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HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及鉴定与表达: 2007年; 目的:应用重叠区扩增基因拼接法(gene SOEing)获得HBV X-HCV C融合基因,构建HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒。方法:应用gene SOEing法扩增HBV X-HCV C融合基因并将其克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-XC,经PmeⅠ酶切线性化后电转化BJ/AdEasy菌,构建重组腺病毒质粒pAd-XC;鉴定正确的pAd-XC经Pac I酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,扩增,利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)监测病毒滴度和感染效率,Western-blot法检测目的蛋白的表达。结果:测序结果显示,pAdTrack-CMV-XC构建成功;PCR及Pac I酶切鉴定结果表明pAd-XC构建成功;经Pac I酶切线性化的pAd-XC转染293细胞后24 h即可观察到GFP的表达;回收的病毒可重复感染293细胞,Western-blot法检测到目的蛋白的表达,证实有感染能力且可表达目的蛋白的病毒颗粒包装成功。结论:HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒构建成功,为进一步研究HBV X蛋白和HCV C蛋白的生物学功能奠定了基础。; 马臻陈国民; 关键词：HBV X基因 HCV C基因融合基因重叠区扩增基因拼接法

HBV X蛋白和HCV核心蛋白在肝癌发生中的作用被引量：1: 2006年; 原发性肝癌(HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白和丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白可通过影响肝细胞内信号传导及细胞凋亡等机制,调节某些基因的转录及表达,参与HCC的发生,两者可能存在协同致癌作用。; 马臻陈国民; 关键词：肝炎病毒

HBV X基因对肝癌细胞生物学行为的影响被引量：2: 2008年; 目的:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒,观察HBV X基因对肝细胞生物学行为的影响。方法:构建可表达HBV X基因的重组腺病毒Ad-X及空病毒Ad0;重组腺病毒感染HepG2细胞,应用MTT、平板克隆形成试验、流式细胞术、TUNEL等方法观察HBV X基因对肝细胞生物学行为的影响。结果:与HepG2组和Ad0组相比,Ad-X组细胞生长速度较快,其克隆形成率高于对照组,流式细胞分析显示Ad-X感染可加快HepG2细胞G1→S期细胞周期进程;Ad-X组细胞凋亡指数低于HepG2组及Ad0组,Ad-X感染HepG2细胞后可诱导c-myc mRNA的表达。结论:Ad-X可促进HepG2细胞的增殖并抑制其凋亡。; 马臻; 关键词：HBVX基因细胞周期 C-MYC

HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及对人肝癌细胞生物学行为的影响: 目的:初步探讨重组腺病毒Ad-XC、Ad-X、Ad-C和AdO对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡过程的影响及其相关机制。方法:(1)应用AdEasy system分别构建可表达HBV X-HCV C融合基因、HBV-X基...; 马臻沈钦海陈国民; 文献传递

HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及对肝细胞生物学行为的影响: 生长状态的影响;平板克隆形成试验检测重组腺病毒感染后单个细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测重组腺病毒对细胞周期分布状况的影响;TUNEL法检测重组腺病毒对TNF-a诱导的细胞凋亡的影响;半定量RT-PCR检测重组腺病毒感...; 马臻; 关键词：融合基因重组腺病毒

木芙蓉抗病毒及与DNA的结合作用: 目的:一些实验表明木芙蓉有明显抗炎作用,为探讨其抗病毒作用,作者通过体外实验木芙蓉作用于HepG 2．2．15细胞,观察其对HBsAg和HBeAg分泌的影响及对细胞HBV DNA合成的抑制作用。方法:培养HepG 2．2...; 沈钦海陈国民马臻; 文献传递

112例麻疹流行特征和临床分析被引量：1: 2011年; 目的探讨麻疹流行病学特点和临床特征。方法对112例麻疹患者的临床资料进行回顾性分析。结果 112例麻疹患者中非本市户籍人员占38.1%,<1岁及>15岁患者比例较高,分别占25.9%和37.1%,发病集中在4～5月份,并发症以支气管炎及肝损伤为主。结论麻疹发病可能与麻疹疫苗接种不规范或体内麻疹抗体滴度下降等因素有关,临床特征具有较重的病毒血症及肝损伤。; 马臻孙美艳赵海珍乌云; 关键词：麻疹流行病学

芦丁对HepG2细胞生长的影响被引量：22: 2006年; 目的观察芦丁（Rutin）对人肝癌HepG2的生长和增殖的影响。方法体外培养HepG2细胞，用甲基塞唑基四唑（MTT）法、3^H—TdR掺人法测定芦丁对人肝癌HepG2的生长和增殖抑制情况，并且用荧光染色法在Olympus荧光显微镜下观察芦丁对HepG2细胞凋亡的影响，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果芦丁能抑制HepG2细胞的生长、增殖、诱发细胞凋亡；在50～250μmol／L浓度范围内处理的HepG2，G0／G1期细胞增加，G2／M期细胞减少，细胞周期阻滞于G0／G1期。结论芦丁能抑制HepG2细胞的生长，并诱发细胞凋亡，呈浓度依赖性。; 沈钦海马臻陈国民; 关键词：芦丁人肝癌细胞株凋亡

丙型肝炎病毒核心基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达: 2006年; 目的构建HCV C基因重组腺病毒,以期用于HCV C蛋白的功能研究。方法以含有丙肝病毒1b亚型核心基因的质粒pcDNA3.1/HCV-C为模板,PCR扩增HCV C基因,PCR产物双酶切后亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-C,PacⅠ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-C,继之在293细胞内扩增,利用报告基因GFP监测病毒滴度和感染效率,Western blot检测HCV C蛋白的表达。结果PCR及Western blot结果均证实重组腺病毒Ad-C构建成功。结论成功构建了重组腺病毒Ad-C,为进一步研究核心蛋白的生物学功能奠定了基础。; 马臻郭进军陈国民沈钦海黄爱龙Tong-Chuan He; 关键词：丙型肝炎病毒核心基因重组腺病毒

乙型肝炎病毒X基因重组腺病毒的构建及在HepG2细胞中的表达被引量：4: 2007年; 从携带有双拷贝乙肝病毒adw亚型全基因组的质粒pecob6获得X基因片段,将其亚克隆到AdEasy腺病毒系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上,和骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-X,PacI酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,获得重组腺病毒Ad-X,Ad-X可感染HepG2细胞,Western-blot法检测到X蛋白的表达,重组腺病毒Ad-X构建成功,为进一步研究X蛋白的生物学功能奠定了基础。; 马臻沈钦海陈国民He TC; 关键词：HBV X基因重组腺病毒

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