郑毅
- 作品数：6 被引量：4H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向性抗肿瘤VEGF-aGal融合蛋白的原核表达及其体外活性
- 目的:为了将肺癌的靶向治疗和免疫治疗相结合,本研究扩增了VEGF-α-Gal融合基因,构建原核表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,在大肠杆菌M15内诱导表达rVEGF-α-Gal融合蛋白,并在体外细胞水平上研究重组...
- 郑毅
- 关键词：融合蛋白原核表达质粒WESTERN-BLOT法
- 靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白的原核表达及其体外活性
- 目的: 为了将肺癌的靶向治疗和免疫治疗相结合,本研究扩增了VEGF-α-Gal融合基因,构建原核表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,在大肠杆菌M15内诱导表达rVEGF-α-Gal融合蛋白,并在体外细胞水平...
- 郑毅
- 关键词：肿瘤靶向性VEGFΑ-GAL
- 文献传递
- HIBD新生鼠Foxg1基因与脑皮质特定基因表达的相关性
- 研究背景：新生儿窒息致缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbrain damage，HIBD)是新生儿期常见的临床疾病，已成为导致儿童脑瘫、严重危害新生儿健康成长的重要原因。2003年我国进行第二次多中心治...
- 郑毅
- 关键词：新生儿缺氧缺血性脑损伤基因表达
- 文献传递
- 肿瘤特异性锚定型α-gal模拟表位真核表达质粒的构建及功能研究被引量：2
- 2010年
- 目的构建Survivin启动子调控的、α-gal模拟表位序列和GPI锚定序列融合基因的真核表达质粒,研究该质粒在肺癌A549细胞表面锚定表达α-gal模拟表位及其抗肺癌细胞效应。方法 PCR法扩增gal-GPI融合基因,以pSGFP质粒为载体,构建Survivin启动子调控的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒。将其用脂质体瞬时转染A549细胞后,用荧光显微镜观察GPI锚定表达功能,分别用免疫组化法和Western-blot法对锚定表达的α-gal模拟表位进行定位和免疫反应性分析,并用新鲜人血清对表达α-gal模拟表位的A549细胞进行补体介导的溶细胞效应研究。结果 pSGFP-gal-GPI质粒转染细胞的绿色荧光不均匀分布在细胞膜周围,免疫细胞化学分析表明重组融合蛋白表达在细胞膜上,Western-blot结果表明重组融合蛋白与人IgG有良好的免疫反应性;人新鲜血清对表达该表位的A549细胞具有明显的溶细胞效应。结论成功构建了能在A549细胞膜锚定表达α-gal模拟表位的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒,为肺癌等靶向基因治疗奠定了基础。
- 郭荫广陈全郑毅候艳刘革力张璐瑜
- 关键词：肿瘤特异性真核表达质粒肺癌
- VEGF-SLC融合基因的克隆与原核表达
- 2011年
- 目的构建血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)-次级淋巴组织趋化因子(Secondary lym-phoid-tissue chemokine,SLC)融合基因(VEGF-SLC)的原核表达质粒,表达并纯化重组VEGF-SLC融合蛋白。方法利用GeneSOEing法扩增VEGF-SLC基因,将融合基因插入载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-SLC,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化。结果重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约28 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的19%,主要以包涵体形式存在,可与鼠抗人VEGF单抗特异性结合;纯化的重组融合蛋白纯度可达90%以上。结论已成功在大肠杆菌中表达并纯化了重组VEGF-SLC融合蛋白,为进一步研究其生物学活性及其靶向抗肿瘤效应以及开发肺癌等肿瘤的靶向生物制剂奠定了基础。
- 蒋攀陈全郑毅刘革力张璐瑜
- 关键词：血管内皮生长因子类重组融合蛋白质类原核细胞
- 靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白的原核表达、纯化及其体外活性被引量：2
- 2012年
- 目的原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应。方法从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF-α-Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,转化至大肠杆菌M15中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Western blot分析重组蛋白的反应原性。经Ni-AgaroseHis标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-Gal模拟表位的体外抗肿瘤活性。结果重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18 000,诱导5 h表达量最高,约占菌体总蛋白的15%,主要以包涵体形式表达;重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度约为90%,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-Gal模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应。结论成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础。
- 郑毅陈全蒋攀刘革力张路瑜
- 关键词：肿瘤靶向性血管内皮生长因子类重组融合蛋白质类
