蒋智文
- 作品数：7 被引量：35H指数：1
- 供职机构：广东医学院更多>>
- 发文基金：广东省高等学校自然科学研究重点项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- AHA1蛋白与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位被引量：1
- 2013年
- 目的构建AHA1与荧光蛋白GFP融合的真核表达载体,并在HEK293细胞中进行表达,然后检测AHA1重组蛋白在细胞中的表达,以及与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位。方法提取HEK293细胞中总RNA,随之逆转录成cDNA,然后设计引物扩增AHA1的编码序列后构建到pEGFP-N1载体中,转染HEK293细胞后,通过免疫印迹检测重组AHA1蛋白在细胞中的表达,采用激光共聚焦显微镜观察重组AHA1蛋白与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位。结果经PCR和DNA限制性内切酶鉴定,最后通过DNA测序并进行序列相似性分析比对,确定pEGFP-N1-AHA1重组质粒构建成功;在HEK293细胞中转染pEGFP-N1-AHA1重组质粒后,检测发现,重组AHA1蛋白在细胞中已经成功表达,并且部分AHA1蛋白与核纤层蛋白A共定位于细胞的核膜上,但是AHA1蛋白与核纤层蛋白C在细胞中不能共定位。结论成功构建了AHA1与GFP荧光蛋白的重组质粒,并且AHA1蛋白与核纤层蛋白A在细胞中能够共定位,而不与核纤层蛋白C共定位。
- 蒋智文陈维春郑慧玲周静刘新光
- 关键词：免疫印迹
- AHA1蛋白与核层蛋白相互作用并下调p53的表达
- 本研究通过研究AHA1蛋白在细胞中的分布以及与核层蛋白的相互作用,进而探究AHA1对核层蛋白和p53等的影响。指出，核层蛋白前体和核层蛋白在核膜上的堆积，诱使AHA1向胞核聚集，并且下调p53，进而对细胞衰老的进程进行调...
- 蒋智文周静陈维春郑慧玲刘新光
- 关键词：细胞衰老代谢调控
- 文献传递
- Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。
- 陈维春刘振杰蒋智文彭琪袁源郑慧玲刘新光
- 关键词：酵母双杂交衰老共定位
- 重组质粒AHA1的构建和表达及对HeLa细胞周期的影响
- 2013年
- 目的构建AHA1的真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达,然后检测过表达的AHA1重组蛋白对HeLa细胞周期的影响。方法提取HeLa细胞中总RNA,逆转录成cDNA后,设计引物扩增AHA1基因的编码序列后构建到pCMV-HA真核表达载体中,转染HeLa细胞后使用HA标签抗体通过免疫印迹检测AHA1融合蛋白在细胞中的表达,最后分别使用流式细胞仪和CCK-8方法检测HeLa细胞的周期和增殖的变化。结果 pCMV-HA-AHA1重组质粒经PCR和DNA限制性内切酶酶切鉴定,最后通过DNA测序并经序列相似性比对,确定AHA1重组质粒构建成功;在HeLa细胞中转染pCMV-HA-AHA1重组质粒后,免疫印迹结果显示AHA1融合蛋白在细胞确已经实现过表达,经流式细胞仪和CCK-8方法检测发现,过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。结论成功构建了pCMV-HA-AHA1重组质粒,并且在HeLa细胞成功过表达,且过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。
- 蒋智文郑慧玲陈维春刘新光
- 关键词：HELA细胞免疫印迹法细胞周期
- 环指蛋白RING1与A型核纤层蛋白的细胞内相互作用被引量：1
- 2011年
- 环指蛋白RING1能结合DNA并抑制基因的转录.采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选出了与A型核纤层蛋白(lamin A)结合的RING1蛋白,回复杂交酵母能在缺陷培养基上生长.RING1与绿色荧光蛋白融合载体转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察发现RING1能与带红色荧光蛋白的lamin A蛋白在细胞核周围共定位.免疫共沉淀结果证明RING1与lamin A能够相互作用.结果证明了一个新的lamin A结合蛋白,为揭示lamin A影响基因表达乃至细胞衰老提供了依据.
- 陈维春宋杰刘振杰蒋智文袁源郑慧玲刘新光
- 关键词：相互作用酵母双杂交
- 组蛋白修饰调节机制的研究进展被引量：31
- 2009年
- 表观遗传学涉及到DNA甲基化、组蛋白修饰、染色体重塑和非编码RNA调控等内容,其中组蛋白修饰包括组蛋白的乙酰化、磷酸化、甲基化、泛素化及ADP核糖基化等,这些多样化的修饰以及它们时间和空间上的组合与生物学功能的关系又可作为一种重要的表观标志或语言,因而被称为"组蛋白密码".相同组蛋白残基的磷酸化与去磷酸化、乙酰化与去乙酰化、甲基化与去甲基化等,以及不同组蛋白残基的磷酸化与乙酰化、泛素化与甲基化、磷酸化与甲基化等组蛋白修饰之间既相互协同又互相拮抗,形成了一个复杂的调节网络.对组蛋白修饰内在调节机制的研究将丰富"组蛋白密码"的内涵.
- 蒋智文刘新光周中军
- 关键词：组蛋白修饰组蛋白密码表观遗传学
- siRNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老相关β-半乳糖苷酶活性的影响被引量：1
- 2015年
- 目的在HEK293细胞中筛选能有效沉默铜离子代谢结构域包含体1(COMMD1)基因表达的si RNA片段,并研究si RNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老的影响。方法用RT-PCR初步筛选能够沉默COMMD1的si RNA干扰片段,用定量PCR和免疫印迹法进一步确认si RNA的干扰效果,然后用衰老相关β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测si RNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老的影响。结果si COMMD1-1对HEK293细胞中COMMD1的沉默效率最高;但si COMMD1-1沉默COMMD1后,未见HEK293细胞的衰老相关β-半乳糖苷酶活性出现显著性改变。结论 si COMMD1-1沉默HEK293细胞中COMMD1的表达后,未能提高HEK293细胞的衰老相关β-半乳糖苷酶活性。
- 蒋智文陈维春郑慧玲袁源刘新光
- 关键词：SIRNARNA干扰细胞衰老
