王桂亭
- 作品数：49 被引量：278H指数：10
- 供职机构：山东大学公共卫生学院病毒学研究室更多>>
- 发文基金：山东省卫生厅科技基金山东省中医管理局资助课题国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程生物学更多>>
- 风疹病毒JR_(23)株对中枢神经系统感染的体内和体外实验研究被引量：3
- 2001年
- 目的 研究风疹病毒 (rubellavirus ,RV )JR2 3 株感染中枢神经系统 (CNS)特性。方法 RVJR2 3 株体外感染人胚脑神经细胞、腹腔感染Balb/c小鼠 ,观察JR2 3 株在人脑神经细胞的增殖和对不同免疫状态小鼠CNS的感染及由感染导致的神经病理学特征。结果 RVJR2 3 株在人胚脑神经细胞中无明显的致细胞病变作用 ,病毒在感染后的第 72h达最高增殖滴度 10 3 TCID50 /ml。病毒抗原主要分布在人脑神经细胞胞浆。各组小鼠感染RVJR2 3 株后无明显CNS症状 ,地塞米松、环磷酰胺和药物未干预动物组CNSRV感染率分别为 6 0 %、90 %、5 0 %。受RVJR2 3 感染的小鼠脑组织出现小灶性胶质细胞增生及神经元坏死。大脑全层均有病毒抗原的分布。结论 RVJR2 3 株在人脑神经细胞和Balb/c小鼠脑组织中均能形成感染 。
- 姚苹王志玉王永康宋艳艳王桂亭杜德利许洪芝
- 关键词：风疹病毒中枢神经系统免疫学
- 风疹病毒在兔脑神经细胞中的形态与形态发生
- 1996年
- 利用超薄切片电子显微镜技术,对风疹病毒(RV)地方株JR23和标准株GOS—10在兔脑神经细胞中的形态与形态发生及其引起的细胞超微结构变化进行了观察研究。结果表明,病毒感染6h后,细胞浆中开始出现病毒核心样颗粒。其特点是:电子致密度高,分布广泛,并有一定的聚集性,核周围常见。颗粒呈圆形,直径20～30nm。在这些颗粒较集中的区域可见到大量电子致密度均一、细布纹样条块状或环状结构,有时可见到其与核心样颗粒组装过程。有包膜的病毒颗粒出现较晚,呈球形,直径50～70nm。神经元中未见到完整病毒颗粒。被RV感染的细胞超微结构变化不明显,但可见到胞核胞浆比例明显增大,胞浆中可见散在的空泡。
- 王志玉王桂亭许洪芝宋艳艳姚苹王芃
- 关键词：风疹病毒神经细胞形态学
- 副粘病毒F1蛋白胞外非保守区对其特异性膜融合的影响被引量：3
- 2005年
- 为了解融合蛋白F1分子的胞外非保守区在融合蛋白(F)与血凝素-神经氨酸酶(HN)的特异性膜融合中的作用,采用基因定点突变方法,在新城疫病毒(NDV)F1与人副流感病毒(hPIV)F1基因的胞外非保守区进行定点突变,创造酶切位点,得到分别含3个相同酶切位点的突变株NDV-M和hPIV-M。经检测,突变体的细胞融合功能与野毒株相同。然后用3个限制性内切酶分别从NDV-M与hPIV-M中切出两个片段NDVF-1、F-2及hPIVF-1、F-2。NDV-M和hPIV-M相互交换对应的F-1片段后进行基因重组,得到2个嵌合体(Chimera),即NDV-C1和hPIV-C1;同样方法交换F-2片段后又得到2个嵌合体NDV-C2和hPIV-C2。将各种嵌合体DNA与同源及异源HN基因共转染BHK21细胞后,在真核细胞中表达。Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测F蛋白的表达效率。结果表明,突变体NDV-M和hPIV-M的细胞融合功能与野毒株相同,可用于构建嵌合体。NDV-C1和NDV-C2分别与NDVHN共表达后,融合功能达到野毒株的76.34%和96.2%,与hPIVHN共表达后均无细胞融合发生;hPIV-C1和hPIV-C2分别与hPIVHN共表达后,融合功能达到野毒株的65.82%和93.78%,与NDVHN共表达后无细胞融合发生。FACS分析表明,突变体及所有嵌合体蛋白F的表达效率与野毒株相比均没有明显变化。实验结果说明在F1蛋白的胞外非保守区中,NDVF-1和hPIVF-1这两个片段对于NDV和hPIV的特异性膜融合具有重要作用;而NDVF-2和hPIVF-2这两个片段对于NDV和hPIV的膜融合来讲,则特异性较低。
- 任桂杰王志玉王桂亭宋艳艳许洪芝温红玲
- 关键词：副粘病毒融合蛋白
- 大黄乙醇提取物对小鼠疱疹性脑炎的治疗作用被引量：7
- 2003年
- 目的:研究中药大黄乙醇提取物对病毒性脑炎的治疗作用。方法:采用标准昆明鼠为动物模型,用单纯疱疹病毒I型(HSV-1)进行脑内局部接种,制成小鼠疱疹性脑炎模型,以无环鸟苷为阳性对照,用不同剂量的大黄乙醇提取物进行治疗。结果:大黄乙醇提取物可以显著提高疱疹性脑炎小鼠的存活率,延长平均存活时间,减轻脑组织的病理改变,明显消除脑内的病毒抗原,降低各个时期的病毒滴度。皮下注射给药3.3g/(kg·d)与4.9g/(kg·d)组效果优于无环鸟苷对照组。结论:中药大黄能有效地治疗由单纯疱疹病毒引起的脑炎,在体内有抗病毒作用,是一种有效的抗病毒中药,其在抗病毒领域的开发前景广阔。
- 许斌王志玉宋艳艳王桂亭王志波袁惠民
- 关键词：大黄属脑炎单纯疱疹小鼠病毒性脑炎
- 汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白M的基因克隆与序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的:建立汉坦病毒(HV)包膜糖蛋白M的克隆载体;研究M基因的变异情况,并对其序列进行系统发生树分析。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增GM04-38M片段的基因,产物纯化后克隆于PMD-18T载体,经氨苄青霉素筛选,酶切鉴定,并进行序列测定,应用DNASTAR软件将它与世界范围内分离的病毒株同一基因序列分析比较。结果:筛选出含有HVM蛋白基因的克隆。GM04-38株M片段的全基因序列共3651个核苷酸,4种核苷酸的比例分别为:A30.46%,T30.13%,G20.84%,C18.57%。序列同源分析表明,GM04-38株与Z37株核苷酸同源性最高(97.3%),属于SEO型HV。与其他SEO各株的差别均小于18.0%;绘出了核苷酸系统发生树。结论:成功地建立汉坦病毒M蛋白基因克隆载体;中国不同地区汉坦病毒流行株基因序列存在明显差异。这为研究HV遗传与变异以及制备有效的亚单位疫苗奠定了基础。
- 宋绍霞王志玉毕振强陶泽新王志强王宇露宋艳艳王桂亭
- 关键词：汉坦病毒肾综合征出血热M基因核酸序列分析基因克隆
- 风疹病毒在原代兔脑神经细胞中的增殖被引量：3
- 1996年
- 利用原代兔脑神经细胞培养、免疫荧光技术等对风疹病毒（RV）济南地方株JR23和标准野毒株Gos—10的增殖特点、抗原定位、致病性等进行了研究。结果表明,两株RV均能在神经细胞培养上增殖,但滴度不高,最高滴度为103TCID50/ml,二者生长曲线无差异。用间接免疫荧光法进行动态观察表明,两株RV均在感染12h后于细胞浆中出现荧光,144h时强度达到最高峰。荧光主要分布于细胞浆,以核周围最为明显。胶质细胞中的荧光强度比神经元中的强,感染范围也较大。神经元中病毒抗原主要分布于胞浆的核周围,树突和轴突均未见明显的荧光。两株病毒均未引起神经细胞出现明显的细胞病变。
- 王志玉姚苹宋艳艳王桂亭许洪芝王芃
- 关键词：风疹病毒原代神经细胞增殖
- 新城疫病毒F蛋白细胞融合活性位点中保守氨基酸基因突变分析被引量：11
- 2006年
- 为了确定新城疫病毒融合蛋白(F)分子上活性位点中保守氨基酸在F蛋白的细胞融合作用,弄清F细胞融合的分子机理,采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用DNA序列分析进一步确定,并于真核细胞内进行表达,Giemsa染色定性和指示基因法定量检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测表达效率情况。结果表明,NDV F第117位苯丙氨酸(F)突变成亮氨酸(L)时对细胞融合作用没有显著影响。R112和K115同为保守序列,分别突变为G时,细胞融合活性只有原来的44%,下降了56%。细胞表面表达效率没有明显的改变。N147突变为K时,细胞融合活性明显下降,只有原来的15%,而细胞表面表达效率没有明显的改变。L154为保守序列,突变为K时,细胞融合活性消失,说明L154是一个非常关键的氨基酸,对维持F蛋白的细胞融合活性非常重要。细胞表面表达效率也有所下降(为原来的94%)。D462属于高度保守氨基酸,当突变为N时,细胞融合活性消失,但经细胞表面表达效率分析证明,此突变蛋白未表达于细胞表面,证明在细胞浆转运至细胞表面的过程中发生了问题。当突变为R和E时,细胞融合活性未发生改变,但细胞表面表达效率有所下降,分别为野毒株的63%和44%。说明NDV F分子上与HN相互作用的特异性区域中的某些保守氨基酸在细胞融合中发挥着重要作用,对F蛋白的折叠、加工、转运等,发挥着不同作用,从而影响F蛋白的细胞融合作用和/或在细胞表面的表达量。
- 王志玉任桂杰温红玲宋艳艳王桂亭姚苹许洪芝张文强
- 关键词：副粘病毒融合蛋白细胞融合基因新城疫病毒
- SARS病毒E蛋白基因与EGFP基因在BHK-21细胞中的融合表达被引量：1
- 2004年
- 目的:构建SARS病毒E蛋白基因的真核表达载体,观察E蛋白基因在BHK鄄21细胞中的正常表达及定位。方法:用PCR方法扩增E蛋白基因,上、下游引物两端分别设计EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点,产物双酶切后定向克隆于pEGFP鄄N1载体,构建真核表达载体pEGFP鄄E,脂质体法转染BHK鄄21细胞,荧光显微镜观察E蛋白基因的表达。结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,E蛋白基因正确插入到增强绿荧光蛋白EGFP基因上游,荧光显微镜显示E蛋白表达于细胞浆内,包膜上也有分布。结论:在BHK鄄21细胞中成功表达了SARSCovE鄄EGFP融合蛋白,蛋白定位于细胞浆内。
- 陶泽新王志玉温红玲任桂杰宋艳艳王桂亭姚苹许洪芝
- 关键词：严重急性呼吸道综合征E蛋白转染
- 大蒜液体外抑菌作用的实验研究被引量：16
- 2006年
- [目的]研究大蒜液的体外抑菌作用。[方法]采用抑菌环试验和营养肉汤稀释法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等11种致病菌进行抑菌试验,进行了最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的实验研究。[结果]大蒜液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、腊样芽孢杆菌等11种菌株的抑菌环直径均大于7 mm;对多种常见微生物均有较强的抑菌和杀菌作用。[结论]大蒜液在体外具有明显的抑菌作用。
- 王桂亭宋艳艳王志波韩文霞许洪芝王志玉
- 关键词：大蒜抑菌作用抑菌环最小抑菌浓度
- 马钱子及黄连混合提取物抑菌作用的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的:研究马钱子、黄连提取物的体外抑菌作用。方法:采用抑菌环实验和营养肉汤稀释法对其抑菌效果进行实验观察。结果:含马黄生药15mg/mL的提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌等7种细菌的抑菌环直径均大于7mm。马黄提取物对蜡样芽孢杆菌、溶血性链球菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.469mg/mL。结论:马黄提取物在体外具有明显的抑菌作用。
- 宿广峰王桂亭吴冰
- 关键词：马钱子黄连抑菌作用
