杨远勤
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：浙江理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- C19orf18蛋白的表达与纯化及多克隆抗体制备
- 2017年
- 旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目的蛋白,筛选出表达量较高的载体,再用筛选得到的表达量较高的载体大量表达目的蛋白,通过镍柱纯化得到较纯的C19orf18蛋白。用得到的蛋白免疫新西兰白兔,得到的抗血清先经过Protein A纯化,再进行抗原亲和纯化得到C19orf18蛋白多克隆抗体。结果显示,载体p ET28a-C19orf18蛋白表达量高于p ET32a-C19orf18,经过镍柱纯化后得到了较高浓度与纯度的目的蛋白,利用得到的目的蛋白作为抗原成功制备了其特异性的多克隆抗体。在原核细胞中成功表达了C19orf18重组蛋白,并得到了其特异性多克隆抗体,所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、蛋白免疫印迹实验。
- 童霄霞杨远勤陈勉王怀远胡海军章康健
- 关键词：原核表达
- 溶瘤腺病毒靶向癌症治疗的临床研究进展被引量：5
- 2013年
- 自上世纪50年代,腺病毒的发现并成功分离后,生物学家对溶瘤腺病毒进行了广泛的研究。与其他病毒相比,溶瘤腺病毒能够特异性地感染肿瘤细胞并在肿瘤细胞中完成感染-复制周期,从而特异性地杀伤和裂解肿瘤细胞但不损伤其他正常细胞和组织,因此成为目前最具研究前景的抗肿瘤药物之一。然而,在临床基因治疗过程中,腺病毒载体存在缺乏组织或细胞特异性,靶向细胞的基因转染效率较低以及缺乏一定的安全性等问题。因此,提高重组腺病毒的靶向性对于癌症基因治疗成功与否极为关键。据相关研究表明,目前溶瘤腺病毒作为癌症基因治疗载体已经进入相关临床试验阶段,并涉及多种癌症,而且也显示了很好的临床应用前景。对溶瘤腺病毒的种类、癌症靶向策略及临床研究等进行了综述。
- 周立何婉婉朱桢楠杨远勤赵红芳马步云王毅刚
- 关键词：溶瘤腺病毒
- 盐酸阿霉素增强溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL抑制肝癌细胞生长的研究
- 2014年
- 盐酸阿霉素(DOX)作为一种抗肿瘤抗生素,通过抑制癌细胞遗传物质的合成,对多种肿瘤均有杀伤作用,然而,其单独作用疗效有限,且加大剂量时其副作用较强。目前,携带抗癌基因的溶瘤腺病毒在肿瘤治疗中的作用日渐显现,溶瘤腺病毒ZD55-Trail联合DOX治疗肝癌的研究鲜有报道。通过MTT和结晶紫染色试验检测DOX药物处理对肝癌细胞系Bel-7404存活率的变化情况;Hoechst33342染色和流式细胞术检测肝癌细胞的凋亡;Western blot检测Trail蛋白和凋亡相关蛋白的表达;免疫荧光和流式细胞术检测凋亡相关受体表达的情况。结果显示,ZD55-Trail与DOX联合使用能够有效抑制肝癌细胞增长并诱导其凋亡,并且联合处理能增加Trail受体DR4和DR5的表达。初步探讨了DOX与ZD55-Trail两者协同诱导肝癌细胞凋亡的机制,为利用ZD55-Trail与DOX联合治疗肝癌提供依据。
- 刘涛韩华锋马步云杨远勤卓玲燕周立王毅刚
- 关键词：肝癌凋亡
- 利用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建TP53基因敲除HeLa细胞系（英文）被引量：2
- 2016年
- 该研究利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9)基因编辑系统构建了TP53(tumor antigen p53)基因敲除He La细胞系。CRISPR/Cas9系统能够精确地切开TP53基因并在双链断裂处插入选择标记(通过与供体质粒进行同源重组获得)。进一步的功能试验表明,TP53基因敲除的He La细胞拥有更强的细胞增殖能力、化疗耐药性以及氧化应激能力,提示He La(TP53–/–)恶性程度增强。所有的数据旨在描述一个简单和有效的方法,即通过CRISPR/Cas9系统来构建基因缺失细胞系,期望在较大程度上帮助研究和阐明基因功能以及细胞机制。
- 董文洁杨远勤方先龙尹晓飞徐燕妮王娇娇褚亮王如伟方玲吴帅刘新垣
- 关键词：TP53基因敲除
- c-MYC调节的miRNA-92b在结直肠癌发生发展中的功能及机制探究（英文）被引量：2
- 2016年
- micro RNAs(miRNAs)在参与癌症发生、发展过程中起着十分重要的作用.目前,miR-92b在结直肠癌中的作用及相关机制还未见报道.本研究探讨了miR-92b在结直肠癌发生发展中的功能及潜在机制.采用RT-qPCR方法发现,miR-92b在人结直肠癌临床样本中与癌旁组织相比显著高表达.通过结肠癌细胞株SW620稳转细胞及裸鼠皮下成瘤模型,发现过表达miR-92b可以显著促进细胞增殖及体内肿瘤生长.同时还发现miR-92b可以分泌形式存在于胞外及外周血中,提示miR-92b是一个具有分泌特性的micro RNA.在分子机理方面,c-MYC可通过调节miR-92b的启动子活性从而促进后者转录,并且c-MYC在结直肠癌组织样本中也存在高表达.进一步,通过在线预测、报告质粒活性检测及蛋白质印迹技术证实FBXW7是一个新的miR-92b靶基因.由于FBXW7已报道为c-MYC泛素降解过程中的关键泛素化连接酶之一,本研究结果提示结直肠癌中c-MYC、miR-92b及FBXW7三者间可能存在分子调节环路.综上所述,本研究为miR-92b在结直肠癌中的功能及机制提供了新的视角,并为miR-92b在结直肠癌早期诊断中的应用提供了新的参考.
- 尹晓飞吴帅杨远勤方先龙徐海能刘新垣郑树章康健
- 关键词：结直肠癌RNAC-MYC
- 携带Kallistatin的溶瘤腺病毒载体构建及其对肝癌细胞的体外杀伤效应
- 2012年
- 采用靶向基因-病毒治疗策略,通过同源重组的方式构建了携带Kallistatin(KAL)的重组溶瘤腺病毒ZD55-KAL,并研究其对肝癌细胞的杀伤作用。通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的杀伤能力和对正常细胞的安全性;结晶紫染色观察细胞凋亡现象。结果显示:经目的病毒ZD55-KAL感染后肝癌细胞出现明显的病变和生长抑制,而正常细胞未出现病变现象,表明目的病毒具有较高的安全性和对肿瘤细胞的特异性杀伤能力。此外ZD55-KAL感染肝癌细胞后引起凋亡,所携带的治疗基因KAL能通过促进肿瘤的凋亡达到抑制肿瘤细胞生长的效果。
- 夏玉龙马步云肖睿娟雷文杨远勤王毅刚
- 关键词：MTT
- TRAIL耐药产生的机制及逆转耐药的最新策略被引量：3
- 2012年
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing li-gand,TRAIL)是唯一能诱导癌细胞凋亡而对机体正常组织无明显损伤的内源性细胞因子,因而被认为是一种极具前景的抗癌药物。然而目前研究发现,许多恶性肿瘤细胞对TRAIL具有耐药性,使TRAIL在临床应用中遭遇瓶颈。越来越多的证据表明,一些关键信号通路可能与TRAIL耐药有关,且利用靶向基因治疗策略以及借助某些天然药物或小分子抑制剂能够部分恢复癌细胞对TRAIL的敏感性。该文主要描述了肿瘤细胞对TRAIL的耐药机制,并对如何有效克服和逆转TRAIL耐药的策略作了简要概括。
- 陆佳燕杨远勤周立王毅刚
- 关键词：TRAIL耐药性信号通路逆转
