李祥勇
- 作品数：40 被引量：126H指数：6
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- 人骨髓间充质干细胞诱导鼻咽癌上皮间质化的初步探讨被引量：2
- 2014年
- 目的初步探讨人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hbMSCs）条件培养基（conditioned medium,CM）在人鼻咽癌CNE1及CNE2细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）中的影响。方法取第3代hbMSCs融合达70%-80%时,换液培养24h后取其上清液（hbMSCs-CM）;取对数生长期5×103CNE1及CNE2细胞,分别在普通培养液（对照组）和hbMSCs-CM的培养液（实验组）中培养。使用倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,蛋白质印迹法及q-PCR检测EMT相关蛋白及RNA变化。结果 hbMSCs-CM培养鼻咽癌细胞5d,CNE1和CNE2均观察到细胞间距离增宽,并且折光性强、多量单极或双极梭形状成纤维细胞样细胞,以CNE2细胞最为明显。q-PCR检测结果显示,与对照组相比,hbMSCs-CM培养组细胞上皮细胞标志基因mRNA的相对表达水平下调,差异有统计学意义,P值均〈0.001;间质细胞标志基因mRNA相对表达水平上调,差异有统计学意义,P值均〈0.001;EMT相关转录因子基因mRNA相对表达量上调,差异有统计学意义,P值均〈0.001。蛋白质印迹法检测结果显示,hbMSCs-CM诱导CNE1及CNE2细胞发生EMT并呈一定浓度依赖性。当hbMSCs-CM浓度≥70%,上皮细胞标志蛋白相对表达水平显著下降,差异有统计学意义,P〈0.05。当hbMSCs-CM浓度〉50%时,CNE1和CNE2细胞间质细胞标志及转录因子蛋白相对表达水平上调,差异有统计学意义,P〈0.05。结论 hbMSCs可改变鼻咽癌细胞形态,并下调细胞黏附蛋白及增加细胞间质蛋白水平,可能是参与鼻咽癌上皮间质转化过程的因素之一。
- 蒋东辉黄博张月飞李祥勇周克元罗国庆
- 关键词：鼻咽癌骨髓间充质干细胞上皮间质转化条件培养基
- 应用正交设计筛选hTERT基因siRNA最佳作用位点被引量：2
- 2011年
- 目的筛选针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的最佳siRNA作用位点和作用浓度。方法分别选取hTERT基因上3个不同位点的序列,设计为shRNA表达质粒。然后采用SPSS 11.5统计软件设计正交实验,质粒种类、质粒浓度和时间为影响因素,它们的水平均是3个。用脂质体法将质粒转染入鼻咽癌细胞系CNE-2Z内,以MTT法检测细胞生长抑制率。同时以RT-PCR实验验证结果。结果作用于hTERT亚基2474～2489位点的质粒pmU6-hTERT-3在浓度为0.2μg/μL作用24 h的siRNA抑制作用效果最好。结论以正交实验统计原理来筛选siRNA最佳作用位点操作简单方便。
- 吴斌华李祥勇周克元
- 关键词：SIRNA正交实验人端粒酶逆转录酶MTT
- 异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的抑制作用。方法采用不同质量浓度(10、20、40、80mg/L)异鼠李素处理CNE-2细胞,分别用MTT法、台盼蓝染色、平皿培养和倒置显微镜观察细胞生长抑制率、细胞活力、集落形成、形态变化。结果异鼠李素组的CNE-2细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且抑制作用呈剂量依赖性。CNE-2细胞在异鼠李素处理后出现活力差、集落形成减少、形态改变。结论异鼠李素可明显抑制鼻咽癌细胞的生长和增殖。
- 罗海清李祥勇官成浓林观平
- 关键词：异鼠李素鼻咽癌
- 靶基因Bi-1RNAi重组慢病毒载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的构建靶向人Bax Inhibitor-1(Bi-1)基因的shRNA慢病毒重组载体。方法借助siRNA设计工具,并结合文献资料选取Bi-1基因编码序列中有效的干扰靶点,根据连接载体中的酶切位点自行设计并人工合成干扰靶点的一对反义脱氧寡核苷酸链,先定向克隆到pU6载体(pU6-Bi-1-shRNA),再经双酶切后克隆到慢病毒包装质粒LunIG,得到靶向Bi-1基因沉默的慢病毒包装重组质粒LunIG-Bi-1。重组质粒经PCR法进行初筛后,再通过双酶切电泳和目的基因沉默效果的检测保证插入序列的正确性。结果靶向沉默Bi-1基因的shRNA序列成功插入到慢病毒包装质粒LunIG中。结论靶向Bi-1基因沉默的慢病毒shRNA包装重组质粒构建成功。
- 李祥勇张美红林观平周克元
- 关键词：基因沉默RNAI慢病毒载体
- PTEN的高表达诱导人乳腺癌细胞ZR-75-1细胞凋亡
- ＜正＞PTEN基因是1997年发现并克隆定位于10 q 23染色体上,具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶双重活性的肿瘤抑制基因。人类多种肿瘤细胞中伴有PTEN基因的突变或者缺失。已有实验证实将外源性PTEN基因导入功能性PTEN...
- 李祥勇周克元林观平
- 文献传递
- bi-1短发夹状RNA重组真核表达质粒对鼻咽癌和卵巢癌细胞增殖的影响被引量：5
- 2008年
- 目的以真核表达质粒pmU6为基础,针对bi-1基因构建在细胞内表达短发夹状RNA(shR-NA)的质粒载体,并观察它们对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM、HO8910细胞株生长增殖的影响。方法人工合成bi-1寡核苷酸链,退火、定向克隆入pmU6载体中产生重组质粒,将重组质粒转染到细胞中,MTT比色法观察转染试剂及质粒载体对细胞生长增殖的影响。结果与未处理组相比,bi-1shR-NA对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM细胞株的生长增殖有明显的抑制作用,而对HO8910细胞株的生长增殖无明显抑制作用。结论重组质粒能在细胞内表达shRNA,产生RNA干扰(RNA interference,RNAi)效应并特异性抑制靶细胞的生长增殖,为质粒介导的RNAi技术应用于鼻咽癌和卵巢癌的基因治疗提供一定的理论依据。
- 张美红李祥勇张月飞蔡康荣周克元
- 关键词：RNAI基因转染
- 肿瘤干细胞标志物的确定与争议被引量：2
- 2013年
- 肿瘤中除了普通肿瘤细胞以外还有一小部分具有异质性分化潜能的细胞,命名为肿瘤干细胞,这部分细胞很可能与肿瘤的发生及复发、转移密切相关。肿瘤干细胞的异质性分化能力与胚胎干细胞较为相似,而且由于到目前为止尚无公认的肿瘤干细胞的标志物,所以,往往利用胚胎干细胞的标志物来分离和鉴定肿瘤干细胞。
- 马晓娟李祥勇李涛周克元
- 关键词：干细胞标志物肿瘤干细胞胚胎干细胞分化潜能分化能力
- 三株人乳腺癌细胞中PTEN基因的表达及意义
- ＜正＞目的:探讨PTEN基因在三株人乳腺癌细胞中的表达及意义。方法:采用RT-PCR及Western blot法检测三株人乳腺癌细胞株内源性PTEN mRNA及其产物蛋白的表达。结果:PTEN基因的产物蛋白在乳腺癌细胞M...
- 李祥勇
- 关键词：乳腺癌PTEN肿瘤
- 文献传递
- 鼻咽癌组织中WWOX基因和蛋白的表达及其临床意义被引量：1
- 2013年
- 目的探讨WWOX基因和蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理特征关系。方法收集52例鼻咽癌和25例正常鼻咽组织,采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色分别检测WWOX mRNA、蛋白表达。结果鼻咽癌组织中WWOX基因、蛋白表达显著低于正常鼻咽组织(P<0.05)。癌组织中WWOX基因、蛋白表达与分化程度、TNM分期有关(P<0.05)。结论检测WWOX表达可能有助于鼻咽癌诊断及预后判断。
- 罗海清刘付梅崔仲宜李祥勇
- 关键词：WWOX基因鼻咽癌免疫组化
- 藏红花素对CNE2细胞的增殖及迁移抑制作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨藏红花素(crocin)对人鼻咽癌细胞株CNE2细胞的增殖和迁移抑制作用及其可能的作用机制。方法使用高倍显微镜观察不同浓度crocin作用后的细胞形态变化,CCK-8法测定细胞增殖能力的改变,Transwell小室实验分析细胞迁移能力变化,RT-PCR技术测定bi-1基因mRNA表达变化。结果藏红花素作用于CNE2细胞24h后,可抑制其增殖和迁移能力,且呈剂量依赖关系,但当药物浓度超过0.8 mmol/L时,细胞形态发生明显改变,细胞死亡增加。RT-PCR结果显示,不同浓度的藏红花素作用于CNE2细胞24h后,bi-1基因的mRNA表达明显下调。结论藏红花素对CNE2细胞有增殖和迁移抑制作用,并可影响抗凋亡基因bi-1的表达,其机制可能是通过调控bi-1基因的表达实现的。
- 董盛宇刘付梅李祥勇
- 关键词：藏红花素CNE2增殖迁移
