罗奋华
- 作品数：47 被引量：125H指数：6
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金教育部“春晖计划”长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 用精原干细胞移植技术制作转基因动物的研究前景被引量：10
- 2005年
- 在生物科学、生物医学、畜牧业科学和生物反应器的研究中,转基因动物是非常有用的工具.然而,最常用的制作转基因动物的方法,如原核显微注射和核移植效率都非常低.在最近10年中,研究人员利用精原干细胞移植技术发明了一系列新方法.其中的一些方法一旦与遗传修饰方法相结合,就会形成一套制备转基因动物的新方法.本文综述了与转基因动物制作相关的精原干细胞移植研究成果,如精原干细胞移植技术、精原干细胞的冷冻保存方法、精原干细胞移植受体的准备、精原干细胞的长期增殖和传代培养、精原干细胞的遗传修饰及外源基因的遗传特性等,描述了用精原干细胞移植技术制作转基因动物的一整套方法.根据所用供体和受体的不同,将这种新的转基因动物制作方法分为两类:同种移植法和同体移植法.这一研究领域的进展虽然迅速,但是每一种方法仍然有潜在的困难有待于克服.本文对这些新方法的优点和目前存在的问题进行了探讨.
- 吴应积罗奋华旭日干
- 关键词：精原干细胞睾丸转基因动物哺乳类干细胞移植生物科学
- 绒山羊GDNF基因的克隆及其对精原干细胞增殖分化调控的研究
- GDNF(glial cell live-derived neurotrophic factor)对精原干细胞自我更新和分化有着重要的调控作用.在睾丸组织中,Sertoli 细胞分泌产生 GDNF,作用于精原干细胞表面的...
- 苏慧敏罗奋华张岩张学明侯越吴应积
- 文献传递
- 大鼠发育第6天与第8天睾丸组织基因表达差异的分析
- 2011年
- 目的检测大鼠精原干细胞早期发育过程中第6天与第8天睾丸组织的差异表达基因。方法通过基因芯片技术，利用Roche．Nimble Gen公司大鼠12×135K全基因组表达谱芯片分别与第6天和第8天睾丸组织的cDNA进行杂交。比较两个样品差异表达的基因。结果差异表达基因700个，表达上调的基因共295个，表达下调的基因共405个。参与了1407个基因功能分析条目；参与了46个生物学通路。结论大鼠精原干细胞早期发育过程中，精原干细胞的发生与增殖是一个多基因参与、多因素作用和多阶段进展的过程。
- 刘陶迪罗奋华于泊洋萨初拉吴应积
- 关键词：精原细胞寡核苷酸序列分析干细胞
- 6天龄与10天龄大鼠的睾丸组织的基因差异表达被引量：1
- 2012年
- 通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12×135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的基因共2420个。这些差异表达的基因中有3154个基因具有基因本体注释,参与了154个生物学通路。进一步分析表明具有8倍以上差异表达的基因有13个,这些基因参与了生物学过程、细胞组分和分子功能等基因本体分类,进一步选择3个差异表达的基因,LOC686076、Cxcl6和Trib3,做了实时定量RT-PCR检测。其结果趋势与芯片数据一致。因此,我们初步认为精原干细胞的发生与增殖在大鼠早期的发育过程中已经有大量的基因参与,是一个多基因协调表达的过程。
- 刘陶迪罗奋华于泊洋吴应积
- 关键词：睾丸组织精原干细胞基因芯片
- 用体外培养的牛乳腺上皮细胞检测乳腺生物反应器表达载体的方法
- 乳腺生物反应器的制备是生物工程领域研究的热点。然而乳腺生物反应器研究和开发的周期长,成本大,风险高。因此,在生产转基因动物之前对所构建的乳腺特异表达载体的合理性和有效性进行检测是非常必要的。目前,国内外普遍采用制作转基因...
- 多曙光吴应积罗奋华旭日干
- 文献传递
- 抗体分离纯化技术的研究进展被引量：6
- 2008年
- 制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体质量的高低,将直接影响试验的成败。抗体的制备有两个途径:一是一般通用的方法,以纯化的抗原免疫动物,获得多克隆抗体;二是应用杂交瘤技术制备单克隆抗体。但不论用何种技术制备的抗体都需要进行纯化。重要的是根据抗体的性质和来源选择一个合适的分离纯化方法。对当前的纯化方法进行了一个简要的综述。
- 侯越罗奋华吴应积
- 关键词：抗体纯化
- 蒙古绵羊tnp1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析
- 2009年
- 过渡蛋白1基因(tnp1)是圆形精子细胞特异表达的基因。绵羊tnp1基因的DNA序列至今尚未报道。为了开展绵羊圆形精子细胞标记基因的研究,根据其他物种tnp1基因cDNA的保守序列设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法,克隆了蒙古绵羊tnp1基因cDNA全编码区。该基因cDNA长246bp,包含一个168bp的ORF,编码含有54个氨基酸的多肽链。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为94.0%。绵羊tnp1基因的cDNA克隆和序列测定为进一步研究绵羊精子发生过程奠定了基础。
- 白音巴图胡甜园罗奋华侯越吴应积
- 关键词：绵羊
- 用精原干细胞移植技术制作转基因动物的研究前景
- 在生物科学、生物医学、畜牧业科学和生物反应器的研究中,转基因动物是非常有用的工具。有多种方法产生转基因动物。最通用的制作转基因动物的方法是原核显微注射法和核移植法。然而, 这些方法往往效率很低,引起嵌合体(在原核显微注射...
- 吴应积罗奋华旭日干
- 文献传递
- 大鼠精原干细胞的高效分离和纯化方法被引量：6
- 2011年
- 精原干细胞是精子发生的基础，是永久分化成精子的克隆源，它既可以自我更新维持体内干细胞的数量，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22～25日龄Wistar．Iamichi大鼠为研究对象，利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液，根据精原干细胞与曲细精管细胞悬液中体细胞（支持细胞及少量的管周细胞）及各级分化的生精细胞贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同，将大鼠精原干细胞进行纯化。经纯化后，5只大鼠的睾丸可以得到约3×10’个精原干细胞，该精原干细胞在体外培养可形成克隆，并且该克隆可表达精原干细胞特异的标记基因GFRal和CDHl。本文所介绍的高效分离和纯化大鼠精原干细胞的方法，操作简便，且得到的精原干细胞具有很高的活力和增殖能力，该方法为今后大鼠精原干细胞的长期培养及操作研究奠定了基础。
- 张岩罗奋华刘林洪萨初拉于泊洋吴应积
- 关键词：精原干细胞
- 食蟹猴精原干细胞分离纯化及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的掌握食蟹猴精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,建立食蟹猴精原干细胞分离、纯化、培养及初步鉴定的方法。方法经手术获取2岁14天食蟹雄猴单侧睾丸,采用三步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集精原干细胞。将细胞培养于经丝裂酶素C处理的STO细胞层上,使用添加神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、GDNF家族受体α(GFRa1)三种重要生长因子的无血清培养液体外培养,20d后采用CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR对培养的食蟹猴细胞进行SSCs初步鉴定。结果通过差异贴壁法分离纯化富集的SSCs,接种到丝裂霉素C处理的STO饲养层细胞上,第2天开始分裂增殖。用含有生长因子的培养基培养2 d细胞形成小集落,5 d后细胞集落明显。培养20 d后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经CDH1标记分子免疫荧光染色和RT-PCR均呈阳性表达。结论本研究成功建立食蟹猴精原干细胞的分离纯化及鉴定体系。基于STO饲养细胞的添加GDNF、b FGF和GFRa1三种生长因子的无血清培养体系可用于食蟹猴精原干细胞培养,CDH1可作为食蟹猴精原干细胞鉴定的标志物。
- 陈鑫苹许邦发罗奋华张培周红桃蔡俊宏吴应积符生苗
- 关键词：食蟹猴精原干细胞分离纯化免疫荧光染色
