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付汉维

作品数:4 被引量:10H指数:2
供职机构:广东医学院更多>>
发文基金:广东省自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 3篇十二指肠
  • 3篇十二指肠钩虫
  • 3篇钩虫
  • 2篇原核表达
  • 2篇抗凝
  • 2篇活性
  • 2篇AD
  • 1篇蛋白
  • 1篇脂肪酸
  • 1篇融合蛋白
  • 1篇视黄醇结合
  • 1篇视黄醇结合蛋...
  • 1篇凝血
  • 1篇线虫
  • 1篇酶基因
  • 1篇抗凝活性
  • 1篇抗凝血肽
  • 1篇活性检测
  • 1篇活性鉴定
  • 1篇杆菌

机构

  • 4篇广东医学院

作者

  • 4篇彭礼飞
  • 4篇付汉维
  • 4篇邓莉
  • 4篇吴亚敏
  • 3篇杨陈
  • 3篇胡晶晶
  • 2篇甘伟琼
  • 1篇何庆丰

传媒

  • 1篇生物技术
  • 1篇热带医学杂志
  • 1篇中国人兽共患...
  • 1篇中国病原生物...

年份

  • 1篇2009
  • 3篇2007
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7的原核表达、纯化及抗凝活性鉴定被引量:6
2007年
目的在大肠杆菌中表达十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7并鉴定抗凝活性。方法运用RT-PCR扩增十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其组成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的编码序列;将编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a及pICET32,构建重组表达质粒;成功构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;用镍亲和层析一步纯化融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白;先后用几丁质亲和层析及镍亲和层析两个步骤纯化自切割后带6×his-tag的目的蛋白;用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测纯化表达产物的体外抗凝活性。结果获得AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B的编码序列并成功构建了原核表达重组质粒;AduNAP7、AduNAP7A及Adu-NAP7B均在大肠中得到了高效可溶表达,纯化产物具有一定抗凝活性,它们延长aPTT比延长PT更有效。AduNAP7B的抗凝活性显著强于AduNAP7及AduNAP7A。结论AduNAP7具有较强抗凝活性,但显著弱于AcAP5、AcaNAP7及AcAPc2。AduNAP7的抗凝效应可能利于钩虫在人体内的吸血寄生生活,其抗凝作用机制有待进一步研究。
彭礼飞邓莉杨陈胡晶晶甘伟琼吴亚敏付汉维
关键词:十二指肠钩虫原核表达纯化抗凝活性
Trx-NAP 5融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性检测被引量:2
2007年
目的:用大肠杆菌表达获得重组线虫抗凝血肽5(rNAP 5),为研究开发NAP5的功能与应用提供原料来源。方法:将扩增的NAP5基因经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与表达载体pET-32a连接。构建好的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,分别经IPTG和乳糖诱导表达,并探讨诱导表达条件,分析表达产物的可溶性情况。表达产物经镍亲和纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝活性。结果:成功构建了pET-32a/NAP5表达载体,IPTG和乳糖均能诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地可溶性表达。优化条件下每升LB培养基可获可溶性目的融合蛋白量达65.3mg。纯化的蛋白能明显延长PT及aPTT,7.0mg/L的蛋白平均约延长5.09倍aPTT,2.55倍PT。结论:在大肠杆菌中成功表达了具有很好生物活性的Trx-NAP5融合蛋白,为研究开发NAP5的功能与应用奠定了基础。
吴亚敏邓莉彭礼飞杨陈胡晶晶付汉维
关键词:融合蛋白大肠杆菌
十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶基因的克隆与表达被引量:1
2009年
目的克隆十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶(AdMn-SOD)基因,并在大肠埃希菌中表达。方法用3′RACE及RT-PCR技术扩增获得AdMn-SOD全长cDNA编码序列;设计引物,克隆AdMn-SOD成熟肽编码序列,连接到原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况,诱导表达的重组蛋白用Ni亲和层析进行纯化。结果成功克隆获得AdMn-SOD全长cDNA序列,推导编码的氨基酸序列具有Mn-SOD的保守结构特征;构建了pET32a/AdMn-SOD原核表达重组质粒,AdMn-SOD在大肠埃希菌中得到高效表达,表达的融合蛋白的分子质量单位约为40ku。结论成功克隆并表达了十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶基因,为进一步了解十二指肠钩虫锰超氧化物岐化酶的特性与功能奠定了基础。
付汉维邓莉何庆丰吴亚敏彭礼飞
关键词:十二指肠钩虫
十二指肠钩虫脂肪酸与视黄醇结合蛋白(Ad-FAR-1)基因的克隆及原核表达被引量:1
2007年
目的克隆十二指肠钩虫脂肪酸与视黄醇结合蛋白(Ad-FAR-1)基因并在大肠杆菌中表达。方法运用3′RACE及RT-PCR技术分别扩增Ad-FAR-1 cDNA部分片段,获得序列经拼接后利用在线BLAST程序检索GenBank中相似的核酸序列及推导的氨基酸序列;设计引物,将Ad-FAR-1成熟肽编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆到Ad-FAR-1全长cDNA序列并构建了pET32a/Ad-FAR-1原核表达重组质粒,Ad-FAR-1融合蛋白在大肠中得到了高效表达。结论成功获得并表达了十二指肠钩虫脂肪酸与视黄醇结合蛋白(Ad-FAR-1)基因,为进一步研究该蛋白的特性与功能奠定了基础。
彭礼飞胡晶晶邓莉杨陈甘伟琼吴亚敏付汉维
关键词:十二指肠钩虫原核表达
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