金琳琳
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
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- 轮状病毒VP4蛋白酶切片段VP5*、VP8*在原核系统中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达轮状病毒结构蛋白VP4酶切片段VP5*、VP8*。方法以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR方法获得VP5*、VP8*全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30 a表达载体,转化大肠杆菌BL21(plyss),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物做SDS-PAGE和Western-blotting检测,目的产物用镍柱纯化。结果①重组载体在IPTG诱导下,工程菌表达的两个目的蛋白主要以包涵体形式存在;②SDS-PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,VP5*为60 kD,VP8*为28 kD,Western-blotting检测发现两目的蛋白所带标签可与抗体反应;③镍柱纯化获得RV SA11 VP5*、VP8*蛋白,纯度达90%。结论①构建表达载体pET-30a-VP5*、pET-30a-VP8*;②表达、纯化VP4蛋白的VP5*、VP8*片段。
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- 关键词：RV原核表达
- 山东肥城寒武纪竹叶状石灰岩菌群分析被引量：2
- 2009年
- 为了探讨微生物活动与地层形成的关系,对山东肥城万灵山寒武纪竹叶状石灰岩中的微生物进行了培养分离,用PCR方法获得了它们的16S DNA序列,通过序列比对确定了这些微生物的种属,并对这些细菌进行了系统发育进化分析。结果表明这些细菌属于芽胞杆菌属(Bacillus)、节杆菌属(Arthrobacter)及未培养细菌(Un-cu ltured bacterium),万灵山竹叶状石灰岩的微生物菌群分布以革兰阳性芽胞杆菌占优势。
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- 关键词：菌群
- JN219抗轮状病毒机理研究模型的建立
- 本实验室发现一株真菌菌丝的代谢产物具有抗病毒活性，用硅胶柱层析和制备型高效液相色谱得到了具有抗病毒活性的纯品，命名为JN219。JN219极性较强，在220nm有最大的紫外吸收峰，质谱(ESI)测得该化合物分子量为519...
- 金琳琳
- 文献传递
- 轮状病毒感染细胞机制的研究进展
- 2008年
- A组轮状病毒是人类婴幼儿胃肠炎的主要病原体.其外壳蛋白VP4、VP7及非结构蛋白NSP4在病毒感染细胞过程中发挥重要作用.目前对轮状病毒的感染的研究很多,但发病机制仍不完全清楚.本文对轮状病毒蛋白致病机理及感染细胞机制等方面的研究进行综述.
- 金琳琳孟红
- 关键词：轮状病毒VP4VP7NSP4细胞受体
- 真菌提取物JN219抗轮状病毒机制的研究
- 2009年
- 目的探讨真菌提取物JN219抑制轮状病毒(RV)入侵宿主细胞的机制。方法构建原核表达载体pET-30a-VP4,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并用His抗体镍柱亲和层析纯化病毒外壳蛋白VP4,利用体外竞争抑制RV-MA104细胞感染模型,观察与VP4共孵育后含JN219提取物抑制RV活性的变化。结果构建的pET-30a-VP4载体可表达VP4重组蛋白(约88 kD),镍柱纯化的VP4蛋白含量为0.75 mg/ml,与VP4作用后JN219提取物抗病毒指数由36.7降低为9.1,半数有效浓度由(0.163±0.02)mg/ml升为(0.702±0.13)mg/ml,半数中毒浓度由5.99 mg/ml升至6.38 mg/ml,P均<0.05。结论与病毒外壳蛋白VP4结合,进而阻断病毒穿入细胞可能是JN219抗RV的主要机制之一。
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- 轮状病毒外壳蛋白VP4在大肠埃希菌中的表达
- 2008年
- 目的克隆表达轮状病毒融合素蛋白VP4。方法以轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR获得VP4全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(plysS),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并用镍柱纯化。结果重组载体所含目的基因片段的序列与文献公布序列相符,IPTG诱导表达的目的蛋白主要以包涵体形式存在;SDS-PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,为88kD,Western blot检测发现目的蛋白所带组氨酸标签可与标签抗体反应;镍柱纯化获得RV SA11 VP4融合素蛋白,纯度达90%。结论构建了表达载体pET-30a(+)-VP4,经诱导表达、纯化,获得了RV融合素蛋白VP4。
- 金琳琳李鹏万言珍岳盈盈李志会孟红
- 关键词：VP4轮状病毒原核表达
