吴丛梅
- 作品数：86 被引量：152H指数：6
- 供职机构：长春工业大学化学与生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 犬干扰素α制备工艺的优化被引量：1
- 2012年
- 根据Genbank的犬干扰素α序列,经密码子优化后,设计并合成了编码CaIFN-α蛋白的基因片段。CaIFN-α基因与pBV220温度诱导表达载体连接,转化大肠杆菌BL21。经培养、升温诱导表达,目的蛋白以包涵体的形式存在,蛋白分子量约为18000,蛋白表达量为25%。菌体经超声破碎、变性、复性后,目的蛋白纯度为69%,收率为28%;疏水层析后,目的蛋白纯度87%,收率为81%;分子筛层析后,目的蛋白纯度为96%,收率为90%。纯化的CaIFN-α蛋白的生物学比活性为3×107 IU/mg,内毒素≤10 EU/mg,符合兽用药要求。此制备工艺总产率高达20%、重现性好,适用于大规模生产。
- 殷玉和李莹莹刘新涛吴丛梅
- 关键词：原核表达纯化
- 生物工程专业学生新培养模式
- 2012年
- 生物工程产业是目前国家重点支持的领域,新技术的快速发展也带动了生物工程成为最有前途和希望的产业。但是由于我国生物工程方面起步较晚,基础比较薄弱,对毕业生的需求没有形成规模,造成就业形势紧张。在目前情况下,我们根据对人才市场需求的跟踪和了解,改变相关的教学模式,尽力适应行业发展需要,使学生更好掌握专业知识的同时,有更好的发展前景。
- 吴丛梅殷玉和高冷李东风
- 关键词：生物工程
- 含金属硫蛋白3内置佐剂的破伤风毒素C片段重组抗原的构建及其免疫原性分析
- 2025年
- 将金属硫蛋白3(MT-3)基因序列与破伤风毒素C片段(HC)基因序列通过连接子进行融合,构建pET30a-MT-3-HC重组质粒,转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,重组质粒经双酶切鉴定。诱导M_(3)C重组蛋白表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,Ni-NTA亲和层析纯化。将PBS、HC、TT(破伤风类毒素)、M_(3)C、M_(3)C+CpG(复合佐剂)5组疫苗肌肉注射小鼠,每隔7 d进行1次免疫,共3次,定期从尾静脉采集血样。采用ELISA法测定血清中特异性IgG抗体滴度的变化,并在第28天测定抗体分型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM)和细胞因子(IL-4、IFN-γ)水平。结果显示,pET30a-MT-3-HC重组质粒构建成功,超声破碎诱导的细菌培养上清液中M_(3)C重组蛋白高表达,纯化后观察到单条带;ELISA结果显示,M_(3)C+CpG组特异性IgG抗体滴度在第3次免疫后14 d达到峰值,为3.54×10~5,分别是HC组、TT组和TT组的141、70和6.6倍;抗体分型分析显示,与PBS、HC和TT组相比,M_(3)C组和M_(3)C+CpG组特异性抗体分型滴度显著升高(P<0.05),其中M_(3)C组IgG1/IgG2a比值大于1,而M_(3)C+CpG组IgG1/IgG2a比值约为1;M_(3)C组和M_(3)C+CpG组血清中IFN-γ和IL-4浓度也显著高于其他试验组(P<0.05)。结果表明,含有MT-3内置佐剂和破伤风毒素C片段的抗原成功表达,并表现出较强的免疫原性,为这种重组疫苗的研制奠定了试验基础。
- 张玉蝶刘冰刘冬禹郭巾玲吴丛梅殷玉和
- 关键词：重组疫苗
- pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建 pEgr-P16重组质粒并检测其在人食管癌细胞系EC9706中的辐射诱导表达。 方法 :人P16cDNA基因连接到Egr-1启动子的下游构建成 pEgr-P16重组质粒 ,利用脂质体介导转染人EC9706细胞 ,用Westernblot方法检测不同剂量γ射线照射后被转染细胞中P16的表达。结果 :酶切鉴定证实 pEgr-P16重组质粒构建正确。被 pEgr-P16重组质粒转染的人食管癌EC9706细胞经不同剂量γ射线照射后 ,P16基因表达均高于未照射组。 结论
- 吴丛梅黄天华吴德生谢庆东徐小虎
- 关键词：EGR-1启动子Γ射线P16表达食管癌细胞系WESTERNBLOT
- 水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及病毒样颗粒制备被引量：4
- 2021年
- 试验旨在制备水貂肠炎病毒(Mink enteritis parvovirus,MEV)可溶性VP2蛋白及其病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。优化并合成MEV VP 2基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),将重组质粒pET-30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转化到宿主菌ER2566中,以不同培养温度、L-阿拉伯糖浓度和IPTG浓度进行诱导表达,收集样品进行SDS-PAGE和Western blotting分析。通过硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法对表达产物进行纯化,由SDS-PAGE进行鉴定,透析去除蔗糖,通过动态光散射技术(DLS)和透射电子显微镜(TEM)观察不同组装条件下VLPs的粒径和形态。用制备的MEV VLPs疫苗免疫水貂评价其免疫原性。结果显示,以2 g/L L-阿拉伯糖、0.2 mmol/L IPTG、25℃培养16 h为诱导条件时,VP2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量约为65 ku。经Western blotting鉴定VP2蛋白具有良好的抗原特异性。将此表达产物利用硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法纯化后,纯度可达90%以上。在pH 8.0,150 mmol/L NaCl的透析液中,VP2经自组装可形成与天然MEV形状和粒径相似且具有血凝特性(1∶214)的VLPs。VLPs疫苗免疫水貂21 d后,测得水貂血清中的血凝抑制(HI)抗体水平均相对最高,可达1∶211,说明该VLP疫苗有较好的免疫原性,能有效预防MEV的感染。本试验结果表明,将pET-30a-VP2与pTf16在原核表达系统中共表达,可获得具有高免疫原性的VLPs,为后期MEV VLPs疫苗的研发奠定基础。
- 吴铭洁夏霖亚王蕾张宁罗国良殷玉和吴丛梅
- 关键词：VP2原核表达病毒样颗粒
- 生物工艺学课程教学之体会被引量：3
- 2009年
- 本文通过对生物工艺学课程的长期教学,在教材选用、教学方法、教学手段及实验教学等几方面总结出若干教学经验。
- 牛晓晖高冷吴丛梅殷玉和张秀英
- 关键词：生物工艺学教学方法实践教学
- 响应面法优化文冠果油脱色工艺的研究被引量：6
- 2013年
- 探讨了文冠果油用复合脱色剂(活性白土/活性炭)脱色的工艺条件。在单因素实验的基础上,以脱色温度、脱色时间、脱色剂用量和搅拌速率为自变量,脱色率为响应值,采用Box-Behnken实验设计方法,考察各变量及其交互作用对脱色率的影响,利用Design Expert软件模拟得到回归方程的预测模型。确定文冠果油的最佳脱色条件为:脱色温度50℃、脱色时间31min、脱色剂用量4%、搅拌速率19r.min-1,在此条件下,脱色率为90.38%。
- 吴丛梅赵先花杨爽高冷
- 关键词：脱色响应面法
- pEgr-TNFα质粒的构建及基因-放射治疗小鼠黑色素瘤的实验研究被引量：11
- 2004年
- 目的 研究pEgr TNFα重组质粒的构建及其联合放射治疗抑制小鼠黑色素瘤的效果和对免疫系统的影响。方法 将TNFαcDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点 ,用Egr 1的启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子 ,构建成pEgr TNFα重组质粒 ;建立小鼠B16黑色素瘤动物模型 ,肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒 ,在不同时间测量肿瘤体积 ,并检测照后 15d部分免疫学指标。结果 pEgr TNFα基因 放射联合治疗后第 3～ 15天 ,肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯基因治疗组和空质粒对照组。小鼠脾脏NK细胞毒活性、IL 2分泌活性、腹腔巨噬细胞TNFα和IL 1β活性均明显高于单纯放疗组。结论 pEgr TNFα基因 放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗组和单纯基因治疗组 ,同时可以减轻放疗对机体免疫功能的损伤。
- 吴丛梅李修义
- 关键词：黑色素瘤小鼠
- 一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用
- 本发明提供了一种抗犬细小病毒的基因工程抗体及其应用，涉及抗体工程技术领域，将已获得的犬细小病毒单克隆抗体的可变区序列与犬源抗体恒定区进行组装，得到抗犬细小病毒的基因工程嵌合抗体，经过试验验证，所述基因工程抗体的细胞上清液...
- 殷玉和吴丛梅李希辰赫玉芳李雪石晶雷欢赵林烨
- 吲哚喹唑啉衍生物的合成与表征被引量：3
- 2011年
- 以苯胺衍生物为原料,经缩合、环化反应合成靛红衍生物,用所合成的靛红衍生物与靛红酸酐缩合得到色胺酮衍生物,再经肟化、酯化、Williamson反应合成了6种新的6-肟醚(酯)基吲哚喹唑啉类化合物。用元素分析、1HNMR、MSI、R对合成产物的结构通过表征,确定了化合物结构。
- 韩爽李东风吴丛梅马欣荣宋镕光王云
- 关键词：衍生物
