王玉刚
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗CD20嵌合抗体的构建与表达被引量：7
- 2006年
- 目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度。对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性。将mAb1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H。PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性。脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Westernblot检测目的蛋白的大小。结果钓取到mAb1-28基因。mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应。成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致。结论为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据。
- 王玉刚黄英谷欣于鸣冯健男孙瑛勋黎燕沈倍奋
- 关键词：杂交瘤质谱分析嵌合抗体
- 新型抗CD20嵌合抗体TGLA体内、外活性的研究
- ＜正＞目的:针对B细胞非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）的表面抗原CD20分子,已有三种抗体成功应用于临床,分别是美罗华（Rituximab）、Zevalin（放射性核素90Y与美罗华...
- 耿树生孙瑛勋谷欣王玉刚冯健男黄英沈倍奋黎燕
- 关键词：CD20抗CD20抗体B淋巴细胞瘤肿瘤模型
- 文献传递
- CD20抗原及治疗性抗CD20抗体被引量：11
- 2005年
- CD20是人类B淋巴细胞表面特有的标识。它高表达于所有正常B细胞和多数恶性B细胞表面,不会发生明显的内化和脱落,是治疗非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma,NHL)理想的靶抗原。其胞外区由43个氨基酸残基组成,但组成的抗原表位却异常多样。目前,已经有多种针对CD20抗原的抗体被FDA批准上市,用于B细胞非霍奇金淋巴瘤的治疗,都显示出良好的效果。
- 王玉刚沈倍奋
- 关键词：CD20抗原表位抗CD20单克隆抗体
- DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEM(-T Easy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30 a中,在E.coliBL21(DE3)实现蛋白表达。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体(mAb)结合能力。结果:克隆到人DR5基因的胞外段基因,测序结果和报道的一致;构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E.coliBL21(DE3)中大量表达;SDS-PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量(Mr)一致;Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应,竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制。结论:成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区,为后续研究打下了基础。
- 陈居杲王玉刚赵昆朋谷欣黎燕马远方沈倍奋
- 关键词：RT-PCR原核表达
- TRAIL胞外段功能的初步分析及其多克隆抗体的制备
- ＜正＞目的:克隆TRAIL基因cDNA全长,构建TRAIL胞外段功能区的原核表达载体,实现可溶性表达,初步分析其功能,制备相应的多克隆抗体。方法:Ficoll法分离得到人外周血单个核细胞。使用Trizol提取外周血单个核...
- 王玉刚赵昆鹏陈居杲郭雷鸣冯健男黎燕孙瑛勋沈倍奋
- 关键词：TRAIL多克隆抗体细胞凋亡
- 文献传递
- 用RLM-RACE法克隆抗CD20单克隆抗体可变区基因及其信号肽基因被引量：5
- 2005年
- 目的:寻找一种可同时钓取抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因的方法。方法:使用Trizol提取杂交瘤细胞1-28的总RNA,分别采用传统的快速扩增5′cDNA末端(traditionalrapidamplificationof5′cDNAend,T5′RACE)和RNA连接酶介导的快速扩增5′cDNA末端(RNAligasemediatedrapidamplificationof5′cDNAend,RLMRACE)的方法钓取目的基因。将其克隆到pGEMTEasy载体上,测序后,与Kabat数据库和GenBank中相应的序列进行比对。结果:采用RLMRACE法可同时钓取到抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因,而用T5′RACE法仅能获得VL基因及其信号肽基因。结论:RLMRACE法是钓取抗体V区基因和信号肽基因的好方法。
- 王玉刚冯健男沈倍奋
- 关键词：RACE单克隆抗体
- 人源TRAIL胞外段基因的克隆、表达与功能的初步检测被引量：1
- 2007年
- 目的 获得人源TRAIL胞外段结构域在大肠杆菌中可溶性表达，并初步鉴定其功能。方法 RT-PCR法从人外周血单个核细胞中扩增TRAIL胞外段基因，克隆入pGEM-T-Easy载体，DNA序列测定鉴定正确性。为了便于纯化目的蛋白，将其克隆入原核表达载体pET-30a，并在其氨基端加上组氨酸标签。采用E．coliBL21（DE3）表达，Ni亲和柱分离纯化目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot鉴定原核表达产物。MTT法、PI染色法及瑞氏．姬姆萨染色法观察TRAILHis蛋白的生物学活性。结果 所表达目的蛋白相对分子质量（Mr）与预期蛋白Mc相一致，该蛋白分别可以与抗TRAIL多克隆抗体及抗组氨酸标签抗体反应，并可抑制人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的增殖和诱导Jurkat细胞凋亡。结论 获得了具有生物学活性的TRAIL蛋白，为对其生物学功能及肿瘤治疗的进一步研究奠定了基础。
- 赵昆朋王玉刚陈居杲黎燕马远方沈倍奋
- 关键词：TRAIL原核表达免疫印迹
- 基于计算机辅助分子设计的抗CD20单克隆抗体的改造
- 鼠源单克隆抗体在临床应用中有以下缺点：诱发人体产生人抗小鼠抗体(humananti-mounseantibody,HAMA)反应，在人体内半寿期短，不能够有效地激活人体的生物效应功能，如补体依赖的细胞毒作用(comple...
- 王玉刚
- 关键词：CD20嵌合抗体单克隆抗体免疫学肿瘤细胞
- 文献传递
