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袁源: 作品数：15 被引量：18H指数：3; 供职机构：广东医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金东莞市科技计划项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析被引量：1: 2011年; 目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。; 陈维春刘振杰蒋智文彭琪袁源郑慧玲刘新光; 关键词：酵母双杂交衰老共定位

DRE2基因参与酵母内质网应激调控机制的初步研究: 2014年; 目的初步研究DRE2基因在抗肿瘤药物衣霉素诱导的内质网应激中的作用机制。方法以质粒pRS306为模板,通过PCR扩增含有URA3开放阅读框的DRE2基因破坏元件der2::URA3,然后利用基因重组原理,构建DRE2基因杂合缺失酵母菌株,并进一步检测其对衣霉素的抗性和复制寿命。结果相对于野生型菌株,DRE2基因杂合缺失酵母菌株对衣霉素的抗性增高,复制寿命缩短(P<0.05)。结论 DRE2基因可能参与了酵母内质网应激和衰老的调控。; 赵炜牛宇杰袁源刘新光; 关键词：酵母内质网应激

Nar1基因酵母表达载体的构建及表达鉴定: 2014年; 目的:构建Nar1基因的酵母表达载体,并纯化His-Nar1融合蛋白,为进一步研究Nar1的相互作用蛋白及其功能奠定基础。方法:通过PCR扩增Nar1全长基因;通过定向克隆的方法将Nar1片段与载体pYES2/NTC连接;通过乙酸锂转化法把重组质粒转化入野生型酵母菌株INVSc1;再通过免疫沉淀的方法纯化His-Nar1融合蛋白;通过Western blot检测靶蛋白。结果:DNA测序验证穿梭表达质粒pYES2/NTC-Nar1构建成功,Western blot检测到融合蛋白His-Nar1的表达。结论:成功构建Nar1酵母过表达载体,并且可以有效表达融合蛋白His-Nar1。; 赵炜方炳雄刘依娜牛宇杰袁源刘新光; 关键词：酵母

酵母PMT2基因菌株构建及其对复制性寿命的影响被引量：2: 2015年; 目的研究蛋白质-O-甘露糖转移酶-2(PMT2)基因对酿酒酵母复制性寿命的影响。方法依据基因同源重组原理,构建PMT2基因缺失(pmt2)或基因过表达(PMT2-ox)酵母菌株;实时定量PCR验证菌株中PMT2基因转录水平;显微镜下分离和计数酵母子细胞数目,检测酵母细胞的复制性寿命。结果成功构建PMT2基因缺失或过表达酵母菌株,实时定量PCR证明PMT2 m RNA在pmt2菌株中无表达,在PMT2-ox菌株中表达上调。与野生型酵母细胞的平均寿命(约23代)比较,pmt2菌株的寿命为(25.2±8.9)代,PMT2-ox菌株的寿命为(24.1±7.3)代,寿命无明显延长(P>0.05)。结论酿酒酵母PMT2基因不参与复制性寿命的调控。; 崔红晶何欣袁源陈亚芹付思莹赵炜刘新光; 关键词：酿酒酵母

环指蛋白RING1与A型核纤层蛋白的细胞内相互作用被引量：1: 2011年; 环指蛋白RING1能结合DNA并抑制基因的转录.采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选出了与A型核纤层蛋白(lamin A)结合的RING1蛋白,回复杂交酵母能在缺陷培养基上生长.RING1与绿色荧光蛋白融合载体转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察发现RING1能与带红色荧光蛋白的lamin A蛋白在细胞核周围共定位.免疫共沉淀结果证明RING1与lamin A能够相互作用.结果证明了一个新的lamin A结合蛋白,为揭示lamin A影响基因表达乃至细胞衰老提供了依据.; 陈维春宋杰刘振杰蒋智文袁源郑慧玲刘新光; 关键词：相互作用酵母双杂交

CFD1基因突变酵母菌株构建及其对复制寿命和盐离子抗性的影响: 目的：CFD1基因是酿酒酵母中高度保守的基因,Cfd1p作为铁硫簇结合蛋白定位在细胞质中,其主要功能是和Nbp35p形成复合体参与细胞溶质中铁硫簇蛋白的装配。本研究通过构建CFD1基因缺失和过表达酵母菌株,测定CFD1基...; 袁源赵炜崔红晶刘新光; 关键词：酿酒酵母同源重组

酿酒酵母Nar1p参与寿命调控机制的初步研究被引量：2: 2014年; 目的:酵母Nar1p是人类早老症关键蛋白prelamin A相互作用蛋白NARF在酵母中的同源蛋白,目前未见其在寿命和衰老中的功能报道。本研究以酿酒酵母为模式物种,研究Nar1p在酵母复制寿命和氧化应激中的作用。方法:首先通过基因重组的原理构建Nar1p过表达酵母菌株,然后检测其复制寿命、对强氧化剂百草枯的抵抗能力、细胞内总SOD活性。结果:相对于野生型酵母菌株,Nar1p过表达酵母菌株的复制寿命缩短,抗氧化性损伤的能力减弱,但是细胞内总SOD活性升高。结论:Nar1p很可能参与了酵母复制寿命和氧化应激能力的调节,为全面研究Nar1p的功能奠定基础。; 赵炜刘依娜牛宇杰袁源刘新光; 关键词：酿酒酵母

PCR重叠延伸法结合分段克隆技术构建高GC含量基因突变载体被引量：3: 2012年; 目的:构建人类KAP-1基因定点突变载体,为研究该基因的功能奠定基础。方法:综合运用PCR重叠延伸法和分段定向克隆技术。结果:DNA测序结果表明定点突变载体构建成功。结论:成功构建高GC含量(局部高达80.50%),全长为2 500bp的人类KAP-1基因定点突变载体pCMV6-En-try-KAP-1,为全面深入研究KAP-1基因的功能奠定了基础。; 赵炜崔红晶方炳雄袁源刘玢刘宝华周中军刘新光; 关键词：PCR 高GC含量

核层蛋白A前体的法尼基化与衰老被引量：2: 2011年; 编码核层蛋白A(lamin A)的LMNA基因突变导致法尼基化的核层蛋白A前体(prelamin A)不能被进一步加工成成熟的核层蛋白A,从而导致一种Hutchinson-Gilford早老症综合征(Hutchinson-Gilford progeria syndrome,HGPS)。一种更严重的早老症——限制性皮肤病(restrictive dermopathy,RD),是由于缺失核层蛋白A前体加工过程中的剪切酶ZMPSTE24引起的。ZMPSTE24的缺失阻止了法尼基化的核层蛋白A前体不能正常加工成为成熟的核层蛋白A,同时导致法尼基化的核层蛋白A前体的堆积。在HGPS和RD病人的成纤维细胞中,发现法尼基化的核层蛋白A前体都定位在核膜,从而影响细胞核膜的完整性,并导致细胞核形的异常,进而导致衰老。最近研究表明经过法尼基酰转移酶抑制剂(farnesyltransferase inhibitor,FTI)处理后的细胞的核形异常减少。同时,FTI能够改善HGPS和RD小鼠的早老症状。本文就核层蛋白A前体的法尼基化对衰老的影响有关研究进展作一综述。; 袁源陈维春刘新光周中军

蛋白质氧位甘露糖转移酶基因PMT1对酿酒酵母细胞复制寿命的影响: 背景与目的：酵母是研究寿命和衰老调节机制的理想模式生物.Pmt1p和Pmt2p作为蛋白质-氧-甘露糖转移酶(PMTs,Protein O-mannosyltransferases)家族中的成员,以异型复合体的形式定位于内...; 崔红晶何欣赵炜袁源陈杰刘新光; 关键词：啤酒酵母衰老

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