胡少勃
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性和示踪标记被引量：7
- 2010年
- 目的 建立大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的分离和培养方法,观察绿色荧光蛋白（GFP）基因通过慢病毒载体感染MSCs的表达.方法 采用原代贴壁法获得骨髓MSCs,观察细胞形态和生长变化,流式细胞仪鉴定细胞表面标志,体外诱导MSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化.采用含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因慢病毒载体感染培养的MSCs,比较细胞感染前后生物学特性.结果 原代贴壁筛选结合差异传代培养的MSCs表面标志阳性率分别为CD44 94.81%,CD90 99.53%,CD106 76.34%,MSCs在pH值稳定于7.2～7.4的环境可传20代.体外MSCs诱导分化后特异性染色显示脂质沉淀和骨结节,表达脂肪细胞和成骨细胞特异基因.慢病毒载体可有效感染大鼠MSCs,加入聚凝胺感染效率达到80%,EGFP在MSCs感染后1个月仍持续表达.结论 骨髓MSCs可长期培养,具有良好的多向分化能力.携带EGFP基因慢病毒载体能高效感染MSCs,EGFP可作为MSCs体内研究的示踪标记.
- 聂君李劲松王建军胡少勃江科杨振华
- 关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒绿色荧光蛋白
- 大鼠主动脉内皮细胞和平滑肌细胞的原代培养及生物学特性比较被引量：4
- 2009年
- 目的培养大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞,细胞纯化与鉴定,比较生物学特性的差异。方法采用血管环贴壁法培养动脉内皮细胞,组织块贴壁法培养动脉平滑肌细胞,并采用有限稀释法挑选内皮细胞单克隆,免疫细胞荧光鉴定二者的特异性标志,相差显微镜观察二者单个细胞及细胞群体在形态上的差异性,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,比较二者对胰酶消化,粘附,冻存后复苏的情况。结果血管环贴壁法成功培养血管内皮细胞,组织块培养法成功培养出血管平滑肌细胞,内皮细胞能够形成单克隆集落,培养的细胞均表达相应的特异性标志,内皮细胞增殖速度和平滑肌细胞有差异,内皮细胞对胰酶的耐受性较差,内皮细胞粘附所需时间短,对冻存后的耐受性较好。结论组织块贴壁法适合内皮细胞和平滑肌细胞的培养,有限稀释法能够纯化原代培养的内皮细胞,大鼠主动脉平滑肌细胞和内皮细胞在细胞形态、增殖、粘附、对胰酶的反应、冻存后复苏均存在差异。
- 胡少勃宋自芳郑启昌聂君
- 关键词：内皮细胞平滑肌细胞平滑肌样细胞
- 微小RNA-221对肝细胞癌第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因的调节及其对生物学特性的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察微小RNA（miRNA，miR）-221在正常肝细胞和肝癌细胞株中的表达，检测miR-221在正常肝组织和肝癌组织中的表达，并干预肝癌细胞中miR-221水平探讨其对第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）的调控和对肝癌细胞生物学特性的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应法检测miR-221在正常肝细胞和肝癌细胞株中的表达，收集28例伴有门静脉癌栓的肝细胞癌手术患者正常肝组织、癌栓、癌组织和癌旁组织并检测其表达；采用miR-221抑制剂（inhibitor）和拟似物（mimic）靶向干预miR-221在肝癌细胞中的表达，Westernblot法检测其对PTEN的调控，以及细胞计数试剂盒（CCK-8）法、流式细胞仪和Transwell法检测其对肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移的影响。结果肝癌HepG2、BEL-7402和Hep3B细胞的miR-221相对表达量分别为0．783±0．021、0．954±0．021、0．837±0．026，显著高于正常肝102细胞的0．081±0．007（P〈0．05），且肝癌组织和癌栓的相对表达量为0．897±0．048、0．984±0．048，亦显著高于正常肝组织和癌旁组织的0．067±0．007、0．063±0．008（P〈0．05），而肝癌细胞的PTEN的表达水平显著低于正常肝细胞（P〈0．05），且肝癌组织和癌栓亦低于正常肝细胞（P〈0．05）；与对照组比较，miR-221inhibitor和mimic转染肝癌细胞后，PTEN表达水平分别上调和下调263％和32％（P〈0．05），转染miR-221inhibitor肝癌细胞的增殖和迁移活性降低，凋亡率增加（P〈0．05），而转染miR-221mimie肝癌细胞则增殖和迁移活性增加，凋亡率降低（P〈0．05）。结论肝癌细胞和肝癌组织、癌栓中miR-221呈高表达，降低其水平能上调VrEN的表达，有效降低细胞增殖和迁移活性，诱导细胞凋亡，是肝细胞癌的潜在治疗靶点。
- 李民胡少勃汪岩孙平程翔郭兵宋自芳张勇郑启昌
- 关键词：肝细胞癌肿瘤形成
- 表达人乳头瘤病毒16型E7蛋白的实体瘤模型的建立和鉴定
- 2008年
- 目的建立并鉴定表达人乳头瘤病毒16型（HPV 16）E7蛋白的实体瘤模型。方法携带有野生型HPV 16 E7基因的重组质粒pcDNA3．1-E7用限制性内切酶及序列测定进行鉴定。采用脂质体将重组质粒pcDNA3．1-E7转染小鼠淋巴瘤细胞RMA，经G418筛选获得稳定转染细胞单克隆，并用RT—PCR方法检测稳定转染细胞HPV 16 E7 mRNA。将转染细胞接种于C57BL／6小鼠，肿瘤形成后，用Western blot分析检测E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达。结果酶切及测序证实目的基因DNA序列、插入位点及方向均正确。RT—PCR检测显示HPV 16 E7能在RMA转染细胞中稳定表达。RMA转染细胞可在小鼠体内成瘤，且Western blot分析表明E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达较体外高。结论2．5×10^4个RMA—E7细胞可在小鼠体内成瘤，并且体内E7蛋白表达比体外高．可能导致免疫耐受。
- 郑启昌胡少勃宋自芳汪谢丹
- 关键词：实体瘤肿瘤特异性抗原乳头瘤病毒基因转染
- 成人卵黄管残留11例的临床分析被引量：1
- 2018年
- 目的总结成人卵黄管残留的临床特点，探讨成人卵黄管残留的诊断和治疗策略。方法回顾性分析2012年6月至2017年5月华中科技大学同济医学院附属协和医院收治的11例成人卵黄管残留患者的临床资料。结果本组11例患者中男8例，女3例：中位年龄为50岁（18～57岁）；其中Meckel憩室9例，卵黄管囊肿2例；2例伴异位组织，3例伴溃疡出血，1例继发腹内疝伴肠梗阻，2例继发感染。病理诊断与术前诊断相符的有5例，均为Meckel憩室。随访时间为6个月～2年，均未出现术后并发症。结论成人卵黄管残留多为Meckel憩室和卵黄管囊肿，多无特异性症状。卵黄管残留有恶变的风险，手术切除残留卵黄管为主要的治疗方法。
- 徐剑军程翔胡少勃周星王立宇王为民郑启昌
- 关键词：卵黄管腹壁外科手术
- 骨髓间充质干细胞参与移植物动脉硬化的机制研究
- 研究背景移植物动脉硬化是各种器官移植物发生慢性移植物失功的共同病理变化。移植物动脉新生内膜增生所致管腔狭窄，引起移植器官的血供不足和纤维化，被认为是移植物功能进行性恶化的首要原因。近来研究发现新生内膜平滑肌细胞是受体起源...
- 胡少勃
- 关键词：移植物动脉硬化慢性移植物失功骨髓间充质干细胞血管平滑肌细胞内膜增生慢病毒
- 文献传递
- SM22α启动子慢病毒载体的构建及感染研究
- 2009年
- 目的 构建以SM22α启动子驱动EGFP表达的慢病毒载体,研究此载体在血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）中表达的效率和特异性.方法 从小鼠的基因组中采用PCR扩增SM22α启动子,将目的基因连接至T载体,并进行测序鉴定,将目的基因重组至pGC-FU载体,三质粒系统采用脂质体介导转染293T细胞进行病毒包装,体外感染VSMCs,大鼠动脉内皮细胞,人乳腺癌细胞系SK-BR-3,荧光显微镜观察EGFP的表达情况.结果 PCR扩增得到的SM22α启动子经测序证实正确;成功构建了SM22α启动子驱动EGFP的慢病毒载体LV-SM22α-EGFP,SM22α启动子能调控EGFP在VSMCs中高效表达,感染效率在95%以上,在血管内皮细胞和人乳腺癌细胞系SK-BR-3中不表达,对照慢病毒组EGFP在三种细胞中均表达,在VSMCs的感染效率在30%左右,且表达较低.结论 SM22α启动子能够特异性驱动EGFP在VSMCs中表达,LV-SM22α-EGFP能作为研究血管疾病的良好基因转移载体.
- 胡少勃宋自芳郑启昌李伟胡青钢熊俊张勇尚丹
- 关键词：慢病毒血管平滑肌细胞聚合酶链式反应
