郑卫东
- 作品数：35 被引量：77H指数：4
- 供职机构：广东省人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 外周血细胞形态学技能培养问题的探讨
- 黄美群郑卫东郑洪陈汉红梁雪冰
- 凝血因子ⅩⅢA基因Arg77Cys错义突变和Arg174stop无义突变致凝血因子ⅩⅢ缺陷的分子机制被引量：1
- 2011年
- 本研究以凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)基因突变为研究的切入点,从分子水平研究这些突变致病的机制。构建野生型FⅩⅢA重组表达质粒,用定点突变方法获得含有2种突变(Arg77Cys及Arg174stop)的FⅩⅢA重组表达质粒。分别将上述重组质粒通过脂质体介导的基因转移方法转染到COS-7细胞表达;用发色底物法检测转染细胞中FⅩⅢ活性,荧光定量RT-PCR、Western blot及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测转染细胞中人FⅩⅢA的RNA表达水平和蛋白表达量。结果表明:含有2种突变(Arg77Cys及Arg174stop)的FⅩⅢA重组质粒转染组FⅩⅢA mRNA相对表达丰度分别为0.82±0.21和0.76±0.17,与野生型FⅩⅢA重组质粒转染组(1.06±0.51)比较没有显著性差异(p>0.05)。野生型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物中FⅩⅢ活性为(61.6±30.4)%,浓缩的细胞培养上清液中FⅩⅢ活性为(24.0±2.9)%,而2种突变型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物及培养上清液FⅩⅢ活性明显减低。转染细胞裂解物的Western blot分析显示,含Arg77Cys错义突变的FⅩⅢA重组蛋白在培养细胞内含量明显减低,仅见1条微弱的条带。ELISA证实,野生型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物中FⅩⅢA∶Ag量为(32.8±14.5)%,浓缩的细胞培养上清液中FⅩⅢ∶Ag量为(13.2±2.3)%。而2种突变型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物及培养上清液中FⅩⅢA∶Ag水平极度减低,低于ELISA检测低限。结论:FⅩⅢA Arg77Cys错义突变和Arg174stop无义突变未导致FⅩⅢA mRNA水平的显著减低,但都可以导致FⅩⅢA蛋白水平的表达异常。在本研究先天性FⅩⅢ缺陷症患者中FⅩⅢA重度缺乏可能是FⅩⅢA Arg77Cys错义突变和Arg174stop无义突变的共同作用所致。
- 郑卫东刘艳辉罗盈姚志彬
- 关键词：分子病理机制
- 一种微小RNA实时定量PCR检测方法及其应用
- 本发明公开了一种微小RNA实时定量PCR检测方法及其应用。本发明通过设计与靶miRNA3’端序列互补的逆转录引物进行逆转录反应得到cDNA序列，然后设计第一正向引物进行overlapPCR反应，cDNA序列被延伸；最后，...
- 郑卫东邸玉玮刘英红黄革郑有为张洋方伟
- 膜反向斑点杂交法检测广东人G6PD基因6种常见突变被引量：1
- 2011年
- 【目的】探讨膜反向斑点杂交法在广东人G6PD基因6种常见突变同步检测中的应用。【方法】用高铁血红蛋白还原试验和G6PD/6-PGD酶活性比值法进行G6PD缺乏症筛查。应用多重PCR方法扩增G6PD基因目的片段。用Premier Primer6.0软件设计和优化针对广东人常见6种G6PD基因突变型的特异性寡核甘酸探针,用乙基-3-二甲氨基丙碳二亚胺(EDC)法处理尼龙膜并固定探针,制成G6PD基因突变检测用膜条。多重PCR扩增产物与固定在膜条上寡核苷酸探针进行杂交,通过显色反应判读结果。以G6PD基因测序为金标准,对膜反向斑点杂交法进行评价。【结果】26例标本中膜反向斑点杂交法检测结果:95A→G突变型5例,1024C→T突变型3例,1376G→T突变型8例,1388G→A突变型7例,392G→T突变型1例,未发现1311C→T突变型,有两例检测为阴性。膜反向斑点杂交法未能测出的2例标本经基因测序证实存在392G→T突变,其余24例膜反向斑点法与基因测序法的结果完全一致,符合率为92.3%(24/26)。【结论】在优化探针设计和杂交条件前提下,膜反向斑点杂交法可用于广东人G6PD基因6种常见突变型的同步检测。
- 郑卫东张太松陈冬葛艳芬林婷胡斌
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变
- 临床实验室定量项目不确定度评估方法选择与评价被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨临床实验室定量项目不确定度评估方法。方法:以临床样本批内变异(CVW%)、长期室内质控累积变异(CVB%)、室间质评偏倚(CVBias%)、校准品不确定度(CVCal%)为分量,按不同方法合成不确定度。结果:9个项目以AACB方法(CVB%、CVCal%)合成u1%,以CVW%、CVB%、CVCal%合成u2%,按国内专家建议以CVW%、CVB%、CVBias%(2010)合成u3%,u2%与u1%、u3%相关性好(P<0.05),u2%与u3%差异无显著性(P>0.1)。以CVW%、CVB%、CVBias%(2009)合成u4%,由于PSA、FPSA分组差异,CVBias%(2009)较大,u4%与u2%、u3%差别有统计学意义(P<0.05),无相关性(P>0.05)。扩展至21个项目,u1%、u2%、u3%均相关(P均<0.01),u2%与u3%差别无显著性(P>0.05)。结论:以CVW%、CVB%、CVCal%为分量评估不确定度方法可行,合理的室间质评偏倚可作为不确定度分量。
- 邸玉玮郑卫东董晖梁敏文戴耀宗
- 关键词：测量不确定度偏倚
- 一个遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症家系中凝血因子Ⅴ基因两种新突变的鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的对一个遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症家系进行凝血因子Ⅴ(factorⅤ,FⅤ)基因突变的检测,探讨先天性凝血因子Ⅴ缺乏症的分子发病机理。方法PCR结合直接测序方法对先证者的FⅤ基因全部25个外显子及其旁侧序列进行分析,鉴别其中可能存在的基因变异。应用PCR产物反向测序法或PCR限制性内切酶分析技术对突变位点进行确证。随机选择100名健康体检者作为正常对照。结果先证者FⅤ基因存在两种突变,分别是第11外显子区的A1763C错义突变和位于第16内含子3′端剪接位点的G→T突变;家系分析表明这两个突变是双杂合子型,前者遗传自父亲,后者遗传自母亲。100名健康对照者均未发现A1763C错义突变。结论第11外显子A1763C错义突变和第16内含子3′端的剪接位点突变使先证者呈现双重杂合子型,可能是先证者FⅤ先天性缺乏的原因。
- 郑卫东刘艳辉刘辉芳陈志红王嬿
- 关键词：突变聚合酶链反应
- STA-R全自动血凝仪性能评价被引量：20
- 2005年
- 目的:了解STA-R全自动血凝仪的凝固法检测性能。方法:选择凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)与纤维蛋白原(FIB)三项指标,对仪器的凝固法检测线性、精密度、抗生物干扰能力、携带污染率及其与CA1500型全自动血凝仪的相关性进行初步评价。结果:该仪器检测PT和FIB的相关系数分别为-0.996和0.999;测定的各指标批内和日间DV均小于4.0%;携带污染率PT为1.39%,APTT为0.32%,FIB为2.66%;血红蛋白、总胆红素和甘油三酯对各指标测定的影响度在-4.4%～4.1%之间;STA-R与CA1500相关性评价表明:PT、APTT和FIB测定结果之间的相关系数分别为0.943、0.853和0.935。结论:STA-R型全自动血凝仪具有良好线性、较高的批内和日间精密度、较强的抗生物干扰和防止携带污染能力,同时具有较快的分析速度(400项/h)和灵活多样的项目组合,较适合于样本量大的临床检验实验室使用。
- 郑卫东范小斌唐红艳
- 关键词：全自动血凝仪FIBAPTT携带污染率
- 外周血细胞形态学技能培养问题的探讨
- 目的主要在于培养和提高检验专业新员工的各种具体检验技能,了解并能够较熟练地运用各种新检验仪器进行技术检验,同时能够根据检验结果进行必要的专业分析与鉴别。方法本文首先简单回顾目前医学检验专业毕业的新员工在
- 黄美群郑卫东郑洪陈汉红梁雪冰
- 文献传递
- 人类凝血因子XII基因一种新突变的发现与确证
- 郑卫东刘艳辉曾淑燕范小斌张莉滟王嬿杜欣邓春玉
- 临床化学定量项目测量的不确定度评估分量的分析被引量：2
- 2012年
- 目的:对临床化学定量项目测量的不确定度评估分量进行分析。方法:1.用三种方法(方法 1:u1%=[CVB%2+CVCal%2]1/2、方法 2:u2%=[CVW%2+CVB%2+CVCal%2]1/2和方法 3:u3%=[CVW%2+CVB%2+CVBias%2]1/2)评估钾等10个项目测量的不确定度。2.用方法 2评估封闭检测系统的项目,方法 3评估开放检测系统参加EQA的项目及酶类项目。结果:1.钾等10个项目得到u2%与u1%的r=0.985(P<0.01)、u2%与u3%的r=0.949(P<0.01),u2%与u1%、u3%差异无统计学意义(P均>0.05)。2.封闭检测系统的项目u2%中CVB%为主要分量。3.开放检测系统参加EQA的项目及酶类项目u3%中CVB%、CVBias%为主要分量。结论:三种方法评估临床化学定量项目的测量的不确定度均可行,可根据不同的检测系统采用不同方案。室内质控累积变异、室间质评偏倚是影响测量的不确定度评估的重要分量。
- 梁敏文郑有为邸玉玮董晖戴耀宗郑卫东
- 关键词：临床化学室内质控室间质评
