蒋攀
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肿瘤靶向性VEGF-SLC融合蛋白的原核表达及活性鉴定
- 目的：为了将肺癌靶向治疗和自体免疫增强疗法相结合,本研究扩增血管内皮生长因子(VEGF)和次级淋巴组织趋化因子(SLC)的融合基因,构建VEGF-SLC融合基因的原核表达质粒pQE30-VEGF-SLC,在E.coli中...
- 蒋攀
- 关键词：肿瘤靶向性融合蛋白原核表达质粒人外周血淋巴细胞SLCVEGF
- VEGF-SLC融合基因的克隆与原核表达
- 2011年
- 目的构建血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)-次级淋巴组织趋化因子(Secondary lym-phoid-tissue chemokine,SLC)融合基因(VEGF-SLC)的原核表达质粒,表达并纯化重组VEGF-SLC融合蛋白。方法利用GeneSOEing法扩增VEGF-SLC基因,将融合基因插入载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-SLC,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化。结果重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约28 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的19%,主要以包涵体形式存在,可与鼠抗人VEGF单抗特异性结合;纯化的重组融合蛋白纯度可达90%以上。结论已成功在大肠杆菌中表达并纯化了重组VEGF-SLC融合蛋白,为进一步研究其生物学活性及其靶向抗肿瘤效应以及开发肺癌等肿瘤的靶向生物制剂奠定了基础。
- 蒋攀陈全郑毅刘革力张璐瑜
- 关键词：血管内皮生长因子类重组融合蛋白质类原核细胞
- 靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白的原核表达、纯化及其体外活性被引量：2
- 2012年
- 目的原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应。方法从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF-α-Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,转化至大肠杆菌M15中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Western blot分析重组蛋白的反应原性。经Ni-AgaroseHis标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-Gal模拟表位的体外抗肿瘤活性。结果重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的15%,主要以包涵体形式表达;重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度约为90%,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-Gal模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应。结论成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础。
- 郑毅陈全蒋攀刘革力张路瑜
- 关键词：肿瘤靶向性血管内皮生长因子类重组融合蛋白质类
