薛乔
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划浙江省科技厅资助项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 葡萄球菌肠毒素C2的克隆表达及其生物学活性
- 目的克隆金黄色葡萄球茼肠毒素SEC2全长基因,构建SEC2的表达戢体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应 (Polymerase chain reaction,PCR)...
- 薛乔应跃斌潘映秋李丹曦孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原大肠杆菌MTT法
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌肠毒素SEC<sub>2</sub>检测方法的建立及其初步应用
- 金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌中致病力最强也是最重要的一种葡萄球菌。金黄色葡萄球菌所产的肠毒素是个世界性卫生问题,据日本的调查结果表明,各种食品中平均32.5%存在金葡菌,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个...
- 薛乔
- 关键词：肠毒素细菌性食物中毒金黄色葡萄球菌超抗原中毒性休克溶血毒素
- 金葡菌肠毒素C_2的克隆表达及其生物学活性被引量：6
- 2006年
- 目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)从金葡菌FR I1230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。
- 薛乔应跃斌潘映秋李丹曦孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原大肠杆菌MTT法
- 金葡液二次开发及其超抗原的药理研究
- 陈枢青马凤森孙红颖陈静丁丁方多凤应跃斌薛乔潘映秋
- 利用小鼠及裸鼠体内抑瘤模型，完成了金葡液的药理学活性研究；了利用纳升电喷雾液质联用技术，完成了三种市售金葡液注射制剂以及由杭州国光药业有限公司提供的金葡液中蛋白质有效成分的鉴定，并明确了其中含有的杂质成分。利用基因工程和...
- 关键词：
- 关键词：金葡液药理学注射制剂
- 金黄色葡萄球菌肠毒素SEC/_2检测方法的建立及其初步应用
- 金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌中致病力最强也是最重要的一种葡萄球菌。金黄色葡萄球菌所产的肠毒素是个世界性卫生问题,据日本的调查结果表明,各种食品中平均32.5/%存在金葡菌,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整...
- 薛乔
- 关键词：肠毒素细菌性食物中毒金黄色葡萄球菌中毒性休克溶血毒素
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌肠毒素C2中缺口的形成及影响因素的研究被引量：2
- 2009年
- 目的：探索影响金黄色葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）断裂的因素。方法：将纯化的肠毒素在不同条件下处理,观察环境因素对其断裂程度的影响。结果：重组SEC2断裂的位置可能位于其分子93位半胱氨酸与110位半胱氨酸之间。重组SEC2在37℃下、24 h内会完全产生断裂,在碱性条件下则加速其断裂的形成;H2O2会导致重组SEC2产生非特异性降解。当溶液中有β-巯基乙醇（2%）、苯甲基磺酰胺（5-10 mmol/L）、咪唑（1 mol/L）或大肠杆菌粗提物时,重组SEC2的断裂可被有效抑制。结论：肠毒素C2容易在特定位点发生断裂,可能与蛋白质本身结构有关。
- 应跃斌孙红颖丁丁李丹曦薛乔陈枢青
- 关键词：肠毒素类超抗原重组融合蛋白质类氢离子浓度蛋白酶抑制药
- 重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2的表达及生物学活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因,添加亲和纯化标签进行原核表达,并对表达产物进行生物学活性分析。方法通过PCR从pGEM-T-SEC2质粒中亚克隆得到带有编码6个组氨酸的核苷酸序列的基因片断,构建了表达质粒pET-28a-SEC2,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达。利用亲和层析纯化rSEC2,并采用MTT法对纯化后的rSEC2和天然SEC2生物学活性进行研究和比较。结果表达质粒pET-28a-SEC2通过测序,表明已连入正确表达目的蛋白的核苷酸序列。含有该质粒的表达菌株经IPTG诱导,产生约占菌体总蛋白40%的可溶性重组蛋白。SDS-PAGE显示,经Ni2+亲和柱纯化的目的蛋白达到了电泳纯。MTT法表明该rSEC2和天然SEC2均有显著的超抗原活性。结论成功构建了pET-28a-SEC2表达质粒,获得了与天然SEC2有着类似超抗原活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础。
- 应跃斌李丹曦潘映秋薛乔孙红颖陈枢青
- 关键词：肠毒素超抗原克隆表达组氨酸标签
- 金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用被引量：2
- 2008年
- 生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20ng.mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100ng.mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。
- 孙红颖薛乔潘映秋丁丁陈静陈枢青
- 关键词：单克隆抗体
- 大肠杆菌P蛋白和T蛋白的调节结构域互换研究(英文)
- 2006年
- 在细菌、真菌及植物中,分支酸是一种位于关键分叉点上的中间代谢物,是所有芳香族氨基酸合成的共同前体.它可在双功能酶分支酸变位酶(CM)和预苯酸脱水酶(PDT)的催化下合成苯丙氨酸,在另一个双功能酶分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶(PDH)的催化下合成酪氨酸.前者被称为P蛋白,后者被称为T蛋白.大肠杆菌P蛋白和T蛋白有着类似的结构,P蛋白由CMp、PDT和调节结构域3个独立结构域组成,其变构调节因子是苯丙氨酸.T蛋白只有CMt和PDH两个独立结构域组成,起变构调节作用的调节结构域与PDH密不可分,其变构调节因子是酪氨酸.为了研究P蛋白和T蛋白的调节结构域的变构调节作用,应用融合蛋白技术将P蛋白和T蛋白的调节结构域进行了互换.结果发现,互换了的调节结构域仍然具有变构调节作用,而且调节结构域的互换导致了变构调节因子的互换,说明调节结构域对酶活性的调节作用是非专一的,而其R结构域与调节因子的结合却是专一的.
- 薛乔孙红颖应跃斌陈枢青
- 关键词：大肠杆菌
- 重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2的制备方法
- 本发明提供重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)的制备方法，通过以下步骤实现：SEC2基因的扩增制备；SEC2基因与原核表达质粒的连接；重组质粒转化至表达宿主进行高效表达；重组SEC2的纯化。本发明方法对重组SEC2进...
- 陈枢青应跃斌薛乔李丹曦
- 文献传递
