王冬雪
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：空军总医院更多>>
- 发文基金：“首都临床特色应用研究”专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 白癜风患者血清抗黑素细胞抗体检测及相关抗原的鉴定被引量：6
- 2015年
- 目的：检测白癜风患者血清抗黑素细胞胞质和胞膜蛋白质抗体，并鉴定高识别率的胞膜抗原；检测白癜风患者血清抗酪氨酸酶相关蛋白1（ TRP-1）抗体与热休克蛋白70（ HSP70），并探讨二者的关系。方法体外培养高纯度正常人黑素细胞，间接免疫荧光法检测抗黑素细胞抗体并对相关抗原定位，裂解黑素细胞并抽提蛋白质，免疫印迹法检测50例白癜风患者血清（4例HBsAg阳性），并用蛋白质谱分析技术鉴定相关胞膜抗原；ELISA法检测70例白癜风患者血清（10例HBsAg阳性）抗TRP-1抗体和HSP70。结果间接免疫荧光法显示白癜风相关抗原位于黑素细胞胞质及胞膜上。免疫印迹法检测显示，膜抗原阳性率为80％，相应膜抗原相对分子质量（ Mr ）大约为86×10^3、75×10^3、60×10^3、52×10^3、44×10^3，各条带阳性率分别为36％、58％、22％、2％、2％；胞质抗原阳性率为30％，其M r约为110×10^3、90×10^3、75×10^3、50×10^3、40×10^3，各条带的阳性率分别为12％、4％、12％、10％、2％。20例对照血清胞膜抗原和胞质抗原阳性率分别为15％和5％。白癜风组均明显高于对照组。蛋白质谱鉴定显示：Mr为86×10^3和75×10^3的膜抗原为Lamin A／C，Mr 为60×103的膜抗原为Vimentin X1。在合并乙型肝炎的白癜风患者血清中存在高水平的抗TRP-1抗体与HSP70，并且二者浓度呈显著正相关性（ r＝0．927，P＜0．01）。结论通过蛋白质谱鉴定，发现了一种新的白癜风相关黑素细胞膜抗原，对白癜风自身免疫机制的研究有重要意义。通过检测血清抗TRP-1抗体和HSP70，初步探讨了HBV感染与白癜风发病的关系。
- 王冬雪朱美财刘成刚占志
- 关键词：白癜风黑素细胞自身抗原自身抗体HSP70
- 溶栓剂的研发现状及其最新进展被引量：2
- 2013年
- 由冠状动脉血栓导致的血栓性疾病通常表现为急性心肌梗死（AMI）。AMI严重影响了人类的生命和健康，已成为威胁人类健康的第一杀手.据美国心脏统计委员会和卒中小组的报道，2005年有2400名美国人死于心脑血管病（CVD），2006年的整体初步分析，
- 李飞朱美财占志王冬雪
- 关键词：溶栓剂
- 白癜风患者血清抗黑素细胞抗体及其相关抗原的分析研究
- 检测白癜风患者血清抗黑素细胞胞质和胞膜蛋白抗体，并鉴定高识别率的胞膜抗原;检测白癜风患者血清抗酪氨酸酶相关蛋白1抗体与热休克蛋白70表达水平，分析二者的相关性，探讨自身免疫机制在白癜风发病中的作用以及HBV感染者并发白癜...
- 王冬雪
- 关键词：白癜风热休克蛋白70免疫机制病理分析
- 普通及合并白癜风的HBV感染者血清抗TRP-1抗体的检测及其临床意义分析被引量：1
- 2015年
- 目的检测普通及合并白癜风的HBV感染者血清抗酪氨酸酶相关蛋白-1自身抗体(autoantibodies to tyrosinaserelated protein-1,a-TRP-1)水平并分析其临床意义。方法选取白癜风患者126例(其中合并HBV感染8例,合并a-TPO、a-TG阳性34例,其他白癜风病84例);无白癜风病史的普通HBV感染者84例(Hbs Ag、Hbe Ag、Hbc Ab阳性24例,Hbs Ag、Hbe Ab、Hbc Ab阳性60例);乙肝抗体阳性对照者96例(Hbs Ab、Hbe Ab、Hbc Ab阳性48例,Hbs Ab阳性48例);乙肝五项全阴性的健康对照者96例。用ELISA法和细胞免疫荧光法检测所有标本a-TRP-1表达水平,并对结果进行统计分析。结果白癜风组a-TRP-1总阳性率为6.3%(8/126),其中合并HBV感染者、合并a-TPO及a-TG阳性者、其他白癜风患者a-TRP-1浓度为分别为948.2±68.3 U/m L、36.1±0.1U/m L、54.3±12.8U/m L,各组阳性率分别为100%(8/8)、0%(0/34)、0%(0/84);健康对照组为46.9±0.1U/m L,阳性率为0%(0/96)。白癜风组中合并HBV感染者与健康对照组抗体浓度比较,差异有统计学意义(P<0.01),而a-TPO、a-TG阳性者、其他白癜风患者与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。普通HBV感染组中,Hbs Ag、Hbe Ag、Hbc Ab阳性者与Hbs Ag、Hbe Ab、Hbc Ab阳性者a-TRP-1浓度分别为868.7±161.4U/m L、756.7±157.5U/m L,阳性率分别为91.7%(22/24)、85.0%(51/60),与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);乙肝抗体阳性对照组中Hbs Ab、Hbe Ab、Hbc Ab阳性者与Hbs Ab阳性者分别为26.8±0.1U/m L、33.3±0.1U/m L,阳性率分别为0%(0/48)、0%(0/48),与健康对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。细胞免疫荧光法检测结果显示,ELISA法检测的a-TRP-1抗体阳性血清与黑素细胞培养固定物反应后,在胞浆和胞膜处发出明亮荧光,荧光强度+++^++++,合并a-TPO、a-TG阳性及部分其他白癜风患者血清在胞膜处也有荧光,荧光强度约++,健康对照血清荧光暗淡或无荧光。结论 a-TRP-1抗体的高表达与HBV感染�
- 刘成刚郑军王冬雪朱美财
- 关键词：乙肝病毒自身抗体白癜风
- 抗PAI抑制作用的纤溶酶原激活剂突变体的活性研究
- 2014年
- 目的:重组表达抗PAI抑制作用的t-PA突变体,经诱导表达、复性、纯化后进行生物学活性和酶动力学分析。方法:构建pBV220-tpa重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5a,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性。结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30%,经纯化后纯度达90%以上,比活性为7.0×108IU/mg,t-PA突变体与PAI-1反应后,其活性未受到抑制。t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.5298,最大水解速度Vmax为0.0595。结论:经生物学活性测定,表达蛋白能够明显抵抗PAI的抑制作用,并具有良好的生物活性,该突变体有可能成为用量更少、疗效更佳的新型溶栓药物。
- 李飞李忠培占志王冬雪朱美财
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体蛋白表达酶动力学
- 抗黑素细胞抗体免疫荧光细胞化学检测条件探讨被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种简单、实用、准确的抗黑素细胞抗体免疫荧光细胞化学检测方法,用于白癜风患者血清抗黑素细胞抗体的检测及其相关抗原分析研究。方法青少年包皮组织经分离酶(Dispase)Ⅱ及胰酶消化后,获取细胞悬液,用M2黑素细胞培养基及Accutase细胞消化液选择及扩大培养,取第3代黑素细胞在培养皿中直接用冷甲醇固定(-20℃),白癜风患者及健康人血清用抗体稀释液按1:10比例稀释进行反应,洗涤后加入FITC标记的羊抗人抗体,封片后荧光显微镜下观察;取不同荧光强度的标本血清用Western-Blot法进一步验证检测。结果获得高纯度、高活性的黑素细胞,黑素细胞在培养皿中经冷甲醇直接固定后细胞形态保持完整,实验过程无脱落,与白癜风患者及健康人对照血清反应后在荧光显微镜下发出不同亮度荧光,强阳性血清荧光强度+++^++++,发光部位为黑素细胞胞质和胞膜;弱阳性血清发光较明亮,亮度+^++,发光部位主要集中在胞膜;阴性血清不发光,只见隐约细胞轮廓,相同血清经重复检测2次后结果相同;经Western-Blot检测后证实黑素细胞胞质和胞膜有多种蛋白与抗黑素细胞抗体阳性血清结合,蛋白染色带的部位及颜色深浅与免疫荧光法检测结果相一致。结论本文建立的抗黑素细胞抗体的免疫荧光细胞化学检测方法简单、准确、重复性好,可全面地反映体内抗黑素细胞抗体表达水平,适用于临床检测及相关抗原的基础研究。
- 刘成刚王冬雪朱美财
- 关键词：黑素细胞自身抗体白癜风
- HBV感染者血清抗TRP-1抗体与HSP70检测及相关性分析
- 2015年
- 目的检测HBV感染者血清抗TRP-1抗体及HSP70,并对二者的相关性进行分析。方法选取HBV感染组血清标本88例,其中大三阳组28例,小三阳组60例;抗体阳性组标本64例,其中既往感染组32例,疫苗接种组32例;全阴性对照组64例。用ELISA法检测所有标本抗TRP-1抗体及HSP70表达水平,对各组检测结果进行统计并分析两者的相关性。结果大三阳组、小三阳组、既往感染组、疫苗接种组、全阴性对照组血清标本中抗TRP-1抗体的OD值依次为2.071±0.574、1.855±0.873、0.166±0.068、0.220±0.048和0.260±0.034,抗TRP-1抗体阳性率分别为92.86%(26/28)、83.33%(50/60)、0%(0/32)、0%(0/32)和0%(0/64)。HSP70检测的OD值分别为2.135±0.456、1.816±0.874、0.165±0.073、0.166±0.042和0.206±0.033,高水平的HSP70占有率分别为100%(28/28)、83.33%(50/60)、0%(0/32)、0%(0/32)和0%(0/64)。经比较HBV感染组抗TRP-1抗体与HSP70表达水平显著高于抗体组及全阴性对照组(P<0.01)。高水平的抗TRP-1抗体与HSP70表达水平呈正相关(r=0.926,P<0.01)。抗体组与全阴性对照组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大部分HBV感染者体内同时存在高水平抗TRP-1抗体及HSP70,两者呈正相关,可能是该类患者黑素细胞遭受破坏的早期标志,也是继发白癜风的重要原因。
- 王冬雪刘成刚朱美财
- 关键词：乙型肝炎病毒自身抗体热休克蛋白70白癜风
