王红革 作品数:9 被引量:43 H指数:4 供职机构: 中山大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 文化科学 医药卫生 农业科学 更多>>
用加端PCR技术改造h-IGF-1cDNA 被引量:1 1996年 用DNA合成仪合成了分别带有PstI位点和SalI位点及终止密码子的2个用于扩增hIGF-1cDNA的PCR引物.利用合成的引物,700bp长的hIGF-1cDNA模板和Taq聚合酶进行PCR扩增.扩增产物经电泳鉴定后克隆进M13mp18载体,进行核苷酸序列分析.结果显示:PCR产物含已发表的hIGF-1成熟蛋白的编码序列和5'端的PStI位点及3'端的SaiI位点及终止密码TAG.用加端PCR技术成功地扩增和改造了hIGF-1的编码序列. 罗进贤 吉坤美 张添元 王红革关键词:聚合酶链反应 胰岛素 DNA 含笑属叶绿体基因组限制位点变异性研究 被引量:2 1994年 采用不连续蔗糖梯度离心法分别提取白兰(Michelia alba DC.)和含笑(Michelia figo spreng.)叶绿体DNA。经BamHI酶切后,白兰和含笑分别产生21和25个片段,其中白兰的各酶切片段在含笑的限制酶图谱对应位置均观察到,白兰和含笑叶绿体基因组大小分别为139.74和143.18kb。两基因组间的遗传距离为0.029。叶绿体DNA限制酶酶切分析可以在分子水平上讨论植物间的系统关系。 王艇 罗进贤 张宏达 张添元 李文清 王红革关键词:叶绿体 基因组 含笑属 枯草杆菌启动子-信号肽序列的克隆及序列分析 被引量:5 1994年 利用含红霉素抗性基因和缺启动子-信号肽序列的氨苄青霉素抗性基因的双功能质粒pGPB14为探针载体,克隆了枯草杆菌的启动子-信号肽序列并对克隆的片段进行序列分析。枯草杆菌染色体DNA经Sau3A酶解后与BomHI酶切的质粒pGPB14连接,转化大肠杆菌C600,筛选抗氨苄青霉素及抗红霉素的转化子,从双抗性转化子中提取重组质粒并经酶切分析,显示克隆的DNA片段在0.27-1.5kb之间。用Sanger的双脱氧链终止法测定了10个克隆片段的DNA顺序,结果表明,克隆的片段都含有启动子、核糖体结合优点及信号肽序列。克隆片段可以在大肠杆菌和枯草杆菌中恢复氨苄青霉素抗性的表型。β-内酰胺酶活力测定结果证明:大肠杆菌的酶活力主要积累在周质空间内而枯草杆菌的酶活力主要分泌到胞外。 罗进贤 李文清 张添元 柴戍杰 王红革关键词:枯草杆菌 启动子 信号肽 枯草杆菌分泌载体的构建及淀粉酶基因和猪生长激素基因的表达与产物的分泌 王红革分泌载体pUS186的构建及地衣杆菌α-淀粉酶基因在枯草杆菌中的表达和分泌 被引量:5 1994年 利用枯草杆菌的分泌系统构建分泌型表达载体表达和分泌外源基因产物具有重要的商业价值。我们用鸟枪法克隆了枯草杆菌染色体的启动子和信号肽序列,将克隆的序列连接到能在枯草杆菌中复制的质粒pUB18上,获得分泌型表达载体pUS186。为了测试构建的载体pUS186的功能,将地衣杆菌α-淀粉酶基因的缺失了启动子和信号肽序列的片段重组进该质粒,经过Bal31酶切,T4DNA聚合酶补齐等处理,获得pUSA186Ⅱ及pUSA186Ⅰ系列质粒,将这些重组质粒转化枯草杆菌QB1130(amy-)后都能向胞外分泌淀粉酶,酶活测定结果表明,基因表达水平比用原有的启动子高1-2倍,蛋白质分泌率在84-96%之间。 李文清 罗进贤 王红革 张添元关键词:枯草杆菌 信号肽 枯草杆菌表达载体pUB23的构建及地衣杆菌α-淀粉酶基因的表达 1993年 将克隆的解淀粉芽胞杆菌强启动子经DNA序列分析后连接到能在枯草杆菌中复制的质粒pUB18上,构建枯草杆菌表达载体pUB23。为了测试构建的表达载体能否表达外源基因,将地衣杆菌抉失了启动子的α-淀粉酶基因接到pUB23上启动子的下游,组建重组质粒,转化枯草杆菌QB1130(amy^-),获得能分泌α-淀粉酶的转化株,证明缺失了启动子的结构基因在pUB23上克隆启动子的启动下获得表达。酶活力测定结果表明,表达水平是用原启动子时的2.5倍. 罗进贤 李文清 王红革 朱碧瑜关键词:枯草杆菌 地衣芽孢杆菌α—淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的诱导表达 被引量:27 1997年 采用PCR技术扩增了sacB基因的启动子-信号序列,并将扩增的序列重组进含地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因的质粒载体上构建了含α-淀粉酶基因的分泌型表达载体pSA60。将pSA60转化枯草芽孢杆菌QB1098后,α-淀粉酶基因在sacB基因启动子-信号序列的调控和蔗糖的诱导下获得表达,表达产物分泌至胞外。 王红革 李文清 徐柏年 罗进贤关键词:Α-淀粉酶基因 地衣芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 猪生长激素cDNA在芽孢杆菌中的表达 被引量:7 1993年 利用随机克隆的枯草杆菌启动子-信号序列构建茅孢杆菌分泌载体pUS186。用限制酶将切除了信号序列的猪生长激素cDNA从质粒pLY3-PGH 604切下,亚克隆至pUS186,并在该cDNA的下游接上地衣杆菌α-淀粉酶基因的转录终止子,构建猪生长激素表达质粒pSGH 1864,将此质粒转化蛋白酶双缺陷的枯草杆菌DB104及短小茅孢杆菌289。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检出在发酵上清液中多出一条22kD的蛋白带,抗猪生长激素血清免疫印迹法证明这一蛋白带具有免疫活性,表明猪生长激素cDNA已在枯草杆菌及短小茅抱杆菌中表达。 李文清 王红革 罗进贤 岑英华关键词:生长激素 基因表达 枯草杆菌 利用生物工程菌作为鸡饲料添加剂的研究 被引量:2 1997年 通过用分泌猪生长激素的生物工程短小芽孢杆菌Bp962和分泌淀粉酶的生物工程枯草芽孢杆菌Bs964以及分泌淀粉酶的天然枯草芽孢杆菌As963作为微生物饲料添加剂进行鸡饲养试验发现,分泌淀粉酶的Bs964具有显著的促生长和提高饲料转化率的作用,而Bp962和As963菌的促生长和提高饲料转化率方面的作用不明显,3种菌均具有改善鸡消化道微生态环境,防止有害细菌侵袭的作用。 雷秋波 王红革 林继球关键词:饲料添加剂