李锋
- 作品数：11 被引量：60H指数：4
- 供职机构：上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 维生素E和硒对肝星状细胞中金属蛋白酶1组织抑制剂mRNA表达的影响被引量：6
- 2000年
- 研究维生素E（VitE）和不同剂量硒（Se）对肝纤维化大鼠肝星状细胞（HSC）中金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）mRNA表达的影响，从分子水平揭示VitE和Se对肝纤维化的治疗作用及其机制。方法：用40％CCL4制备大鼠肝纤维化模型，并在饲料中补充VitE和不同剂量的Se进行营养干预。应用HE常规染色和Masson三色胶原染色对肝组织切片行组织病理学检查；应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，以β肌动蛋白（actin）作为内对照，检测HSC中TIMP-1mRNA表达的变化。结果：VitE补充组（250mg／kg食物）和低Se补充组（0．2mg／kg食物）大鼠与病理造模组相比，肝纤维化程度显著减轻，HSC中TIMP-1mRNA的表达显著降低（P＜0．05）；而较高剂量Se（1.0mg／kg食物）则使HSC中TIMP-1mRNA的表达呈上升趋势（与病理造模组相比，P＞0.05）。结论：VitE和适当剂量的Se能显著减轻大鼠肝纤维化程度，下调HSC中TIMP-1mRNA的表达；而过高剂量的Se则无上述作用。
- 李宣海汪余勤程五凤王丹艺李锋
- 关键词：肝硬化维生素E硒金属蛋白酶1组织抑制剂
- PNP/fludarabine自杀基因系统对人肝癌细胞HepG2体外杀伤效应被引量：4
- 2004年
- [目的]研究嘌呤核苷酸磷酸化酶(purinenucleosidephosphorylase,PNP)/氟拉达滨(fludarabine)系统对人肝癌细胞HepG2体外杀伤效应。[方法]通过基因克隆技术将E.coliK12菌株来源的PNP基因通过8个甘氨酸的linker克隆至pEGFP鄄N1载体,在LipofectAMINE2000介导下,转染人肝癌细胞株HepG2,同时进行G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,命名为HepG2/PNP。通过PCR、RT鄄PCR、Northernblot鉴定PNP基因的表达;采用MTT和AnnexinV鄄FITC观察不同浓度的fludarabine对已转染的HepG2、不同比例转染和非转染混合细胞的杀伤作用。[结果]RT鄄PCR和Northern印迹证明转染的PNP基因能在HepG2和HepG2/PNP细胞中表达;低浓度fludarabine对转染了PNP基因的HepG2细胞具有显著的细胞毒效应;AnniexV凋亡实验结果表明PNP/fludarabine自杀基因系统对HepG2细胞具有显著的诱导凋亡作用;旁观者效应显示当10%~20%的HepG2/PNP细胞与80%~90%HepG2细胞混合在fludarabine浓度为1.0μg/ml时,可出现明显的旁观者效应。[结论]PNP/flu鄄darabine自杀基因系统在fludarabine浓度为0.5μg/ml～1.0μg/ml时对人原发性肝癌细胞HepG2具有明显的杀伤作用和旁观者效应。
- 李锋张萍王楚钱关祥
- 关键词：肝癌细胞自杀基因
- 增强P18^(INK4C)表达对胃腺癌细胞侵袭的影响(英文)被引量：1
- 2004年
- 在应用基因芯片技术筛选胃腺癌转移相关基因的过程中 ,发现CDK抑制因子P18INK4C在人类胃腺癌转移细胞株RF 4 8中的表达较其原发灶细胞株RF 1明显下调 .这提示P18INK4C表达差异与胃腺癌细胞的侵袭转移可能有一定程度的相关性 .通过构建P18INK4C 表达质粒并将其转染入RF 4 8增强P18INK4C的表达 ,研究其对胃腺癌原发灶细胞体外运动、侵袭转移能力以及生长特性的影响 ,进一步明确P18INK4C与人类胃腺癌侵袭转移之间的关系 .结果发现 ,增强P18INK4C表达可以使胃腺癌原发灶细胞的体外侵袭能力明显下降 ,而对RF 4 8的细胞周期和生长增殖能并力未产生影响 .上述结果提示 ,P18INK4C参与人类胃腺癌转移过程 ,在此过程中其主要的作用可能并不是调节细胞周期 ,而是与胃腺癌原发灶细胞侵袭转移能力的调节密切相关 .
- 王楚李锋王建华应磊卢健
- 关键词：胃腺癌
- 复制型腺病毒的研究进展
- 2003年
- 腺病毒作为肿瘤治疗手段的应用最早可以追溯到上个世纪的50年代,但当时利用野生型腺病毒对30个临床病人的治疗并未获得可靠的治疗效果,因此很快研究被终止.随后的研究发展出复制缺陷型腺病毒载体,用来介导抗肿瘤基因进行肿瘤治疗,这种腺病毒载体具有很多的优越性[1]:1.
- 李锋
- 关键词：生物学腺病毒
- 大鼠尾部痛刺激后脊髓骶尾段一氧化氮合酶的变化被引量：3
- 1998年
- 用ＮＡＤＰＨｄ（还原型辅酶Ⅱ）组织化学方法观察大鼠尾部电流致痛刺激后不同时间脊髓骶尾段ＮＯＳ（一氧化氮合酶）阳性神经元的反应变化。同时用ＦＯＳ的免疫组织化学观察痛刺激后ＦＯＳ的表达。本文观察显示：电流致痛刺激后１５ｍｉｎ脊髓骶尾段ＮＯＳ反应明显增强，持续相当长时间，至痛刺激后８小时才逐渐减弱，刺激后２４小时反应强度相当于对照动物。而ＦＯＳ免疫组织化学反应，在痛刺激后３０ｍｉｎ起有少数神经元胞核浅染。由于ＮＯ极易通过细胞膜以弥散方式作用于附近细胞，激活靶细胞的鸟苷酸环化酶，从而引起靶细胞一系列反应。
- 李锋笪翠娣周敬修
- 关键词：NOS脊髓
- 维生素E和硒对CCl_4大鼠急性肝损伤和抗氧化功能的影响被引量：14
- 2002年
- 背景:氧应激在急性肝损伤的发生过程中具有重要作用,因此提高机体的抗氧化功能对防治急性肝损伤具有重要意义。目的:探讨维生素E(Vit E)和硒对CCl4大鼠急性肝损伤和抗氧化功能的影响。方法:48只健康雄性SD大鼠随机分为6组,每组8只。干预组第1周和第2周以及造模组第1周和第2周采用腹腔注射50% CCl4和橄榄油混合制剂的方式建立大鼠急性肝损伤模型,干预组在饲料中添加Vit E(250 mg/kg饲料)和硒(O.2 mg/kg饲料)进行营养干预,造模组喂饲标准饲料;对照组第1周和第2周腹腔注射生理盐水,喂饲标准饲料。第1周和第2周组大鼠分别于处理1周和2周后处死,分别检测各项肝损伤指标和抗氧化指标,并观察其含量变化。结果:对于急性肝损伤大鼠,补充适量的Vit E和硒能降低血清丙二醛(MDA)水平,干预组的血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)升高幅度明显较造模组小,肝组织羟脯氨酸含量亦相对低于造模组。造模组的肝组织和血清硒水平在第2周明显升高,而Vit E水平显著降低,并伴随着超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的显著升高,而干预组的各项指标基本维持不变。结论:CCl4致大鼠急性肝损伤时,机体对抗氧化营养素的需求明显上升,补充Vit E和硒后,机体拮抗氧应激所致急性肝损伤的能力增强。
- 李锋李宣海谢良民程五凤
- 关键词：维生素E硒急性肝损伤抗氧化功能
- 硒与肝纤维化被引量：9
- 2000年
- 硒作为体内含硒酶类的必需组分 ,具有抗肝纤维化的作用 ,但具体机制尚不明确 ,可能与其参与含硒酶拮抗氧自由基对肝脏细胞的损伤有关。
- 李锋
- 关键词：硒抗氧化肝纤维化
- 补充VE、Se对大鼠肝纤维化和抗氧化功能影响的研究被引量：24
- 2003年
- 目的 : 探讨维生素 E(VE)、硒 (Se)对 CCl4 大鼠肝纤维化和抗氧化功能的影响。方法 : 48只 SD大鼠随机分为 3组。模型组 ,采用腹腔注射 5 0 % CCl4 和橄榄油混合制剂的方式建立大鼠肝纤维化模型 ,喂饲标准饲料 ;干预组 ,处理方式同前 ,并在大鼠饲料中加 VE(2 5 0 mg/kg )和 Se(0 .2 mg/kg)进行营养干预 ;对照组 ,腹腔注射生理盐水 ,喂饲标准饲料。全部动物于处理 8w后处死。通过 HE常规染色和 Masson三色胶原染色对肝组织切片进行病理组织学检查 ;同时分别检测大鼠体内各种抗氧化指标和其他肝纤维化指标 ,并观察其变化。结果 : 干预组大鼠抗氧化能力有显著提高 ,表现在肝组织和血清 SOD、红细胞 GPX活性均显著高于模型组 ,而肝组织和血清MDA水平显著低于模型组。同时 ,干预组大鼠的肝纤维化程度显著低于模型组 ,体现在血清 ALT、AST水平、肝组织羟脯氨酸含量都显著低于模型组 ;组织病理学检查显示肝脏胶原纤维增生程度也显著低于模型组。结论 : 补充适量 VE和 Se具有提高机体抗氧化的能力 。
- 李锋李宣海程五凤谢良民
- 关键词：维生素E硒抗氧化肝纤维化
- H-2K^b-OVA复合物的构建及体内特异性CTL的诱导
- 2003年
- 在扩增了H 2Kb 基因后 ,将可生物素化的序列连接到其胞外区末端 ,构建成可溶性重组分子 ,进行原核表达。通过定点突变获得了高表达的融合蛋白 ,再利用 6×Histidinetag进行蛋白纯化 ,在对H 2Kb分子高亲和力的OVA2 57 2 64肽及 β2 m蛋白存在下 ,三者体外折叠成具有完整构象的H 2Kb OVA类分子复合物。用其作为免疫原诱导特异性CTL ,并构建H 2Kb OVA四聚体检测特异性CTL。应用H 2Kb OVA四聚体对特异性CTL检测结果与经典的细胞毒试验一致 ,同时对胞外IFN γ进行了检测。说明H 2Kb OVA复合物可有效诱导体内特异性CTL反应 ,在体外构建MHC I类分子四聚体 。
- 钱丽李锋钱关祥
- 关键词：四聚体纯化特异性CTL
- 嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402体外杀伤效应的研究被引量：2
- 2005年
- 背景:肿瘤细胞内表达的自杀基因可将无毒性的前药转化为高毒性代谢产物以杀伤肿瘤细胞,嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统具有目前已知最强的旁观者效应,成为基因治疗领域中的研究热点。目的:研究PNP/fludarabine自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402的体外杀伤效应。方法:应用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增PNP基因,通过8个甘氨酸的接头克隆至真核表达载体pEGFP鄄N1。将pEGFP鄄N鄄PNP以Lipofectamine2000转染BEL7402细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,命名为BEL7402/PNP。应用逆转录(RT)鄄PCR和RNA印迹法(Northernblotting)鉴定PNP基因的表达。分别应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和AnnexinV鄄FITC凋亡检测试剂盒检测PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞的细胞毒效应、旁观者效应和诱导凋亡作用。结果:RT鄄PCR和RNA印迹法证实转染的PNP基因能在BEL7402和BEL7402/PNP细胞中表达。低浓度fludarabine对经PNP基因转染的BEL7402细胞具有明显的细胞毒效应;旁观者效应检测显示,10%的BEL7402/PNP细胞与90%的BEL7402细胞混合,经低浓度fludarabine处理,90%的细胞可被杀死;细胞凋亡检测显示,PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞具有明显的诱导凋亡作用。结论:PNP/
- 李锋王楚张萍钱关祥
- 关键词：嘌呤核苷磷酸化酶氟达拉滨自杀基因系统肝癌细胞系BEL7402体外杀伤效应
