彭长亮
- 作品数：18 被引量：13H指数：2
- 供职机构：山东大学第二医院更多>>
- 发文基金：山东省科技发展计划项目山东省自然科学基金山东省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学航空宇航科学技术文化科学更多>>
- 腺相关病毒介导β-神经生长因子基因转染内皮祖细胞
- 2015年
- 背景:基因疗法为许多难治性疾病的治疗带来了新思路,选择合适的细胞、基因及载体是基因治疗的关键。目的:利用重组腺相关病毒载体介导β-神经生长因子基因转染大鼠骨髓源内皮祖细胞,观察目的基因β-神经生长因子的表达情况及对内皮祖细胞增殖的影响。方法:分离、培养、鉴定大鼠骨髓源内皮祖细胞,使用携带β-神经生长因子基因的重组腺相关病毒(r AAV-GFP-β-NGF)转染内皮祖细胞,根据绿色荧光蛋白荧光表达情况检测转染效率。利用ELISA法在蛋白水平检测β-神经生长因子的表达情况,MTT法检测目的基因对内皮祖细胞增殖活性的影响。结果与结论:成功从大鼠骨髓中分离培养出内皮祖细胞,经鉴定符合内皮祖细胞特征。β-神经生长因子基因成功转染内皮祖细胞,转染率为65.3%。基因转染组细胞培养上清中检测到β-神经生长因子蛋白的表达,且可持续10 d,空白组和空载病毒转染组未检测到β-神经生长因子的表达。重腺相关病毒转染后内皮祖细胞增殖活性增高,与空载病毒转染组和空白组相比差异有显著性意义(P<0.05),空白组和空载病毒转染组之间增殖活性差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明,经重组腺相关病毒介导可成功将β-神经生长因子基因转染入大鼠骨髓源内皮祖细胞,使其持续表达β-神经生长因子蛋白并促进内皮祖细胞增殖。
- 杨中雁高春正吴东进彭长亮
- 关键词：干细胞内皮祖细胞基因转染细胞培养
- 脊髓损伤修复的复合透明质酸水凝胶支架的构建及其评价被引量：1
- 2017年
- 目的评价接枝Nogo-66受体(NgR)抗体和多聚左旋赖氨酸(PLL)的透明质酸(HA)水凝胶支架的作用,及转染β神经生长因子(β-NGF)基因的内皮祖细胞(EPCs)能否在支架内稳定表达外源基因。方法采用冰冻干燥法制备多孔HA水凝胶材料,将NgR抗体和PLL接枝到HA支架上。体外培养EPCs,并通过携带β-NGF腺病毒转染EPCs,将EPCs与支架共培养,通过扫描电镜观察支架结构,将细胞按处理方式及培养方式分为β-NGF+组、Scaffold-β-NGF+组、β-NGF-组、Scaffold-β-NGF-组、对照组和Scaffold-对照组。采用细胞活力(CCK-8)法及HE法检测EPCs在支架上的生长情况,采用乳酸脱氢酶(LDH)-细胞毒性法检测支架的细胞毒性,采用ELISA法、Rt-PCR法和Western blotting法检测β-NGF的表达。结果制备的支架具备三维多孔结构,孔径(200±15)μm,大小较均一,EPCs在支架上的生长明显优于培养板中的生长状况(F=468 518.044,P<0.001),且随时间推移,细胞数目差异有统计学意义(F=2 678 658.138,P<0.001),支架的细胞毒性相比培养板无明显异常(F=0.680,P=0.429)。EPCs在支架上可以稳定表达β-NGF,且Scaffold-β-NGF+组mRNA及蛋白质的表达量均优于β-NGF+组(mRNA:F=651.554,P<0.001;蛋白:F=14 671.733,P<0.001)。结论 EPCs与NgR抗体-PLL复合A水凝胶支架具有良好的生物相容性。该HA水凝胶支架有望作为修复脊髓损伤的组织工程载体。
- 刘东朱冬昀彭长亮张程赵杰高春正
- 关键词：腺病毒Β-神经生长因子内皮祖细胞脊髓损伤
- 青少年腰椎间盘突出症的特点和术后病理改变
- 目的 研究青少年腰椎间盘突出症( ALDH )的特点和手术效果不佳患者的病理改变。方法 回顾性分析301 例手术治疗的ALDH 患者的病因、影像学特点和疗效。
- 王修文谯勇李季彭长亮
- 关键词：腰椎椎间盘突出病理
- 重组腺病毒介导的β-神经生长因子基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究被引量：1
- 2017年
- [目的]探究携带β-神经生长因子(β-NGF)基因的重组腺病毒转染大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)的最佳感染复数(MOI),并从基因转录和蛋白合成两个水平上观察转染后EPCs对β-NGF基因的表达,探讨其对脊髓损伤后神经元细胞微环境的影响。[方法]密度梯度离心法分离、全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓源EPCs,免疫荧光法检测EPCs特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2的表达。用不同MOI值的携带β-NGF基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)的重组腺病毒转染EPCs,确定最佳的MOI值。用携带β-NGF基因的重组腺病毒转染的细胞为β-NGF基因组,用空载的重组腺病毒转染的细胞为空载组,未转染的细胞为空白组。RT-PCR法、Western blot法和ELISA法检测β-NGF的表达。[结果]成功分离、培养出大鼠骨髓源EPCs,特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2经鉴定呈阳性表达;携带β-NGF基因的重组腺病毒转染EPCs最佳的MOI为70;转染成功的细胞β-NGF基因在m RNA和蛋白两个不同的水平上表达都升高,并持续向细胞外分泌。[结论]携带β-NGF基因的重组腺病毒可成功转染EPCs,成功转染β-NGF基因的细胞能持续向细胞外分泌有活性的β-NGF蛋白。
- 刘鹏朱冬昀彭长亮马腾吴东进高春正
- 关键词：内皮祖细胞神经生长因子腺病毒
- 髓内钉治疗多段股骨干骨折克氏针辅助复位技巧
- 目的 介绍多段股骨干骨折髓内钉固定术中克氏针辅助闭合复位的手术技巧.方法 选择2009年1月～2014年1月应用施乐辉公司提供的髓内钉治疗的多段股骨干骨折16例，其中男11例，女5例，年龄19～53岁，平均36.3岁.A...
- 彭长亮王修文武士清吴东进高春正
- 关键词：股骨干骨折复位髓内钉
- 椎板截骨原位回植小钛板固定术治疗腰椎管狭窄症被引量：3
- 2018年
- [目的]探讨椎板截骨原位回植小钛板固定术治疗腰椎管狭窄症的疗效。[方法]2002年1月~2006年3月86例患者在本院采用椎板截骨原位回植小钛板固定术治疗腰椎管狭窄症。选择其中有完整随访记录的43例纳入本回顾研究,男29例,女14例,平均年龄(59.34±12.42)岁(29~75岁),随访时间10~14年,平均(11.82±8.65)年。记录临床资料与并发症,采用视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数评分(ODI),并测量CT椎管矢状径、椎管横径评价临床疗效。[结果]43例患者均顺利手术,术中2例发生硬膜破裂立即修复。单椎板截骨者手术时间91~122 min,平均(111.23±8.93)min;出血量200~350 ml,平均(287.22±11.12)ml;两椎板截骨者手术时间118~165 min,平均(149.28±14.71)min,出血量235~480ml,平均(308.21±11.27)ml。术后出现1例脑脊液漏、1例刀口延迟愈合、2例单侧肢体肌力短时期减弱、1例肺部感染、1例泌尿系感染、1例腰椎不稳、3例腹胀和便秘,上述问题经相应处理治愈,无严重不良后果。术后VAS及ODI评分较术前显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。术后椎管矢状径、横径均较术前明显扩大,差异有统计学意义(P<0.05)。末次随访时,所有患者椎板均骨性融合,未见椎板移位、椎管狭窄及硬膜囊受压。[结论]椎板截骨原位回植小钛板固定术治疗腰椎管狭窄症远期临床疗效满意,此术式较传统椎板减压术具有可重建腰椎后柱完整性及稳定性的优势。
- 张程彭长亮高春正马胜忠
- 关键词：腰椎管狭窄症椎板截骨椎板回植
- 椎体成形术对兔手术椎体相邻椎间盘的影响
- [目的]探讨椎体成形术(vertebroplasty,VP)是否会引起兔手术椎体相邻椎间盘的退变,以及椎间盘的退变程度与聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylate,PMMA)用量的相关性。
- 张程范晓光武士清彭长亮高春正马胜忠
- 关键词：骨质疏松PVPPMMA椎间盘
- 胫骨平台骨折MRI检查对治疗的价值探讨
- 目的 评价MRI对胫骨平台骨折的诊断和临床应用价值。方法 34例胫骨平台骨折患者经X线平片检查后作MRI扫描。结果 MRI能准确显示骨折及合并的膝关节结构的损伤(包括关节软骨断裂、半月板撕裂和移位、侧副韧带的损伤)根据M...
- 彭长亮任婷婷郭卫王修文高春正
- 关键词：胫骨平台骨折膝关节损伤磁共振成像
- 一种新型可滑动椎弓根钉棒系统在腰椎退行性疾病中的应用
- 目的 探讨一种新型可滑动椎弓根钉棒系统治疗腰椎退行性疾病的疗效及安全性.方法 回顾性分析2014年6月至2015年9月采用新型可滑动钉棒系统对71例腰椎退行性疾病患者行腰椎融合术的病例资料,年龄30-73岁,平均57.6...
- 彭长亮张程赵杰王修文
- 关键词：腰椎融合腰椎退行性疾病
- siRNA抑制转化生长因子-β1对小鼠黄韧带骨化的影响被引量：6
- 2014年
- 目的运用RNA干扰(RNAi)技术抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)在小鼠黄韧带成纤维细胞中的表达,探讨其对脊柱黄韧带骨化的影响。方法培养小鼠黄韧带成纤维细胞,经人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导骨化,对骨化成功的黄韧带细胞(成骨细胞)进行形态学观察,并对其进行碱性磷酸酶(ALP)染色及钙结节茜素红染色鉴定;构建靶向TGF-β1基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体(siRNA-pSilencer2.0U6-TGFβ1)并转染成骨细胞,分为3组:真核表达载体转染后细胞为实验组,空载体转染后细胞为阴性对照组,未转染细胞为空白对照组。应用免疫荧光技术检测转染前后细胞中TGF-β1、BMP-2的表达;RT-PCR检测TGF-β1 mRNA在细胞内表达变化;Western blotting检测TGF-β1和BMP-2蛋白在细胞内表达变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中ALP、骨钙素(OC)水平的变化。结果经诱导骨化成功后,小鼠黄韧带细胞形态学观察可见细胞ALP染色、钙结节茜素红染色均呈阳性,具有典型成骨细胞生物学特征。构建的siRNA表达载体对细胞转染后,免疫荧光检测显示TGF-β1和BMP-2荧光强度下降;RT-PCR检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA表达分别下降41.94%、47.82%,差异有统计学意义(P<0.01);Western blotting检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组TGF-β1/β-action蛋白表达比值分别下降35.88%、44.75%,差异有统计学意义(P<0.01);BMP-2/β-action蛋白表达比值分别下降81.79%、86.06%,差异有统计学意义(P<0.01);ELISA检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组ALP分别下降24.14%、32.30%,差异有统计学意义(P<0.01);OC分别下降17.01%、21.63%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论构建靶向TGF-β1基因的siRNA真核表达载体能够有效抑制成骨细胞中TGF-β1以及内源性BMP-2表达,达到抑制脊柱黄韧带骨化的目的。
- 张颖哲吴东进彭长亮李波翰宋扬张程赵杰李德全杨中雁刘鹏赵坤马胜忠高春正
- 关键词：骨化骨钙素转化生长因子-Β1骨形态发生蛋白-2
