蔡海明
- 作品数：19 被引量：26H指数：3
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广州市科技攻关项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 5'非翻译区序列改建提高抗菌肽PR39表达被引量：5
- 2013年
- 目的:在毕赤酵母SMD1168中高效表达抗菌肽PR39,并检测其抗菌活性。方法:根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成4条寡核苷酸片段,通过重叠PCR获得PR39核苷酸序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-PR39经PCR敲除PR39 5'端多余的长度为24bp的核苷酸序列得到pPIC9K-PR39-D,再经PCR、酶切连接构建5'UTR已删除8个核苷酸GGATCCAA的新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E;pPIC9K-PR39-D-E转化到毕赤酵母SMD1168,经PCR鉴定及G418筛选,用0.5%的甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE分析,再利用琼脂糖扩散法测定发酵上清的抗菌活性,表达产物经反相层析及SP-Sepharose层析柱纯化测定其表达量。结果:经Tricine-SDS-PAGE检测,在4.7kDa左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后测定蛋白浓度表达量约为175.6mg/L。获得的抗菌肽PR39对E.coli DH5α,有明显抑菌活性。结论:经改建后新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E在毕赤酵母中可高效表达抗菌肽PR39,为以后深入研究毕赤酵母高效表达抗菌肽奠定了基础。
- 明飞平杨军朱进美邝哲师李华周夏枫耿叶明强王候光赵祥杰黄志丰蔡海明施巨清马苗鹏张玲华
- 关键词：抗菌肽分泌表达抗菌活性
- 猪Sirt5基因的克隆及其腺病毒载体的构建和鉴定被引量：1
- 2016年
- 为了从猪脑中克隆得到Sirt5基因,并构建腺病毒载体,提取长白猪脑组织总RNA,利用RT-PCR和PCR扩增得到Sirt5基因。再将此基因克隆至穿梭载体上,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-IRES-Sirt5。经酶切线性化,电击转化已含骨架载体pAdEasy-1DNA的BJ5183+感受态菌,得到重组腺病毒质粒Ad-Sirt5。重组腺病毒质粒经酶切线性化鉴定。结果本试验获得的Sirt5基因与NCBI公布序列一致。利用细菌同源重组技术构建重组腺病毒载体,经酶切鉴定正确。表明本试验成功克隆得到Sirt5基因,并成功构建Sirt5基因的腺病毒载体。
- 黄魁英冯永达明飞平肖安吉卢志鹏楚品品黄瀚威谭家裕夏枫耿黄朝远杨军蔡海明马苗鹏张玲华
- 关键词：腺病毒
- 重组枯草芽孢杆菌诱导表达AiiA及酶活性鉴定被引量：1
- 2018年
- [目的]由于AiiA(Autoinducer inactivation,AiiA)蛋白能有效降解AHLs(N-acyl-homoserine,AHLs),导致病原菌由于群体淬灭(Quornm quenching,QQ)失去生存优势而抑制其致病能力;利用强启动子构建能高效表达AiiA蛋白的枯草芽孢杆菌,检验枯草芽孢杆菌中Pspac启动子表达AiiA蛋白的能力,寻求有效生物防治手段防治病原菌侵害。[方法]通过已知的aiiA基因序列和启动子Pspac序列设计引物,经搭桥PCR搭连启动子Pspac和aiiA基因,构建重组表达载体Pspac-aiiA-PHY300PLK,经酶活反应确定重组菌活性。[结果]成功克隆并搭连Pspac启动子和aiiA基因,AiiA蛋白成功在重组枯草芽孢杆菌C11中表达。经酶活检验,野生菌株和重组菌株Pspac-aiiA-C11有降解信号分子AHLs的能力,但重组菌降解能力更强。[结论]重组菌Pspac-aiiA-C11较野生菌株有更强的降解AHLs效力;要利用工程菌进行生物防治还需进一步提高工程菌表达AiiA蛋白的能力及稳定性。
- 梁倩怡明飞平贾军皓赵培静李姣清邓锦波张淑霞曾敏蔡海明马苗鹏张玲华
- 关键词：AIIA基因枯草芽孢杆菌
- 改良推注方法制备脂肪移植SVF胶的实验研究被引量：4
- 2019年
- 目的探讨改良推注法与常规推注法制备基质血管成分(stromal vascular fraction, SVF)胶的效果。方法分别采用改良推注法和常规推注法从抽吸获取的脂肪组织中分离制备SVF胶,并对所获取的SVF胶进行细胞计数、增殖率、细胞成活率、细胞碎片率等生物学特性进行检测。结果改良推注法获取的SVF胶的细胞成活率较高(P<0.05),细胞凋亡、细胞碎片率显著低于常规推注法(P<0.05)。结论采用改良推注法制备脂肪移植SVF胶更加快捷、方便,并且可提高移植细胞的成活率、降低细胞碎片率,在疾病治疗及创伤修复中有较好的应用前景。
- 冯春朝卢沛伶黄婧蔡海明巫国辉张玲华聂云飞
- 关键词：脂肪来源干细胞机械分离酶解法
- 一种高效抗炎性PB ODN序列及其应用
- 本发明属于生物制药技术领域，具体公开了一种高效抗炎性PB？ODN序列及其应用，所述序列如SEQ？ID？NO：1所示，该序列具有高效抗炎作用；含有该序列的制剂非常有利于控制猪疾病和炎症，可成功实现替代或部份替代抗生素，从而...
- 张玲华周洁安蔡海明马苗鹏
- 一种防瞌睡座椅
- 本发明公开了一种防瞌睡座椅，包括座椅本体、压力传感器、单片机、提醒杆以及控制所述提醒杆移动的驱动机构，所述座椅本体的椅面上开设有杆孔、所述提醒杆连接于杆孔中，压力传感器设置于座椅本体的椅面上，压力传感器与单片机连接；在设...
- 王玉兴赵立新林林勇林晓润蔡海明郑可煌陈柏陶
- 文献传递
- 不同非接触式超声波处理获得脂肪源基质血管组分细胞方法的比较被引量：2
- 2019年
- 背景:探索能够高效、稳定获取基质血管组分细胞的方法对于临床应用有非常重要的价值。目前分离基质血管组分的方法主要包括酶解法、推注破碎法、接触式超声波破碎法等,存在安全性和细胞存活率低、材料污染等不足,而非接触式超声波破碎法则能很好的解决这个问题。目的:寻找一种最优的非接触式超声波处理获得脂肪源基质血管组分细胞的方法。方法:实验所用人体脂肪组织(皮下脂肪)由广州中家医家庭医生整形美容医院提供,体检无其他基础疾病,取材前均获知情同意并签署知情同意书。以3种不同的超声波仪器(超声波清洗仪功率约为800 W、超声波细胞破碎仪功率约为1 000 W、非接触式超声波细胞破碎仪功率约为1 200 W)对脂肪材料进行非接触式超声处理15,20,25 min,以接触式超声波细胞破碎法为对照,功率为100 W,超声处理16 s,分别检测基质血管组分细胞大小、存活数量、细胞活力、细胞碎片率和微生物感染度。该研究实施符合广州中家医家庭医生整形美容医院的相关伦理要求。结果与结论:(1)3种方法所获得的基质血管组分细胞活性均高于接触式超声波破碎法(P<0.05);(2)3种方法所获得的基质血管组分细胞污染度均低于接触式超声波破碎法;(3)3种方法获得的基质血管组分细胞大小差异无显著性意义(P>0.05);(4)3种方法所获得的基质血管组分细胞碎片均少于接触式超声波破碎法(P<0.05),其中非接触式超声波细胞破碎仪处理20 min后采用酶解方法获取基质血管组分细胞的效果最好。
- 魏嘉田卢沛伶黄婧柳雪蔡海明巫国辉张玲华聂云飞
- 关键词：脂肪组织细胞活力
- 猪源抗菌肽PBD-1在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：7
- 2016年
- 本试验旨在实现猪β防御素1(poricine-β-defensin 1,PBD-1)在毕赤酵母中的表达,获得有抗菌活性的抗菌肽PBD-1。根据PBD-1的氨基酸序列和酵母密码子偏好性,设计优化其核苷酸序列,利用SOE-PCR技术获得PBD-1基因序列,克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-PBD-1,经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母SMD1168中。PCR筛选得到阳性酵母表达菌株,经甲醇诱导后得到分子质量约4.5ku的抗菌肽PBD-1。抗菌特性研究结果表明,表达产物抗菌肽PBD-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌均有较好的抑制效果。
- 江学斌陈嘉蔚杨军刘顺枝肖安吉卢志鹏楚品品黄朝远蔡海明马苗鹏张玲华
- 关键词：毕赤酵母PCR
- 一种嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌混合发酵的方法
- 本发明属于微生物发酵技术领域，具体公开了一种嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌混合发酵方法。本发明先制备乳酸杆菌种子和醋酸杆菌种子，然后在MRS基础培养基中加入2.8～3.1%葡萄糖、1.8～2.1%可溶性淀粉和0.4～0.7%低聚...
- 张玲华蔡海明曹丁明飞平马苗鹏杨军
- 文献传递
- 猪PR-39抗菌肽基因在毕赤酵母中的表达
- 2016年
- [目的]在毕赤酵母中表达抗菌肽PR-39基因,获得有抗菌活性的PR-39。[方法]根据酵母和猪密码子偏好性,对其密码子进行优化改造。将经SOE-PCR获得的PR-39基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建重组载体pPIC9K-PR-39。经SacⅠ线性化电击转化毕赤酵母GS115,取阳性克隆进行髙拷贝转化子筛选和诱导表达。[结果]pPIC9K-PR-39重组质粒构建成功,pPIC9K-PR-39菌株发酵产物检测结果对DH5α大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有抑菌效果。[结论]获得了PR-39基因的重组酵母,并用毕赤酵母系统成功地分泌表达了具有明显抗菌活性的抗菌肽PR-39。
- 江学斌陈嘉蔚杨军柯德森肖安吉卢志鹏楚品品黄朝远蔡海明马苗鹏张玲华
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母抑菌活性
