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孙洁: 作品数：83 被引量：258H指数：9; 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家高技术研究发展计划深圳出入境检验检疫局科研项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学理学轻工技术与工程更多>>

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多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分被引量：45: 2009年; 根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T20190-2006方法分别对17种不同源性动物DNA和200份不同来源样品DNA进行牛羊源性成分检测,数据显示两者检测结果符合率达100%,特异性相当。与国标方法相比,本试验方法不需电泳、酶切和测序,即可在一个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊3种源性成分,检测效率提高近3倍;灵敏度更高,比国标方法灵敏10倍;适用性更广,除了饲料,还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。; 曾少灵秦智锋阮周曦花群义卢体康吕建强陈书琨曹琛福张彩虹孙洁陈兵吴绍精; 关键词：细胞色素B基因

鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立被引量：2: 2010年; 为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。; 詹爱军王新卫陈书琨孙洁陈兵阮周曦花群义; 关键词：液相芯片

禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立被引量：1: 2009年; 针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐,耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷,为了提高检测效率和通关速度,借助胶体金半定量检测技术,以禽流感HI抗体滴度24为临界值,研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A/Chicken/Hongkong/SZ-HI/1997(H5N1)病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌,IPTG诱导表达4h后,SDS-PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料,采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡,确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强,与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致,检测HI抗体滴度为24鸡血清时结果符合率达94%。; 陶虹秦智锋卢体康储成群曾少灵林庆燕花群义吕建强詹爱军陈书琨孙洁曹琛福阮周曦陈兵毕英佐; 关键词：禽流感抗体检测

非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立被引量：20: 2009年; 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。; 曾少灵花群义张彩虹曹琛福秦智锋阮周曦杨俊兴卢体康吕建强孙洁陈兵林庆燕杨云庆; 关键词：非洲猪瘟病毒聚合酶链反应

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：15: 2018年; 为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRo VA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特异性引物和用3种荧光基团标记的核酸探针,通过条件优化建立了针对这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测PEDV、TGEV和PRo VA,而与其它病原无交叉反应;对TGEV、PEDV和PRo VA的最低检测量分别为1.12拷贝/μL、39拷贝/μL和25拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于5%;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率达100%。该方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为猪病毒性腹泻疾病的流行病学调查和分子生物学快速诊断奠定了基础。; 李军蔡良语陈兵刘建利孙洁陈书琨林庆燕陶虹吴绍强卢体康陈金顶秦智锋; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测

一种水泡性口炎病毒重组N蛋白抗原及其制备方法: 本发明属于基因工程技术领域，具体地涉及一种水泡性口炎病毒重组N蛋白抗原及其制备方法。一种水泡性口炎病毒重组N蛋白抗原，其氨基酸序列为SEQ ID No.1所示；编码该重组N蛋白抗原的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No...; 孙洁杨俊兴廖立珊刘建利花群义吕建强张彩虹曾少灵阮周曦陶虹; 文献传递

液相色谱-串联质谱法测定家畜尿液中6种β-兴奋剂残留的不确定度评定被引量：3: 2017年; 采用液相色谱-串联质谱法对家畜尿液中莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、西马特罗和妥布特罗6种β-兴奋剂残留的不确定度进行评定,根据《测量不确定度的评定与表示》等相关技术规范要求,通过建立数学模型,对测量重复性、标准曲线、样品量取体积、定容体积、标准溶液、提取回收率等不确定因素进行了评定,对测量结果的各不确定度来源进行分析和量化。得出家畜尿液中莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、西马特罗和妥布特罗6种β-兴奋剂残留的扩展不确定度分别为:0.107、0.062、0.154、0.218、0.063和0.244。; 刘建利杨俊兴曹琛福孙洁张彩虹陈泽华林彦星吕建强秦智锋花群义; 关键词：Β-兴奋剂不确定度

非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立被引量：16: 2013年; 为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。; 曾少灵廖立珊唐金明杨俊兴阮周曦张彩虹曹琛福吕建强秦智锋林庆燕孙洁叶弈优谢晓露花群义; 关键词：非洲猪瘟病毒间接ELISA

实时荧光定量PCR检测畜禽肉制品中鸭源性成分被引量：13: 2016年; 根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的存在;重复性好,同DNA浓度所测得Ct值的变异系数均小于3%;应用该法对模拟混合样品进行检测,结果与预期相符,且常见肉类DNA的存在并不影响该法对鸭源性成分检测的灵敏度。说明本试验建立的鸭源性成分实时荧光定量PCR法特异、敏感、稳定,可快速准确检测畜禽肉制品中含有的鸭源性成分。; 林彦星张彩虹阮周曦刘建利宗卉廖立珊孙洁杨俊兴吕建强花群义曹琛福; 关键词：实时荧光定量PCR

小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定: 2012年; 用基因工程表达的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,获得2株稳定分泌抗PPRVH蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C6和4B10),其细胞培养上清液ELISA效价分别为1:256和1:128,腹水ELISA效价分别为1:128000和1:64000。亚型鉴定表明,2C6和4B10分别为IgG2b和IgG2a。ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与PPRVH蛋白和PPRV反应,不与其它相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好。这2株单克隆抗体的获得为研究PPRVH蛋白生物学特性及建立PPRV免疫学检测方法奠定了基础。; 孙洁杨俊兴吕建强阮周曦陶虹陈兵秦智锋花群义; 关键词：小反刍兽疫病毒单克隆抗体

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