣朱红娟马正海
- 关键词：1型单纯疱疹病毒启动子神经组织
- 复制型溶瘤1型单纯疱疹病毒被引量：1
- 2010年
- 1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type1,HSV-1)具天然的嗜神经性和高效的感染能力,已广泛应用于肿瘤治疗研究和临床实验。目前开发的溶瘤HSV-1包括扩增子(amplicon)、复制缺陷型病毒(replication-defective virus)和条件选择性复制病毒(conditional-replicative virus)三类。前两类HSV-1在细胞中不能复制,溶瘤效应限于局部组织,而复制型溶瘤HSV-1能够在肿瘤细胞中复制,复制周期完成后可裂解肿瘤细胞并释放子代病毒,继而感染临近的肿瘤细胞。目前,一些复制型溶瘤HSV-1已进入临床试验阶段,并在肿瘤治疗方面取得了一些令人鼓舞的结果。
- 李永鑫马正海
- 关键词：1型单纯疱疹病毒溶瘤病毒肿瘤
