王小波
- 作品数：11 被引量：6H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 呼吸道合胞病毒感染滴度测定方法的建立与比较被引量：1
- 2010年
- 目的建立稳定的呼吸道合胞病毒（RSV）感染滴度测定的实时荧光定量PCR（Realtime Quantitative PCR，Q-PCR）检测方法和酶免疫斑点法（Enzyme Immunospots，EIS），并与半数定量方法（50％tissue culture infectious doses，TCID50）进行比较。方法分别采用Q-PCR、EIS和TCID50分析RSV感染的细胞和RSV攻毒后小鼠肺脏标本中的病毒滴度。结果RSV感染细胞的上清中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为：Q—PCR和EIS（pfu）的比约为10：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为10：1；RSV攻毒后小鼠肺脏标本中，三种分析方法检测的病毒滴度值之比为，Q—PCR和EIS（pfu）比约为1000：1，EIS（pfu）和TCID50（TCID50换算成pfu）比约为5：1。结论成功建立了RSV感染滴度测定的Q-PCR和EIS分析方法，通过与TCID50方法的比较分析，我们认为EIS法分析RSV滴度具有成本低和较高的灵敏度，有较好的应用前景。
- 王小波何金生付远辉郑娴娴方璇
- 关键词：呼吸道合胞病毒滴定分析法聚合酶链反应半数抑制浓度
- 呼吸道合胞病毒分泌型融合蛋白的真核表达和纯化
- 2009年
- 目的研究人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial viruse，RSV）分泌型融合蛋白（secreted fusion protein，sV）基因在杆状病毒中的表达及纯化。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物，以PCR方法将F蛋白基因的跨膜区和胞质区核酸序列替换为6×His核酸序列，获得COOH’端带有His标签的重组SF-His蛋白编码基因，利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，构建可表达sF蛋白的重组杆状病毒，用脂质体Cellfeetine reagent转染sf9细胞，实现sF在sf9细胞中的表达，Ni柱亲和层析纯化sF蛋白。结果成功获得了sF-His编码基因，构建的重组杆状病毒可高效表达sF，Ni-柱纯化后sF的浓度为1．084mg／ml，纯度达90％以上。结论杆状病毒系统是制备sF的有效方法，纯化的sF蛋白为RSV新型疫苗及单克隆抗体和诊断试剂等研究奠定了基础。
- 付远辉魏薇何金生郑娴娴王小波唐倩张梅屈建国洪涛
- 关键词：糖蛋白类
- 免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立被引量：1
- 2011年
- 目的利用免疫磁珠分离技术(IMS)建立快速纯化人呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F)的方法。方法表达RSV F的重组腺病毒FGAd/F感染293细胞,收获细胞裂解液,利用兔抗人RSV多抗包被表面活化的免疫磁珠富集和纯化F蛋白,同时建立夹心ELISA,检测纯化的F蛋白浓度以及F蛋白的回收率。结果采用IMS成功纯化分子量为145～170 ku区间的二聚体RSV F蛋白,SDS-PAGE分析结果显示F蛋白得到很好的纯化,纯化所得RSV F蛋白浓度为116 mg/L,回收率为41.1%。结论利用IMS可有效地富集和纯化RSV F蛋白。
- 方璇何金生唐亚宁付远辉王小波郑妍鹏
- 关键词：免疫磁化分离
- 抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白单克隆抗体的制备及体外鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:获得能稳定分泌抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,以期用于RSV感染的早期诊断和被动免疫治疗研究。方法:通过杂交瘤技术制备可特异性识别RSV F的单抗,体外鉴定生物学特性。结果:获得了可分泌抗RSV F蛋白的杂交瘤细胞株F8,体外连续传代培养2个月,能稳定分泌抗体F8,培养上清效价为1∶1000,亲和常数(Ka)为6.8×108L/mol。F8属IgG1型抗体,可特异性识别RSV F1亚单位的AA 205-222。免疫酶法蚀斑减少中和实验证实F8具有体外中和活性及融合抑制活性。结论:获得具有中和活性的抗RSV F蛋白的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及被动免疫治疗等奠定了基础。
- 张梅王小波付远辉方璇王鑫张莹何金生
- 关键词：人呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤技术
- 抗呼吸道合胞病毒融合蛋白单链抗体的筛选及初步鉴定
- 2009年
- 目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法:以RSV F蛋白为靶抗原,通过"吸附-洗涤-洗脱-扩增"过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后,单克隆经ELISA检测,阳性克隆进行核酸序列分析,并将阳性克隆噬菌体感染E.coliHB2151,经IPTG诱导,制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体,并进行Western blot及Dot blot分析。结果:经过筛选,获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆,取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析,显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性,Western blot及Dot blot分析表明为单链抗体。结论:利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。
- 魏薇包福祥何金生付远辉王小波郑娴娴张莹
- 关键词：人呼吸道合胞病毒F蛋白噬菌体抗体库单链抗体
- Aβ寡聚体高亲和性单克隆抗体制备、初步鉴定及性质研究
- β淀粉样蛋白(Amyloidβ-peptide,Aβ)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病机制的核心,而Aβ寡聚体在AD早期病理过程中起重要作用。本研究以体外聚合的Aβ寡聚体为抗原免疫BAL...
- 王鑫张莹包福祥李亦清王小波何金生洪涛
- 关键词：Β淀粉样蛋白阿尔茨海默病AΒ寡聚体单克隆抗体
- 文献传递
- 北京某高校连续7年结核分枝杆菌感染情况分析
- 目的:监测高校新生结核分枝杆菌感染和发病情况,为校园结核病防控提供依据.
方法:采用x2检验和非条件logistic回归,连续7年(2007-2013级)对高校新生结核分枝杆菌感染和相关因素进行分析.
...
- 刘春梅王小波李寒娟胡飞燕李海红
- 关键词：结核病结核分枝杆菌流行病学疾病防控
- 人呼吸道合胞病毒微型复制子的构建被引量：1
- 2009年
- 【目的】构建RSV微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。【方法】构建含RSV病毒前导序列(Leader,genomic promoter,Le)、转录起始信号(gene start,GS)、多克隆酶切位点、转录终止信号(gene end,GE)和尾随序列(Trailer,antigenomic promoter,Tr)的基因片段GSGE,通过引入T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase,T7RNP)启动子、克隆入载体px8δT和插入增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)等多步操作,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP。同时构建可表达大蛋白(large protein,L)的质粒pcDNA3.1/L及表达转录延长/转录终止抑制因子(M2ORF1protein,M2-1)的质粒pcDNA3.1/M2-1。通过脂质体法共转染RSV微型复制子质粒及四种RSV核壳体蛋白质粒至可表达T7RNP的BSRT7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况。【结果】成功构建了px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP及pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,五质粒共转染BSR T7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光的表达。【结论】构建的RSV微型复制子具有转录和复制功能,将有助于进一步开展以RSV反向遗传操作为基础的RSV疫苗研发及药物筛选。
- 唐倩虞结梅何金生张梅魏薇付远辉郑娴娴王小波张莹洪涛
- 关键词：人呼吸道合胞病毒增强型绿色荧光蛋白
- 人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白Aβ1-42寡聚体抗体的筛选与初步鉴定
- 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年人常见神经退行性疾病,己成为严重威胁其生活质量和社会稳定的主要因素之一。AD主要的发病机理是Aβ在脑内聚集形成纤维和斑块(俗称老年斑),造成神经元损伤及认...
- 包福祥何金生张莹王鑫李亦清王小波洪涛
- 关键词：老年性痴呆AΒ蛋白噬菌体抗体库单链抗体
- 文献传递
- 辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率被引量：1
- 2010年
- 构建可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定。荧光显微镜证实HDAd/EGFP可表达,电镜下观察到经CsCl纯化后的腺病毒的典型形态。分光光度计法测定病毒的浓度为4.0×1012颗粒数(Virus particle,vp)/mL。与可表达EGFP的第一代腺病毒载体(First generation adenoviral vector,FGAd)FGAd/EGFP进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,分别用约2000vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况。通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况,可见HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度,显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,是一种更有价值的疫苗载体。
- 郑娴娴何金生付远辉徐少华谢灿石长信张梅王小波洪涛
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白转基因表达
