王晓辉 作品数:44 被引量:70 H指数:4 供职机构: 中国人民解放军 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 石油与天然气工程 文化科学 更多>>
高迁移率族蛋白B1与活化T细胞核因子2之间存在直接相互作用 被引量:1 2011年 目的:探讨高迁移率蛋白1(high mobility protein box1,HMGB1)与活化T细胞核因子2(nuclearfactor of activating T cells2,NFAT2)之间的直接相互作用。方法:首先观察HMGB1与NFAT2在细胞外的相互作用,构建pET28a(+)-HMGB1、pGEX-KG-NFAT2质粒,应用网织红细胞系统进行体外翻译得到带有放射性硫同位素35S的His-HMGB1融合蛋白。应用蛋白纯化技术得到的GST-NFAT2融合蛋白,利用GST-pulldown实验检验二者在体外是否可直接结合;然后观察HMGB1与NFAT2在细胞内能否直接结合,构建HMGB1和NFAT2的真核表达质粒,共同转染人胚胎肾293T细胞系,刺激之后裂解细胞,应用相应的抗体进行免疫共沉淀检测,观察二者在细胞内直接结合的情况。结果:利用GST-pull down实验及免疫共沉淀实验证实,HMGB1全长蛋白与NFAT2全长蛋白在细胞内、外有直接结合的条带,而对照组没有结合条带,说明HMGB1可与NFAT2特异性结合。结论:HMGB1与NFAT2之间存在直接相互作用。 刘辉 姚咏明 宋青 丁丽华 王晓辉 袁斌 叶棋浓 盛志勇关键词:活化T细胞核因子 蛋白纯化 免疫共沉淀 新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定 被引量:1 2006年 目的:利用酵母双杂交技术筛选与ERβ相互作用的蛋白,为进一步研究ERβ的功能奠定基础。方法:从乳腺cDNA文库中钓取ER-βAF1 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-ERβ-AF1,利用酵母双杂交筛选技术,在乳腺cDNA文库中筛选与ERβ-AF1相互作用的蛋白。将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-ERβ-AF1的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测ERβ-AF1与候选蛋白之间是否存在相互作用。然后将ERβ-AF1和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28 a上,并纯化GST-ERβ-AF1和H is-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证ERβ-AF1和候选蛋白的体外相互作用。结果:所获取的候选蛋白为CTGF,是CCN多肽家族成员。交配实验表明,CTGF与ERβ-AF1特异相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用。GST沉淀实验进一步验证,CTGF与ERβ、ERα均存在相互作用,但与CTGF同源性较高的NOV蛋白却不与ERβ、ERα结合。结论:CTGF和ERβ存在特异的相互作用。 韩聚强 焦园园 丁丽华 袁斌 王晓辉 张浩 李杰之 吕秋军 叶棋浓关键词:相互作用 FHL2与IGFBP-7存在直接相互作用 2005年 目的:利用酵母双杂交技术筛选FHL2的相互作用蛋白,为进一步研究FHL2的功能奠定基础。方法:从卵巢文库中钓取FHL2cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-FHL2,利用酵母双杂交筛选技术,在卵巢文库中筛选与FHL2相互作用的蛋白。将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-FHL2的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测FHL2与候选蛋白之间是否存在相互作用。将FHL2和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28a上,并纯化GST-FHL2和His-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证FHL2和候选蛋白的体外相互作用。结果:所获取的候选蛋白为IGFBP-7,是胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)家族中的一员。交配实验表明,IGFBP-7与FHL2能特异性地相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用。GST沉淀实验进一步验证,IGFBP-7能与FHL2结合,而不与GST结合。结论:FHL2和IGFBP-7在体内及体外均可发生特异性的相互作用。 丁丽华 焦园园 刘雨飞 方言 周蕾 王晓辉 黄翠芬 叶棋浓关键词:FHL2 相互作用 酵母双杂交 不同低氧浓度对人脐带间充质干细胞向神经细胞分化的影响 被引量:5 2019年 目的探讨不同低氧浓度对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)诱导分化成神经细胞的促进作用。方法hUCMSCs分为对照组(常氧浓度)和实验组(5%氧浓度组、10%氧浓度组)。MTT法检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡;WestonBlot检测细胞神经生长因子(NGF)、神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果hUCMSCs细胞在缺氧条件下细胞增殖受到抑制,培养24h内实验组OD值显著低于对照组(P<0.05),随着培养时间的延长,实验组细胞增殖加快,到培养至96h时实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在培养24、48h时,实验组hUCMSCs细胞LDH活性显著高于对照组(P<0.05);培养至72h后5%氧浓度组LDH活性显著高于对照组(P<0.05),10%氧浓度组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);培养至96h后各组hUCMSCs细胞LDH的活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。5%氧浓度组hUCMSCs细胞抗凋亡作用强于10%氧浓度组(P<0.05)。缺氧培养的hUCMSCs细胞更早出现神经元样形态学变化,且细胞中NGF、Nestin、NSE的表达水平高于对照组(P<0.05)。结论5%氧浓度缺氧培养的hUCMSCs细胞具有抗细胞凋亡作用,同时对成神经诱导分化具有促进作用。 罗芸 马俊 钱前 张富婷 王晓辉关键词:低氧 人脐带间充质干细胞 细胞分化 神经细胞 pax2启动子的克隆及其在人胚胎肾293T细胞中的转录活性 被引量:2 2007年 目的:克隆paired box2(pax2)基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测其活性。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出pax2启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,确定所扩增的DNA序列。将重组的报告基因瞬时转染人胚胎肾293T细胞,检测pax2启动子活性。结果:测序结果显示扩增的pax2启动子序列正确;活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,雌激素受体α(ERα)能以剂量依赖的方式升高pax2报告基因的转录。结论:克隆了pax2启动子,为ERα共调节子的功能研究提供了重要基础。 姜艳超 丁丽华 杨群辉 胡建民 曾敏 杨智洪 王晓辉 李熔 叶棋浓关键词:荧光素酶报告基因 转录活性 洁净压缩空气输送管道的净化与检测 被引量:1 2022年 洁净空气对光学敏感元器件具有重要的保护作用,针对现有洁净空气在管道输送过程中存在污染的问题,本文介绍了洁净压缩空气输送管道的净化及检测方法,为进一步规范洁净气体输送管道的净化和检测提供重要支撑。 董春宏 郭云峰 蔡政 王晓辉ER对雌激素共调节因子NFAT3的转录调节 <正>目的:NFAT(Nuclear factor of activated T-cell)家族在人体生理和病理过程中发挥着重要的作用,但是对NFAT3的转录调节因子却知之甚少。通过本室前期的实验,我 秦玺 王晓辉 杨智洪 丁丽华 徐小洁 程龙 牛畅 孙慧伟 张浩 叶棋浓关键词:ER 相互作用 磷酸化 转录活性 半乳糖凝集素-1的融合克隆及纯化 被引量:4 2008年 目的:表达和纯化半乳糖凝集素-1融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增半乳糖凝集素-1编码序列,将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,将重组质粒转化大肠杆菌DH5α后,用谷胱甘肽-Sepharose 4B纯化融合蛋白,并用Western印迹检测融合蛋白的表达。结果:构建得到半乳糖凝集素-1的融合蛋白表达载体;Western印迹检测表明,GST-半乳糖凝集素-1融合蛋白成功表达,并纯化得到融合蛋白。结论:克隆和表达了半乳糖凝集素-1基因,并得到纯化的融合蛋白。 王晓辉 张浩 杨智洪 叶棋浓关键词:克隆 融合蛋白 雌激素信号通路调节蛋白的发现及其在肿瘤中的作用 叶棋浓 程龙 徐小洁 丁丽华 蔺静 袁斌 牛畅 王晓辉 严景华 张浩 秦玺 李杰萍 杨智洪 蒋凯 熊志红 肿瘤是威胁人类健康的重大疾病,雌激素信号通路的失调是导致乳腺癌、肝癌、肺癌等诸多恶性肿瘤发生发展的重要原因之一。雌激素通过结合雌激素受体(ER)发挥生理和病理功能。因此,阐明雌激素信号通路的调节机制,发现新的雌激素信号通...关键词:关键词:调节蛋白 肿瘤治疗 肿瘤坏死因子受体相关因子家族成员间相互作用的初步研究 被引量:1 2011年 目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAFs)各成员间的相互作用及各成员间的关系。方法利用PCR技术扩增出TRAFs;构建到pDBLeu、pPC86载体上,分别形成诱饵、猎物质粒;转化,扩增酵母菌;将诱饵、猎物菌液结合酵母双杂交阵列组合(Mating)技术筛选相互作用。最后用免疫共沉淀技术进行验证。结果成功构建TRAFs的酵母双杂交载体,酵母双杂交Mating技术筛选出11对相互作用,免疫共沉淀技术验证出,TRAF1和TRAF2、TRAF6有相互作用。结论 TRAFs各成员间存在着相互联系;TRAF1通过和TRAF6的相互作用可能直接影响TRAF6介导的通路。 周扬帆 王晓辉 唐刘君 李长燕 王敏 杨晓扬 杨晓明 汪思应关键词:相互作用