王金宏
- 作品数：50 被引量：64H指数：4
- 供职机构：北京协和医学院血液病医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 抗KDR单克隆抗体的重链和轻链可变区基因及其应用
- 本发明公开了抗KDR单克隆抗体Ycom1D3重链和轻链可变区基因，由所述基因编码的多肽，含有所述基因的载体及所述的基因和多肽在制备用于血管新生疾病(尤其是肿瘤血管新生)的诊断和治疗药物中的应用。本发明制备的抗KDR Sc...
- 杨纯正李容熊冬生邵晓枫许元富彭晖杨铭王金宏纪庆范冬梅王彩云齐静
- 文献传递
- 阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究被引量：4
- 2008年
- 目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制。方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-κB以及细胞因子IFN-γ的表达变化。结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-κB表达明显上调;并且IFN-γmRNA在T细胞活化72h可检测到。结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-κB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用。
- 范冬梅杨铭贾海荣高瀛岱王金宏纪庆熊冬生杨纯正
- 关键词：阿糖胞苷CD86T细胞细胞因子
- 重组融合蛋白抗CD20Fab-LDM的构建、表达及体外活性研究被引量：4
- 2009年
- 目的构建和表达抗CD20Fab-LDP(力达霉素辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM(力达霉素),并测定该融合蛋白的生物学活性。方法采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot鉴定纯化产物;采用FACS方法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用冷乙二醇法制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM;采用MTT法鉴定抗CD20Fab-LDM对CD20+Raji细胞特异性的细胞毒作用。结果DNA序列测定结果表明抗CD20Fab-LDP融合蛋白已构建成功,可溶性表达产物的产量可达4mg.L-1以上,具有与Raji细胞(CD20+)结合的活性,与抗CD20Fab的亲合常数相当,抗CD20Fab-LDM体外能特异性杀伤Raji细胞,IC50值为0.9×10-10mol.L-1。结论成功地构建了抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并获得可溶性高效表达,表达产物具有与相应靶抗原结合的活性,并成功制备了抗CD20Fab-LDM强化融合蛋白,体外能特异性杀伤CD20+的Raji细胞。
- 程昕杨铭范冬梅许元富周圆高瀛岱王金宏周园李巍熊冬生
- 关键词：CD20力达霉素基因工程抗体非霍奇金淋巴瘤生物毒素
- 靶向4-1BBL和CD3双信号的协同抗肿瘤作用机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody介导的靶向杀伤作用及其机制。方法:通过表达纯化人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20 diabody,利用台盼蓝计数观察联合应用人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20 diabody对淋巴细胞增殖的影响;采用ELISA检测白介素-2(IL-2)水平。RT-PCR检测穿孔素和颗粒酶mRNA的表达。Calcein检测其联合应用抗CD3/抗CD20双功能抗体及PBL对靶细胞Raji细胞的杀伤作用。结果:人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody对靶细胞Raji细胞的杀伤作用,其机制可能是促进淋巴细胞增殖,减少细胞死亡,促进IL-2分泌及上调穿孔素和颗粒酶mRNA表达。结论:人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白与抗CD3/抗CD20diabody联合应用,分别靶向4-1BBL和CD3双信号发挥协同抗肿瘤作用,为肿瘤免疫治疗提供了新的思路。
- 姜文国张树平刘荣李崴张研君邵晓枫王金宏
- 关键词：CD20
- 二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体制备及体内外活性研究
- 刘娟妮高瀛岱王金宏邵晓枫范冬梅纪庆熊冬生杨纯正周圆
- ^(125)I标记抗CD20HI47F(ab’)_2性质研究被引量：3
- 2004年
- 目的 :对12 5I标记的抗CD2 0HI 4 7F(ab’) 2 性质进行研究。方法 :采用NBS法进行碘标 ,并测定标记物的标记率、免疫活性分数、放化纯度、亲和常数和体外稳定性。结果 :测定标记率为 87 4 % ,免疫活性分数为 0 4 0 8,放化纯度 >95 % ,亲和常数为 3 2× 10 9M-1,体外 4℃存放 5天 ,放化纯度降低至 0 2 1。结论 :标记物具有较高的放化纯度、免疫活性和稳定性 ,为体内治疗打下良好的基础。
- 许元生熊东生范冬梅王金宏杨铭纪庆刘汉芝杨纯正
- 关键词：^125I单克隆抗体
- P2X家族受体在急性T淋巴细胞白血病小鼠中表达的特点被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨不同P2X家族受体在小鼠急性T淋巴细胞白血病发展中的表达变化规律。方法:制备Notch1过表达小鼠GFP+T细胞急性淋巴细胞白血病移植模型,流式术分选CD45.2+GFP+白血病细胞,实时定量PCR检测P2X受体家族的表达变化,荧光分光光度计检测P2X7受体介导的钙离子浓度的变化。结果:对照组和白血病组小鼠骨髓细胞表达除P2X5外的其他6种P2X家族受体。Notch1过表达导致的小鼠白血病发展过程中,P2X7的表达水平逐渐升高,P2X1和P2X3的表达水平逐渐降低,而P2X2、P2X4和P2X6表达水平没有显著变化;分选后的CD45.2+GFP+白血病细胞中,P2X家族受体的表达呈现相同的规律。对照组和白血病组小鼠骨髓细胞中P2X7受体在激动剂苯甲酰-苯甲酸ATP(BzATP)的刺激下都能介导细胞内钙离子浓度升高,但白血病组小鼠骨髓细胞内钙离子处于持续高浓度状态,而对照组小鼠细胞内钙离子浓度短暂升高后逐渐下降;P2X7介导的这种钙离子反应可被其特异的拮抗剂KN62所阻断。结论:P2X受体家族中P2X1、P2X3和P2X7的表达变化与小鼠急性T淋巴细胞白血病的发展相关,提示其介导的细胞间通讯可能在白血病发展中发挥重要作用。
- 种靖慧田晨师迎旭王金宏林永敏许静吴克复郑国光
- 关键词：P2X7受体NOTCH1急性T淋巴细胞白血病
- 免疫亲和层析法纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体被引量：1
- 2008年
- 目的:制备可以纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体的免疫亲和层析柱。方法:纯化的抗抗CD3ScFv单克隆抗体与预活化的Sepharose4B偶联制成免疫亲和层析柱,采用自制的免疫亲和层析柱纯化由摇瓶发酵获得的抗Pgp/抗CD3双功能抗体,采用间接免疫荧光法测定抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体能与Jurkat细胞及K562/A02细胞特异性结合活性。结果:成功地制备了可以纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体的免疫亲和层析柱,采用此柱纯化的抗体与Jurkat细胞及K562/A02细胞特异性结合的活性与带有E-tag纯化标志的抗体基本一致。结论:此介质可以替代价格高昂的E-tag亲和层析介质在纯化Pgp/抗CD3双特异双功能抗体中的应用,同时还可以避免由于E-tag纯化标志而带来的免疫原性问题,此项研究工作为抗Pgp/抗CD3双功能抗体将来在临床应用奠定了基础。
- 王金宏刘娟妮高瀛岱邵晓枫熊冬生杨纯正
- 二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体稳定性研究被引量：1
- 2010年
- 目的:研究二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody)在体外和体内的稳定性。方法:将抗CD3/抗Pgp Diabody置于37℃含0.2%人血清白蛋白(human serumalbumin,HSB)的PBS中,孵育不同时间后,用流式细胞术(FACS)检测其结合活性。建立K562/A02裸鼠移植瘤模型,用Cy5荧光标记试剂盒标记抗CD3/抗Pgp Diabody,通过尾静脉注射给荷瘤裸鼠,在小动物活体成像系统上动态观察荧光信号。结果:二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp Diabody(Ds-diabdoy)体外孵育72小时后活性无明显下降,而改造前Diabody孵育1小时后活性即开始下降,24小时后活性完全丧失。Ds-diabdoy注射后72小时仍能在肿瘤部位检测到荧光信号,而改造前Diabody在注射后24小时肿瘤部位荧光信号消失。结论:Ds-diabdoy较改造前Diabody稳定性大大提高。
- 杨铭程昕杜志荣王彦范冬梅刘娟妮王金宏纪庆高瀛岱
- 关键词：药物稳定性DIABODY二硫键多药耐药
- 肿瘤耐药标志物基因及其作为抗耐药肿瘤药物设计的靶点的用途
- 本发明涉及一种新的肿瘤耐药标志物基因及其作为抗耐药肿瘤药物设计和筛选的靶点的应用，该基因已知为神经丝蛋白－H基因(NF－H基因)。本发明还设计所述基因在临床诊断肿瘤耐药性中的应用。
- 杨纯正赵春华谭耀红彭晖齐静王金宏邵晓枫范冬梅
- 文献传递
