张清
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 在酿酒酵母中共表达sXYLA和XKS1及木糖发酵的初步研究被引量：2
- 2008年
- 为改善重组酵母发酵木糖生产乙醇的能力,将定点突变改造后的Thermus thermophilus木糖异构酶基因sXYLA克隆到酵母表达载体pYX212并用于转化酸酒酵母Saccharomyces cerevisiae YPH499进行表达研究。酶活检测表明,改造后的木糖异构酶活性是未改造的1.91倍。在此基础上将改造后具有良好特性的木糖异构酶基因sXYLA和来自酸酒酵母的木酮糖激酶基因XKS1耦联,构楚得到重组表达质粒pYX-sXYLA- XKS1,在酿酒酵母YPH499中实现组成型共表达。结果表明,在84 h时重组菌发酵液酶活达到最高,木糖异构酶为0.624 U/mg蛋白,木酮糖激酶为0.688 U/mg蛋白。以葡萄糖和木糖为混合碳源初步进行半通氧发酵,代谢产物分析表明酸酒酵母重组菌木糖的消耗为4.75 g/L,乙醇的产量为0.839 g/L,分别比出发菌提高20.9%和14.8%,为酿酒酵母利用木糖发酵乙醇奠定基础。
- 张清严明李永建李艳来灿钢许琳
- 关键词：木糖异构酶木酮糖激酶酿酒酵母木糖
- 里氏木霉木聚糖酶XYN II基因在毕赤酵母中的分泌表达被引量：8
- 2007年
- 采用RT—PCR方法克隆到里氏木霉RutC-30木聚糖酶（XYNⅡ）的cDNA序列。测序结果表明，XYNⅡ的cDNA基因开放阅读框长度为669bp，编码223个氨基酸，N端1～19个氨基酸为潜在的信号肽序列，删去潜在信号肽序列，将里氏木霉木聚糖酶的基因（xynⅡ）构建到巴斯德毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K上，线性化后电击转化到巴斯德毕赤酵母中，经G418筛选和PCR鉴定后的转化子用1％的甲醇进行诱导，对重组木聚糖酶活检测显示该基因能在毕赤酵母中表达有生物活性的XYNⅡ并分泌到胞外。发酵液中的酶活在诱导培养60h达到1．45IU／mL，最适酶解温度为50℃，最适pH值为6．0。
- 欧阳嘉王向明张清严明许琳
- 关键词：里氏木霉木聚糖酶毕赤酵母分泌表达
- 酿酒酵母CICC1747醛糖还原酶基因的克隆及表达被引量：1
- 2006年
- 采用PCR技术以酿酒酵母CICC1747基因组DNA为模板扩增得到醛糖还原酶基因GRE3,插入到pET-15b载体的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,构建了酿酒酵母醛糖还原酶原核表达载体pET-15b-GRE3。将该载体转化到大肠杆菌菌株Rosetta(DE3)中,重组菌株用IPTG诱导表达,采用紫外分光光度法测定醛糖还原酶活力,并对其表达条件进行初步优化。SDS-PAGE电泳结果显示在分子量约37 kD处有明显的特异性蛋白质条带。发酵液的比酶活最高为54.94 mU/mg,与酿酒酵母野生菌株相比提高了近10倍。
- 曹丹燕李艳张清许琳严明
- 关键词：酿酒酵母醛糖还原酶克隆
