杨圣勇
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：环境科学与工程生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 恶臭假单胞菌KT2440高效电转化方法
- 本发明涉及恶臭假单胞菌KT2440(Pseudomonasputida KT2440)高效电转化方法。该方法是：以EM培养基，30℃培养菌体至OD <Sub>600</Sub>为0.6-0.75，3mM 4-羟乙基哌嗪乙...
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- 文献传递
- 产2S-甲基丙二酰辅酶A的基因工程假单胞菌的构建
- 2011年
- 目的假单胞菌是次级代谢产物生物异源表达的优良宿主菌,然而它缺少许多次级代谢产物生物合成所需的小分子前体2S-甲基丙二酸辅酶A(2S-mm-CoA),因此构建产生2S-mm-CoA的宿主菌将有利于次级代谢产物的异源表达。方法本研究将来源于大肠埃希菌的编码甲基丙二酰辅酶A变位酶的sbm基因和编码甲基丙二酰辅酶A变位酶复合物保护蛋白的argK基因以及来源于天蓝色链霉菌的编码甲基丙二酰辅酶A异构酶的epi基因通过同源重组整合到恶臭假单胞菌KT2440(Pseudomonas putida KT2440)基因组,得到基因工程菌株P.putida LS-MCM。结果气质联用(GC/MS)分析表明P.putida LS-MCM能产生达2.22nmol/mL的2S-mm-CoA。结论 P.putida LS-MCM可作为异源表达需要2S-mm-CoA作为前体单元的次级代谢产物的宿主菌。
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- 关键词：假单胞菌同源重组异源表达
- 恶臭假单胞菌KT2440高效电转化方法被引量：2
- 2010年
- 恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440是模式环境微生物菌株,也是异源表达的良好宿主菌.高效率的电转化方法对于基因的引入及后续实验非常关键.通过条件优化,建立了高效的电转化方法.EM培养基培养菌体至D600nm=0.6～0.75,冰冷的3mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES,pH=7.0)的缓冲液洗涤菌体3次,菌体浓缩300倍,50μL分装并用于一次电转化.电转化条件:1.2kV,200Ω,25μF.1mL SOC培养基悬浮后,转至15mL聚丙烯离心管培养2h,转化效率可高达3.0×108转化子/μg,比目前为止文献报道的该菌株电转化效率高出30倍左右.实验结果还表明,转化DNA浓度与转化子数目呈线性关系.
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- 关键词：电转化感受态细胞
- 产甲基丙二酰辅酶A假单胞菌的构建和雷帕霉素生物合成基因簇的定位
- 微生物次级代谢产物的研究与开发明显受益于异源表达系统的应用,通过把来源于原始菌株的生物合成基因导入合适的新宿主菌株中,可以更容易地进行基因操作,研究沉默基因的功能和设计新的化合物,可以解决原始菌株难培养的问题以提高次级代...
- 杨圣勇
- 关键词：假单胞菌雷帕霉素生物合成基因簇
- 文献传递
- 恶臭假单胞菌KT2440高效电转化方法
- 本发明涉及恶臭假单胞菌KT2440(Pseudomonas putida KT2440)高效电转化方法。该方法是：以EM培养基，30℃培养菌体至OD<Sub>600</Sub>为0.6－0.75，3mM 4－羟乙基哌嗪乙...
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- 文献传递
