熊坤
- 作品数：16 被引量：29H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 沙门菌yncD基因敲除载体及其制备方法及制备的沙门菌减毒疫苗
- 本发明涉及一种沙门菌yncD基因敲除载体，其包含pYG4质粒序列和中间去掉yncD基因序列同时保证阅读框不发生变化的yncD基因上下游序列。本发明还提供上述沙门菌yncD基因敲除载体的制备方法及通过应用上述的沙门菌ync...
- 丛延广熊坤王景陈志瑾
- 摩氏摩根菌噬菌体MmP1生物学特性及其基因组学的研究
- 噬菌体是细菌的病毒,现代分子生物学的许多重大成就,都是以噬菌体为研究对象或用噬菌体作为研究工具取得的。噬菌体具有极大的生物多样性,对于任何新分离噬菌体的生物学及其基因组
- 朱军民熊坤陈瑶胡珍谭银玲丛延广陈志瑾饶贤才胡福泉
- 文献传递
- 革兰阴性菌基因快速失活载体的构建及其应用被引量：1
- 2009年
- 目的构建适用于革兰阴性菌的快速基因失活载体系统并进行初步应用。方法应用分子克隆技术构建快速基因失活载体系统。载体成分主要包括:π蛋白依赖性复制起点ori R6K;编码接合转移的mob片段;多克隆位点序列;含有2个XcmⅠ酶切位点的T载体形成片段以及多种耐药片段,包括Chl(氯霉素抗性)、Tet(四环素抗性)、Km(卡那霉素抗性),获得的载体分别命名为EK3-Chl、EK3-Tet、EK3-Km。采用构建的EK3-Tet载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行插入突变,以验证其有效性。通过XcmⅠ酶切EK3-Tet质粒形成T载体状态,将PCR扩增得到的两端截短的yeeZ基因与该T载体直接连接,获得的质粒采用接合方式转移到弗氏枸橼酸杆菌ATCC8090中以实现整合,双抗培养基筛选整合突变株,对获得的突变株进行鉴定和形态观察。结果成功构建了EK3-Chl、EK3-Tet和EK3-Km,并对yeeZ基因进行插入突变获得突变株,步骤简便,工作周期短。结论上述构建的载体系统能够对革兰阴性菌进行目的基因的快速插入失活,该载体可在细菌基因功能研究中得到一定的应用。
- 龚明福滕亮张金龙黎庶胡晓梅陈志瑾熊坤丛延广
- 关键词：基因失活
- 金黄色葡萄球菌L型感染大鼠肺炎模型的建立
- 目的:用金黄色葡萄球菌ATCC25923的稳定L型感染SD大鼠,观察L型细菌感染动物后其肺脏的病理改变,建立L型细菌感染大鼠肺炎模型。方法:SD大鼠150g 30只,雌雄并用,分3组进行实验。A组:无菌L型高渗培养基对照...
- 王冬梅饶贤才杨永涛陈志瑾熊坤胡珍杨杰原薇薇
- 文献传递
- 碘液在芽孢染色中的应用研究被引量：1
- 2016年
- 目的探寻一种满意的芽孢染色方法 ,同时该方法能克服染料加温后挥发给实验操作人员带来的身体伤害。方法以碘液为媒染剂,用冷染方法替代传统芽孢加温染色,然后进行细菌涂片、干燥、固定、染色。初染液为石炭酸复红5 min,碘液媒染1 min,95%乙醇脱色5 s,碱性美兰复染1 min。比较石炭酸复红染色后加碘液、石炭酸复红染色不加碘液、石炭酸复红加温染色不加碘液的染色效果。结果石炭酸复红染色后加碘液与石炭酸复红加温染色不加碘液的染色效果相同,石炭酸复红染色不加碘液也能看出芽孢,但不明显。结论用碘液助染可获得满意的芽孢染色结果,且用该法可减少石炭酸挥发给实验操作人员带来的危害。
- 金晓琳金浩龙侯瑞熊坤陈志瑾
- 关键词：碘苯酚
- 革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用被引量：11
- 2009年
- 目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-SacⅡ-BglⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段。载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性。结果成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株。结论本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的基因的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用。
- 王景穆媛嫒黎庶陈志瑾熊坤丛延广
- 关键词：突变株基因功能
- 甲型副伤寒沙门菌减毒疫苗株的制备
- 本实验室以甲型副伤寒沙门菌CMCC50093为野生株，先经实验室培养初步筛选，进而采用自杀载体pYG4，通过同源重组的方式敲除yncD基因，获得一株甲型副伤寒沙门菌减毒疫苗株候选。通过与野生株生物学性状比较分析，该疫苗株...
- 熊坤陈志瑾胡晓梅胡启文饶贤才丛延广
- 关键词：生物学性状
- 文献传递
- 以国际遗传工程机器大赛(iGEM)为载体培养大学生的科研创新能力被引量：7
- 2017年
- 创新能力是科技发展的源动力,是一个民族进步的灵魂。21世纪的中国需要高素质的创新人才,而高等学校是培养人才,生产和传播新知识、新思想的重要基地。因此,如何加强大学生创新精神和创新能力的培养是我国高等教育的一大重要课题。国际遗传工程机器大赛(International Genetically Engineered Machine Competition,i GEM Competition)是合成生物学领域的顶级国际性学术竞赛,要求大学生能够用以合成生物学为核心的综合手段去解决科研和应用中的实际问题。i GEM竞赛过程非常注重对本科生的科研能力、团队协作、英语水平、沟通和表达技能的培养,从而吸引了全球顶尖高校和国内一流大学的积极参与。本文旨在通过对i GEM竞赛及2016年获奖情况进行分析,并结合第三军医大学i GEM代表队的参赛经历,探讨i GEM竞赛在培养大学生科研创新能力中的重要作用。
- 乐率胡启文熊坤胡晓梅王竞
- 关键词：创新教育
- 甲型副伤寒沙门菌减毒活疫苗的构建及其效能研究
- 甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphiA，SPA)是甲型副伤寒(paratyphoid feverA)的病原菌，主要通过粪—口途径传播，感染剂量约为103～109CFU/人，能够引起类似伤寒样的临床症...
- 熊坤
- 关键词：减毒活疫苗甲型副伤寒沙门菌基因敲除疾病控制
- 文献传递
- 应用患者恢复期血清初步筛选猪链球菌体内诱导表达抗原被引量：3
- 2010年
- 目的利用患者恢复期血清对中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株体内诱导表达抗原进行初步筛选,并对建立的05ZY/H33菌株基因组表达文库及体内诱导表达抗原筛选平台的可行性进行初步验证。方法提取05ZY/H33菌基因组DNA,由Sau3AⅠ不完全酶切后回收0.5～3kbDNA片段,插入经其同尾酶BamHⅠ酶切及去磷酸化处理的pET-30a/b/c表达载体系统,转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建05ZY/H33菌株基因组表达文库。将收集的患者恢复期血清等体积混合,经体外培养的05ZY/H33和BL21(DE3)全细胞及细菌超声裂解物吸附处理后,获得吸收血清。用此血清采用免疫印迹法筛选IPTG诱导的基因组表达文库,寻找05ZY/H33强毒株的体内诱导表达抗原。结果 05ZY/H33强毒株的基因组文库构建共得到3.2×104个重组子,重组阳性率达95%。随机挑选文库中的2000个重组子运用吸附处理后的患者恢复期血清对其进行体内诱导抗原的初步筛选,共筛到5个阳性克隆,经测序鉴定和生物信息学分析显示5个克隆子包含了05ZY/H33基因组的7个开放阅读框(ORF),其编码产物均参与细菌新陈代谢、复制增殖及损伤修复等重要的生命活动,极有可能为05ZY/H33强致病株的体内诱导抗原。结论本实验成功建立了运用中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株患者恢复期血清进行菌株体内诱导表达抗原筛选的技术平台,为05ZY/H33菌株体内诱导抗原的系统筛选奠定了基础。
- 宋洁黎庶丛延广陈志瑾熊坤胡福泉
- 关键词：猪链球菌2型
