王成济
- 作品数：179 被引量：641H指数：11
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- c-erbB-2特异性核酶基因体外转录载体的构建与快速鉴定
- 1998年
- 目的：构建ｃｅｒｂＢ２特异性的核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）基因及其靶基因的体外转录载体并探讨快速简便的筛选方法．方法：在原设计的核酶ＲＺ１基因的３′端加上新的限制性酶切位点ＥｃｏＲＶ，合成修饰后的ＲＺ１基因并将之定向克隆于载体ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－），经用ＥｃｏＲＶ正筛选和ＸｂａＩ负筛选快速鉴定出重组子并测序鉴定．结果：核酶ＲＺ１基因合成后与ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）连接，经用正负筛选法很快鉴定出了重组子并命名为ｐＧ３ＺＲＺ１，ＤＮＡ测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ位点．１６ｋｂ的ＲＺ１的靶基因也被克隆于ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）．结论：合成带有与表达载体多克隆位点相匹配的粘末端核酶基因可容易地克隆于载体．正负筛选法能简便、快速、准确地鉴定出含有核酶基因的重组子．
- 毕锋惠宏襄张学庸金明王成济樊代明
- 关键词：体外转录肿瘤核酶C-ERBB-2基因
- 重组逆病毒介导的Immunocaspase-3分泌性T细胞对ErbB2阳性乳腺癌的杀伤作用被引量：4
- 2004年
- 将Immunocaspase-3基因转染Jurkat T淋巴细胞, 使其稳定地分泌性表达靶向促凋亡蛋白Immunocaspase-3, 间接免疫荧光检测表明该蛋白可内化进入ErbB2阳性的SKBr3乳腺癌细胞, 细胞计数结果表明乳腺癌细胞的生长和增殖受到明显抑制. 进一步将Immunocaspase-3基因克隆入逆转录病毒载体pLNCX, 转染PA317细胞进行包装, 挑选高滴度的包装细胞株收获病毒. 用收获的病毒感染刺激分裂的人外周血T淋巴细胞, 经筛选后通过尾静脉注射给荷有SKBr3乳腺癌的裸鼠, 观察到肿瘤生长明显受到抑制(抑制率 73.25%), 裸鼠存活时间较对照组延长80.95%. 免疫组织化学染色结果表明裸鼠肿瘤组织中有Immunocaspase-3蛋白分布, TUNEL检测证实肿瘤细胞发生凋亡. 上述结果表明, T淋巴细胞分泌的Immunocaspase-3在裸鼠体内可以识别和进入ErbB2阳性的乳腺癌细胞, 抑制肿瘤生长.
- 张立红贾林涛赵晶许彦鸣温伟红鲍炜曹云新苏成芝王成济杨安钢
- 关键词：重组逆转录病毒ERBB2CASPASE-3阳性乳腺癌天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶
- 转运结构域的研究进展被引量：2
- 2004年
- 利用非病毒载体转运目的基因时 ,具有转运结构域的蛋白质或多肽片段可以有效地促进外源效应分子进入细胞浆 ,发挥其效应。这些转运结构域广泛的存在于毒素蛋白、病毒蛋白、转录因子、同源结构域及合成肽当中。
- 张莉赵晶杨安钢王成济
- 关键词：转运
- 凋亡诱导因子是线粒体内介导核凋亡的最主要蛋白质之一被引量：16
- 2002年
- 凋亡诱导因子 (apoptosis inducingfactor ,AIF)基因定位于X染色体上 ,其编码产物是一种可直接介导细胞核凋亡的效应分子 .鼠AIF前体蛋白在胞浆中合成后 ,通过其N端的线粒体定位信号 (MLS)有效地穿入线粒体膜间隙 ,然后在 10 2位甘氨酸处水解掉MLS ,其余部分再与黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD)结合 ,并重新折叠成为具有促凋亡潜能的成熟AIF分子 ,分子质量为 5 7ku .当凋亡信号刺激时 ,AIF分子从线粒体释放到胞浆 ,然后转位到细胞核内 ,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂 (～ 5 0kb) .该作用不受广谱caspases抑制剂z VAD .fmk的抑制 ,也不受Bcl 2过量表达的影响 .基因剔除实验表明 ,AIF蛋白的促凋亡活性是胚胎小鼠形态发生过程中类胚体成腔所必需的 ,而且是AIF独立作用的结果 ,可以不依赖caspase 3的活性 .因此AIF介导的细胞凋亡可能代表了独立于caspase通路之外的另一条更原始、更保守的凋亡途径 .
- 于翠娟孟艳玲王成济杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子细胞凋亡线粒体
- 肿瘤坏死因子在前列腺癌细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2003年
- 目的 :研究参与维甲酸诱导的前列腺癌细胞DU - 1 4 5凋亡过程的相关基因。方法 :应用浓度为 1 0 - 5mol·L- 1 全反式维甲酸作用前列腺癌细胞系DU - 1 4 5细胞 36h和 72h ,诱导DU - 1 4 5细胞凋亡 ,光镜及电子显微镜观察细胞形态及结构的改变 ,并采用基于PCR的改良消减杂交技术克隆与凋亡相关的基因。结果 :在DU - 1 4 5细胞凋亡过程中 ,有大量TNF基因及其家族成员的参与。结论 :TNF家族基因在由全反式维甲酸诱导的前列腺癌细胞系DU - 1 4 5细胞凋亡过程中 。
- 邵晨晏伟秦卫军赵忠良邵国兴王成济
- 关键词：肿瘤坏死因子前列腺癌凋亡克隆
- 野生型MTS1基因导入对人膀胱癌细胞系生长抑制作用的研究被引量：3
- 1997年
- 通过逆转录病毒载体将外源野生型ＭＴＳ１基因导入该基因功能丧失的人膀胱癌细胞系Ｔ２４中，结果发现，转染ＭＴＳ１基因的膀胱癌细胞的生长速率减低，流式细胞仪检测显示Ｓ期指数及增殖指数明显降低，电镜观察显示超微结构出现生长抑制特征，接种裸鼠无致瘤性。
- 袁建林惠宏襄王建波王建波于茂生柴玉波邵国兴邵国兴王中琨
- 关键词：野生型MTS1基因基因疗法
- 针对bcl─2RNA核酶体外切割反应的琼脂糖凝胶电泳被引量：6
- 1996年
- 目的：用琼脂糖凝胶电泳检测体外ｂｃｌ┐２ｃＤＮＡ和ＲＺＤＮＡ转录物与鉴定核酸的体外切割活性．方法：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳．结果：琼脂糖凝胶电泳可见核酶和ｂｃｌ－２ＲＮＡ转录物及其切割ｂｃｌ－２ＲＮＡ后的产物．
- 赵永同金明王刚朱峰惠宏襄王成济
- 关键词：癌基因BCL-2核酶凝胶电泳
- 反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡被引量：7
- 1996年
- 目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡。
- 朱峰王成济惠宏襄赵永同金明
- 关键词：白血病反义核糖核酸BCL-2
- 抗人精浆蛋白单克隆抗体Fab段基因的克隆及其在大肠杆菌的表达
- 2004年
- 目的 获得鼠抗人精浆蛋白单克隆抗体Fab段基因并在大肠杆菌中表达。方法 从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,用逆转录聚合酶链反应技术 (RT PCR)克隆Fd段和κ链基因 ;构建到噬粒pComb3中 ;并用ELISA、Westernblotting和免疫细胞化学分析证明表达的Fab段特异性结合人精浆蛋白。结果 从分泌抗人精浆蛋白的鼠单克隆抗体杂交瘤细胞系E4B7中克隆出了重链Fd段和κ链基因 ,经序列测定表明 ,Vκ 属于鼠免疫球蛋白ⅩⅢ家族 ,VH与鼠免疫球蛋白MUSIGHAEI同源性最高。将该Fd和κ链基因克隆到表达载体pComb3中 ,在大肠杆菌中获得了表达。结论 ELISA、Westernblotting和免疫细胞化学分析表明 。
- 杨洁郝晓柯孙脊峰赵晶于翠娟许彦鸣金明王成济杨安钢
- 关键词：单克隆抗体FAB段基因表达
- 针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较被引量：2
- 2007年
- 目的 化学合成针对乙型肝炎病毒（HBV）S基因的siRNA，同时制备针对相同区段的shRNA表达框，并比较二者对HepG2．2．15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用。方法 化学合成针对HBVS基因的带有FITC标记的siRNA，设计合成带有FTrc标记的引物，PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框，并对扩增产物进行纯化，将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，转染1d后流式细胞仪检测转染效率，转染3d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平，用SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达。收集转染前和转染后1、3、5和7d的细胞培养上清，检测HBsAg水平，同时用荧光定量PCR方法检测HBV DNA的含量。结果成功制备了针对HBVS基因的shRNA表达框，将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2．2．15细胞后，RT-PCR证实细胞中HBV mRNA水平降低，SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制，细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降。与siRNA相比，shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢，但持续时间更长。结论shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达，与siRNA相比，shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达。
- 温伟红刘家云王凯薛茜孟艳玲赵晶贾林涛薛采芳王成济杨安钢
- 关键词：乙型肝炎病毒RNA干扰SIRNA
