- 金葡菌肠毒素C_2的克隆表达及其生物学活性被引量：6
- 2006年
- 目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)从金葡菌FR I1230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。
- 薛乔应跃斌潘映秋李丹曦孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原大肠杆菌MTT法
- 葡萄球菌肠毒素C2的克隆表达及其生物学活性
- 目的克隆金黄色葡萄球茼肠毒素SEC2全长基因,构建SEC2的表达戢体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应 (Polymerase chain reaction,PCR)...
- 薛乔应跃斌潘映秋李丹曦孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原大肠杆菌MTT法
- 文献传递
- 两种新型肠毒素SEG、SEI的融合表达、纯化及活性研究
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素SEG与SEI全长基因,构建SEG与SEI的GST融合表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的重组SEG-GST与SEI-GST融合蛋白的生物学活性进行研究．方法通过聚合酶链式反应(Polyme...
- 李丹曦潘映秋丁丁孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原MTT法
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌肠毒素I及制备和应用
- 本发明提供一种利用基因工程手段制备获得的重组金黄色葡萄球菌肠毒素I，该蛋白属于一种超抗原，具有SEQ ID NO.1的氨基酸序列。该重组质粒由pGEX－4T－1和SEQ ID NO.2的核苷酸序列经过重组构建而成。体外实...
- 丁丁李丹曦潘映秋陈枢青
- 文献传递
- 重组金黄色葡萄球菌肠毒素N及制备和应用
- 一种重组金黄色葡萄球菌肠毒素N，该蛋白属于一种超抗原，具有SEQ IDNO.1的氨基酸序列。是利用来源于金黄色葡萄球菌的编码SEN的基因与一种质粒载体重组，并将其转化至合适宿主进行表达，通过亲和纯化获得的高纯度的重组SE...
- 陈枢青潘映秋丁丁李丹曦
- 文献传递
- 重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2的表达及生物学活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因,添加亲和纯化标签进行原核表达,并对表达产物进行生物学活性分析。方法通过PCR从pGEM-T-SEC2质粒中亚克隆得到带有编码6个组氨酸的核苷酸序列的基因片断,构建了表达质粒pET-28a-SEC2,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达。利用亲和层析纯化rSEC2,并采用MTT法对纯化后的rSEC2和天然SEC2生物学活性进行研究和比较。结果表达质粒pET-28a-SEC2通过测序,表明已连入正确表达目的蛋白的核苷酸序列。含有该质粒的表达菌株经IPTG诱导,产生约占菌体总蛋白40%的可溶性重组蛋白。SDS-PAGE显示,经Ni2+亲和柱纯化的目的蛋白达到了电泳纯。MTT法表明该rSEC2和天然SEC2均有显著的超抗原活性。结论成功构建了pET-28a-SEC2表达质粒,获得了与天然SEC2有着类似超抗原活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础。
- 应跃斌李丹曦潘映秋薛乔孙红颖陈枢青
- 关键词：肠毒素超抗原克隆表达组氨酸标签
- 重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2的制备方法
- 本发明提供重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)的制备方法，通过以下步骤实现：SEC2基因的扩增制备；SEC2基因与原核表达质粒的连接；重组质粒转化至表达宿主进行高效表达；重组SEC2的纯化。本发明方法对重组SEC2进...
- 陈枢青应跃斌薛乔李丹曦
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- 金黄色葡萄球菌肠毒素C2中缺口的形成及影响因素的研究被引量：2
- 2009年
- 目的：探索影响金黄色葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）断裂的因素。方法：将纯化的肠毒素在不同条件下处理,观察环境因素对其断裂程度的影响。结果：重组SEC2断裂的位置可能位于其分子93位半胱氨酸与110位半胱氨酸之间。重组SEC2在37℃下、24 h内会完全产生断裂,在碱性条件下则加速其断裂的形成;H2O2会导致重组SEC2产生非特异性降解。当溶液中有β-巯基乙醇（2%）、苯甲基磺酰胺（5-10 mmol/L）、咪唑（1 mol/L）或大肠杆菌粗提物时,重组SEC2的断裂可被有效抑制。结论：肠毒素C2容易在特定位点发生断裂,可能与蛋白质本身结构有关。
- 应跃斌孙红颖丁丁李丹曦薛乔陈枢青
- 关键词：肠毒素类超抗原重组融合蛋白质类氢离子浓度蛋白酶抑制药
- 人细胞色素P450氧化还原酶基因多态性对抗癌药物及环境毒物活化的影响研究
- 人NADPH-细胞色素P450氧化还原酶(EC1.6.2.4;NADPH-Cytochrome P450Oxidoreductase;POR)是定位在内质网膜上的一个重要的黄素蛋白(Williams et al.，196...
- 李丹曦
- 关键词：基因多态性抗癌药物
- 文献传递
- 金葡菌肠毒素C2中二硫环缺口的形成研究
- ：分析SEC2在纯化与保存过程中，二硫环上产生缺口的原因.方法：通过SDS—PAGE观察SEC2在不同纯度、温度、pH、氧化剂、还原剂、变性剂、蛋白酶抑制荆对SEC2产生缺口的影响，并观察未变性的SEC2和菌体蛋白粗提液...
- 应跃斌李丹曦薛乔陈枢青
- 关键词：肠毒素蛋白酶活性
