徐馀信
- 作品数：51 被引量：161H指数：7
- 供职机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫中国大陆株硫氧还蛋白基因及其克隆表达方法和应用
- 本发明涉及日本血吸虫(中国大陆株)硫氧还蛋白(SjcTrx)基因的序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的SjcTrx基因具有序列1所示的核苷酸序列及编码相应的氨基酸序列。本发明还公开了SjcTrx基因在大肠杆菌中的表达...
- 曹建平韩海勃刘述先徐馀信汤林华沈玉娟李小红卢潍媛
- 日本血吸虫新基因Sj79的分子特征及RNA干扰效应
- 2015年
- 目的研究日本血吸虫新基因Sj79的结构特征及特点,并进行RNA干扰以观察其RNAi效应,为进一步研究其在抗血吸虫生殖发育中的作用及机制提供依据。方法利用NCBI数据库中已公开的日本血吸虫EST序列信息对Sj79的分子结构特征进行分析,并对不同虫期和性别血吸虫的Sj79的mRNA表达水平进行分析,对雌虫进行Sj79的siRNA浸泡干扰,干扰后采用定量PCR检测Sj79转录本相对表达水平变化。结果 Sj79蛋白的开放阅读框含有696对碱基,由一个外显子构成。该基因具有明显的期特异性,在雌虫中转录水平较高。siRNA片段浸泡3 d后,低剂量(20 nmol/L)siRNA-1组Sj79转录本的表达水平[(41.0±12.3)%]低于siRNA-NC组[(103.2±14.4)%],差异有统计学意义(t=3.28,P<0.05);高剂量(200 nmol/L)siRNA-1组[(15.8±10.9)%]、siRNA-2组[(11.1±8.8)%]虫体Sj79转录本的相对表达水平均低于siRNA-NC组[(100.1±6.3)%],差异均有统计学意义(t=13.44、27.84,P均<0.01),前二者对Sj79转录本的转录抑制率可达84.2%、88.9%。si RNA片段浸泡7 d后,仅低剂量siRNA-1[(43.4±4.5)%]、siRNA-2[(62.5±5.4)%]干扰后虫体Sj79转录本的相对表达水平低于siRNA-NC组[(100.4±5.2)%](t=8.33、5.07,P均<0.01)。结论本研究完善了Sj79基因的mRNA序列和基因组信息,了解了其结构特征,并用siRNA干扰法筛选到了有效的si RNA-1和si RNA-2片段,有利于后续观察Sj79分子干扰对体外雌虫产卵的影响。
- 姜岩岩袁忠英徐馀信臧炜曹建平王莹尹建海沈玉娟
- 关键词：日本血吸虫分子特征RNA干扰
- 诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白、其制备方法和用途
- 本发明公开了一种诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白(其氨基酸序列如SEQID NO：1所示)。此外，本发明还公开了上述重组抗原蛋白的制备方法，包括采用RT-PCR扩增EgEPC1基因，将其克隆到pGEM-T载体中，再将其与表...
- 曹建平蔡辉霞沈玉娟韩秀敏胡媛王虎卢潍媛徐馀信官亚宜
- 东方田鼠肝内巨噬细胞的分离和鉴定
- 2015年
- 目的对东方田鼠(Microtus fortis,Mf)肝内巨噬细胞进行分离纯化和功能鉴定。方法采用在体灌注、胶原酶消化及梯度密度离心相结合的方法分离Mf肝内巨噬细胞,并采用流式和墨汁吞噬功能实验进行巨噬细胞的功能鉴定。结果通过此方法获得Mf肝脏来源的巨噬细胞,分离的细胞呈透亮圆形,贴壁生长,活细胞比例为95%。Mf来源的巨噬细胞与抗鼠CD14流式单抗(Clone:Sa2-8)阳性结合率是小鼠来源巨噬细胞与该抗体结合率的50%左右。Mf肝脏来源的巨噬细胞墨汁吞噬实验阳性。结论该方法能有效地分离纯化Mf肝内巨噬细胞,可为进一步研究东方田鼠肝脏巨噬细胞抗血吸虫机制奠定基础。
- 胡媛孙磊徐馀信曹建平
- 关键词：东方田鼠日本血吸虫巨噬细胞天然免疫
- 安氏隐孢子虫热休克蛋白编码基因的克隆、表达和分析被引量：9
- 2007年
- 目的克隆、表达和分析安氏隐孢子虫Mr70000热休克蛋白(CaHSP70)的部分编码基因。方法依据公布的CaHSP70基因序列设计引物,以江苏徐州安氏隐孢子虫(XZ-BOV)总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后,亚克隆入pET28a原核表达载体,构建重组质粒pET28a-CaHSP70,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并获得纯化的重组蛋白(简称为rCaHSP70)。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)和ELISA对该重组蛋白进行分析和鉴定。采用相关生物信息学软件对序列进行分析。结果根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的CaHSP70一致。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,重组蛋白(rCaHSP70)Mr约为43000(含6个组氨酸),以包涵体的形式存在,可被辣根过氧化物酶标记的抗组氨酸抗体、安氏隐孢子虫感染的小鼠血清、微小隐孢子虫感染的儿童血清和rCaHSP70免疫小鼠血清识别。rCaHSP70存在多个功能位点和潜在的抗原决定簇。种系发生分析表明XZ-BOV与安氏隐孢子虫进化关系最近。ELISA检测结果表明,rCaHSP70免疫的C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠血清特异性抗体滴度均显著高于免疫前。结论XZ-BOVHSP70部分编码基因的克隆获得成功,研究获得的重组蛋白具有一定的免疫原性和免疫反应性。
- 刘海鹏曹建平李小红卢潍媛沈玉娟徐馀信臧炜刘述先
- 关键词：安氏隐孢子虫热休克蛋白重组抗原表位分析
- 四种刺激剂对日本血吸虫感染小鼠脾脏CD8^＋T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响被引量：3
- 2017年
- 目的探讨4种常用刺激剂佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,P)、离子霉素(ionomycin,I)、布雷非德菌素A(brefeldin A,B)和莫能霉素(monensin,M)对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染小鼠脾脏CD8+T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响。方法 21只C57BL/6雌性小鼠腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴,(20±2)条/鼠。感染后第8周和第12周,分别取小鼠脾脏制备单细胞悬液,用P(50 ng/ml)+I(1μmol/L)+M(2μmol/L)体外刺激4 h,采用流式细胞术检测分泌γ干扰素(IFN-γ)的CD8+T细胞比例,同时检测细胞表面CD62L的表达情况。制备感染后4周的小鼠脾脏单细胞悬液,按I组(1μmol/L)、P组(50 ng/ml)、B组(1μg/ml)、M组(2μmol/L)、P+I组、P+I+M组、P+I+B组、P+I+M+B组分组,用对应刺激剂体外刺激4 h后,利用细胞因子微球检测法检测各组培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-17A、IFN-γ、IL-10、IL-1β和集落刺激因子(G-CSF)等细胞因子水平,同时用流式细胞术检测CD8+T细胞表面CD62L的表达情况,计算平均荧光强度(MFI)。结果流式细胞术检测结果显示,小鼠感染日本血吸虫后第8周和第12周,产生IFN-γ的CD8+T细胞比例分别降至(1.3±0.8)%和(0.7±0.2)%,均低于未感染对照组的(5.6±0.8)%(P<0.05),但两者差异无统计学意义(P>0.05)。健康对照组和感染组小鼠CD8+T细胞表面均未检测到CD62L阳性群。不同组合刺激剂作用感染后4周,小鼠脾脏细胞培养上清细胞因子的检测结果显示,P+I组和P+I+M组的IL-4水平分别为(177.2±56.0)和(13.7±2.2)pg/ml;P+I组和P+I+M组的IL-17A浓度分别为(361.8±81.3)和(33.7±2.9)pg/ml;P+I组和P+I+M组上清中的IFN-γ浓度分别为(1 534.0±316.6)和(135.3±16.1)pg/ml;P+I组、P组和I组上清中IL-10的浓度分别为(705.5±179.6)、(34.8±13.9)和(43.1±13.9)pg/ml;P组和P+I组中G-CSF的浓度为(44.6±8.0)和(21.7±2.9)pg/ml;P组、I组和P+I+M组中IL-1β的浓度分别为(3.9±1.0)、(6.4±0.2)和(3.7±0.3)pg/ml;上述各组与其对应�
- 郑力胡媛王燕娟黄希宝沈玉娟徐馀信巩文词蔡顺祥曹建平
- 关键词：日本血吸虫细胞因子CD62LCD8^+T细胞
- 日本血吸虫副肌球蛋白全基因核酸疫苗对小鼠的抗病免疫效应被引量：22
- 2006年
- 目的探讨日本血吸虫副肌球蛋白全基因核酸疫苗(Sjc97DNA)免疫小鼠诱导的抗病免疫效应。方法将40只C57BL/6小鼠随机分成4组:疫苗组,以Sjc97DNA疫苗100μg经后腿胫前肌注射免疫小鼠,共2次,间隔3周;空质粒组,以同法、同剂量的空质粒载体免疫小鼠;上述2组分别于末次免疫后3周攻击感染30±2条日本血吸虫尾蚴;感染对照组,不作免疫,感染相同数量的日本血吸虫尾蚴;空白对照组,未作任何处理。攻击感染后7周剖杀小鼠,测量肝脏单个虫卵肉芽肿大小,测定鼠血清透明质酸及层黏连蛋白含量,PCR-ELISA检测肝组织转化生长因子(TGF-β1)mRNA的表达水平。结果Sjc97DNA疫苗组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的直径为(183.75±42.36)μm,显著小于空质粒对照组的(303.12±37.36)μm和感染对照组的(304.38±53.23)μm(P<0.01)。血清透明质酸和层黏连蛋白水平,疫苗组显著低于感染对照组(P<0.01)。肝组织TGF-β1mRNA表达水平,疫苗组亦明显低于两对照组(P<0.05)。结论Sjc97DNA核酸疫苗具有一定的抗虫卵肉芽肿及抗肝纤维化作用。
- 陈家旭刘述先曹建平宋光承徐馀信
- 关键词：日本血吸虫副肌球蛋白核酸疫苗虫卵肉芽肿
- 采用实时PCR技术比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果被引量：2
- 2009年
- 目的比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果。方法将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司(简称Promega)和上海捷瑞公司(简称捷瑞)基因组DNA纯化试剂盒的裂解液、2%TritonX-100和5%异硫氰酸胍,同时联合使用冻融法、蛋白酶K法和声裂法裂解卵囊,用试剂盒法或Chelex-100法提纯卵囊基因组DNA,用实时PCR测定隐孢子虫卵囊囊壁蛋白(COWP)基因拷贝数,以Promega试剂盒为参照比较不同纯化方法的提纯效果。结果Promega试剂盒的裂解液裂解隐孢子虫卵囊的效果最好,纯化所得卵囊COWP基因拷贝数可达(6.45～9.86)×106;其他依次为捷瑞试剂盒的裂解液[(2.38～3.69)×106]、5%异硫氰酸胍[(1.27～21.29)×105]和2%TritonX-100[(2.06～866.70)×103]。冻融法+蛋白酶K法+声裂法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果最佳,其次为冻融法+声裂法和蛋白酶K法+声裂法,冻融法+蛋白酶K法效果最差。结论冻融法+蛋白酶K法+声裂法联合使用能使卵囊DNA的提纯效率达到最大,捷瑞基因组DNA纯化试剂盒和5%异硫氰酸胍裂解法提纯隐孢子虫卵囊DNA可获得与Promega试剂盒相近的效果。
- 陈盛霞吴亮沈玉娟章秋霞李婷婷姜旭淦徐馀信曹建平
- 关键词：隐孢子虫卵囊实时PCRDNA提纯
- 日本血吸虫Sjc97 DNA疫苗免疫小鼠攻击感染后的组织细胞反应被引量：7
- 2007年
- 目的观察日本血吸虫副肌球蛋白核酸疫苗（Sjc97DNA）免疫宿主攻击感染后的皮肤及肺组织反应。方法105只C57BL／6小鼠，随机分成Sjc97DNA疫苗组、空质粒对照组和感染对照组。前两组分别以Sjc97DNA核酸疫苗、空质粒经后腿胫前肌免疫C57BL／6小鼠共2次，每次间隔3周。末次免疫后3周攻击感染，3组小鼠经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴（800＋50）条。于攻击感染后6、18、24、48、72、96、120h，每组分别剖系5只小鼠，取腹部皮肤及／或肺组织作病理观察。结果Sjc97DNA疫苗免疫小鼠攻击感染血吸虫尾蚴后，皮肤炎症反应出现早，炎症细胞杀童虫现象明显，炎症反应强烈，且持续时间长，嗜酸性粒细胞浸润百分比高；而空质粒对照组和感染对照组皮肤炎症轻，持续时间短，杀虫现象不明显。Sjc97DNA疫苗免疫鼠攻击感染后肺部出血斑点出现时间（72h）迟于空质粒对照组和感染对照组（48h）。72～120h，Sjc97DNA疫苗组小鼠肺部局灶性炎症明显，肉芽肿样结节形成，但肺泡壁多正常；而空质粒组和感染对照组小鼠肺组织炎症轻，但肺泡壁水肿有较多红细胞渗入。结论Sjc97DNA疫苗免疫增强了小鼠皮肤及肺组织的细胞反应及其杀童虫作用。
- 陈家旭刘述先曹建平宋光承徐馀信
- 关键词：日本血吸虫核酸疫苗
- 细粒棘球绦虫烯醇酶基因克隆 表达及免疫诊断研究被引量：10
- 2012年
- 目的克隆表达细粒棘球绦虫烯醇酶(EgEno)基因,并对其免疫诊断价值进行初步评价。方法从细粒棘球绦虫cDNA中扩增目的基因,克隆入表达载体pET28a,转化E.coliBL21(DE3),经异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,进行SDS PAGE和免疫印迹法鉴定;采用细粒棘球蚴病及其他几种寄生虫病患者的血清和健康人血清,通过ELISA法评价重组EgEno抗原的免疫诊断效果。结果重组质粒pET28a EgEno构建成功。SDS PAGE和免疫印迹法结果显示,重组蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,重组蛋白EgEno相对分子量约为50 kDa,可被细粒棘球蚴病患者血清识别。EgEno对细粒棘球蚴病患者血清的免疫诊断敏感性为81.25%。结论克隆出细粒棘球绦虫EgEno基因并在E.coliBL21(DE3)中表达,重组EgEno对细粒棘球蚴病有较好的免疫诊断价值。
- 王莹张璟袁忠英周何军沈玉娟徐馀信王燕娟伍卫平曹建平
- 关键词：细粒棘球绦虫克隆免疫诊断
