陈维春
- 作品数：34 被引量：69H指数：4
- 供职机构：广东医学院衰老研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金东莞市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学农业科学更多>>
- 重组质粒AHA1的构建和表达及对HeLa细胞周期的影响
- 2013年
- 目的构建AHA1的真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达,然后检测过表达的AHA1重组蛋白对HeLa细胞周期的影响。方法提取HeLa细胞中总RNA,逆转录成cDNA后,设计引物扩增AHA1基因的编码序列后构建到pCMV-HA真核表达载体中,转染HeLa细胞后使用HA标签抗体通过免疫印迹检测AHA1融合蛋白在细胞中的表达,最后分别使用流式细胞仪和CCK-8方法检测HeLa细胞的周期和增殖的变化。结果 pCMV-HA-AHA1重组质粒经PCR和DNA限制性内切酶酶切鉴定,最后通过DNA测序并经序列相似性比对,确定AHA1重组质粒构建成功;在HeLa细胞中转染pCMV-HA-AHA1重组质粒后,免疫印迹结果显示AHA1融合蛋白在细胞确已经实现过表达,经流式细胞仪和CCK-8方法检测发现,过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。结论成功构建了pCMV-HA-AHA1重组质粒,并且在HeLa细胞成功过表达,且过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。
- 蒋智文郑慧玲陈维春刘新光
- 关键词：HELA细胞免疫印迹法细胞周期
- 我院生物化学与分子生物学重点学科的建设与成效被引量：1
- 2013年
- 阐述了广东医学院生物化学与分子生物学重点学科的建设情况与成效,指出规范学科管理制度,明确学科研究方向,培养高素质的学科人才,加强实验室建设是该学科实施重点学科建设的关键。
- 林小聪刘新光兰柳波符伟玉丁航张志珍张海涛陈维春唐旭东周克元
- 关键词：生物化学与分子生物学重点学科学科建设
- 斜纹夜蛾两个天蚕素D基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2007年
- 天蚕素是昆虫抵御病菌入侵的一类抗菌肽家族。根据斜纹夜蛾Spodoptera litura天蚕素B基因设计特异引物,通过PCR扩增得到2个新的天蚕素基因部分序列,分别命名为cecD1和cecD2(GenBank登录号分别为EF555567和EF555568)。2个基因编码同一个天蚕素D蛋白,该蛋白的成熟肽与天蚕素B存在2个氨基酸残基差异。序列分析发现cecD1和cecD2中分别包含568bp和377bp的内含子序列,它们有相同的5′和3′拼接位点,A+T含量分别为59.7%和69.8%,符合大多数真核生物内含子高A+T含量的特征。
- 陈维春宋杰庞义
- 关键词：斜纹夜蛾天蚕素内含子基因结构
- Narf影响细胞增殖、周期及DNA损伤修复功能的初步研究
- 目的：核纤层蛋白A(laminA)基因LMNA缺失或表达异常跟衰老密切相关.LMNA缺失能导致laminA前体识别因子Narf(nuclear prelamin A recognition factor, Narf)的表...
- 陈维春黄国滨吴伯艳袁源郑慧玲刘新光
- 关键词：细胞增殖细胞周期脱氧核糖核酸
- 文献传递
- 苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析被引量：1
- 2008年
- 溶原性噬菌体的随机爆发是微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)发酵生产的首要危害。【目的】本文的目的就是通过研究B.t生产菌株溶原性噬菌体的遗传背景,以便从分子水平上控制其在生产中的随机爆发。【方法】通过对广东梅州某公司的生产菌株MZ1采用Mitomycin C进行诱导,提取噬菌体颗粒MZTP01的基因组DNA,克隆和表达该噬菌体的pep基因,并进行了功能分析。【结果】诱导获得的溶原性噬菌体MZTP01斑点清晰,直径约1mm,成斑时间12h;从噬菌体基因组DNA双酶切(HindⅢ/EcoRⅠ)片段中回收长度为2362bp的D片段(Genbank登录号:AY639599),又从D片段中克隆了长度为1101bp、编码367aa、分子量为47kDa的pep基因,表达载体M15(pQE30pep)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中表达获得了47kDa的清晰表达带,在1h时开始产生蛋白并有逐步上升的趋势;Western blot也在47kDa处得到一条清晰的条带;可溶性分析表明PEP蛋白在重组菌株中是以不可溶的包含体形式存在的,该蛋白的产生明显地抑制了宿主的生长速度;噬菌体PEP氨基酸序列之间的同源性比较表明,噬菌体MZTP01PEP蛋白与来自E.coliK12噬菌体的PEP蛋白的同源性程度最大。【结论】我们获得了一种新的噬菌体MZTP01,并首次报道了该噬菌体D片段的核苷酸序列及pep基因的功能,试验证明PEP表达蛋白能够水解酪蛋白,其活力相当于0.3mg/mL的胰蛋白酶。
- 廖威陈维春贾艳华庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌克隆功能分析
- Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。
- 陈维春刘振杰蒋智文彭琪袁源郑慧玲刘新光
- 关键词：酵母双杂交衰老共定位
- 猪蛔虫缺氧诱导因子在雌雄成虫转录差异性的研究
- 2015年
- 目的检测雌、雄成虫猪蛔虫缺氧诱导因子转录水平的差异性,探讨猪蛔虫性别差异的分子机制,为蛔虫病的防治提供参考。方法提取猪蛔虫雌、雄成虫总RNA,反转录合成cDNA,以蛔虫actin基因为内参,采用实时荧光定量PCR检测hif-1α和hif-1β基因的转录水平。结果提取的RNA浓度为1.5-2.0μg/μl,A260/A280位于1.9-2.0之间。实时荧光定量PCR显示引物具有良好的溶解曲线和扩增曲线,检测雌成虫hif-1α和hif-1β基因表达的2-△△Ct分别为15.99±3.65和26.26±7.09,雄虫分别为1.02±0.06和1.01±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论猪蛔虫hif-1α和hif-1β基因转录水平雌成虫高于雄成虫,表明雌虫更能适应宿主体内低氧环境。
- 宋杰何庆丰陈维春
- 关键词：猪蛔虫缺氧诱导因子定量PCR转录
- 杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备被引量：2
- 2007年
- 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。
- 李玲玲李朝飞陈维春庞义
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达抗体
- 医学生物化学多媒体教学体会被引量：8
- 2008年
- 根据医学生物化学学科及教学特点,结合教学实践,总结了多媒体技术辅助生物化学教学的优势和存在的问题,提出了注意事项和改进措施。
- 陈维春宋杰
- 关键词：医学生物化学多媒体技术教学
- 重组金属硫蛋白2A质粒的构建与表达被引量：2
- 2012年
- 目的构建重组金属硫蛋白2A(MT-2A)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究MT-2A奠定基础。方法从人骨骼肌细胞cDNA文库中PCR扩增MT-2A基因DNA序列,构建重组表达质粒MT2A-pET32a,PCR与DNA测序法鉴定插入序列;重组细菌用IPTG诱导表达,His-bind亲和层析柱纯化MT-2A蛋白,Western blotting鉴定蛋白特性。结果扩增获得的MT-2A基因片段长186bp,DNA测序证实MT2A-pET32a重组质粒构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约为29×103,Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒MT2A-pET32a,在大肠埃希菌内诱导表达并纯化获得MT-2A。
- 刘振杰赵树勇周静骆艳婷郑慧玲陈维春熊兴东徐宁刘新光
- 关键词：基因表达大肠埃希菌
