许瑞
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-21靶向TLR-4/MyD88信号通路介导冷空气诱导的气道免疫失调被引量：1
- 2016年
- 目的探讨mi R-21在冷空气诱导的气道上皮免疫功能失调中的作用及其可能的潜在分子机制。方法气-液双相法培养人永生化气道上皮细胞BEAS-2B及16HBE,通过逆转录荧光定量PCR法检测不同时间梯度冷暴露的细胞中内源性mi R-21,mi R-164,mi R-155的水平改变。通过构建TLR-4 3’UTR端及其结合位点突变质粒,并与mi R-21模拟物、mi R-21抑制物以及对照共转染BEAS-2B及16HBE细胞,进行双荧光素酶标记试验证实TLR-4为mi R-21的靶蛋白。利用lipofectamine2000分别将mi R-21模拟物、mi R-21模拟对照物、mi R-21抑制物、mi R-21抑制对照物转染给BEAS-2B及16HBE细胞,并给予常温(37℃)培养或冷暴露(30℃),以Western Blot法检测各实验组TLR-4/My D88蛋白水平。结果低温诱导气道上皮细胞内mi R-21水平提高(P<0.05),而mi R-164及mi R-155无显著变化。低温提高气道上皮细胞内mi R-21水平呈时间依赖性。双荧光素酶报告实验证实,TLR-4为mi R-21的直接靶蛋白。Western Blotting法检测结果显示转染mi R-21模拟物的BEAS-2B及16HBE细胞在常温培养下TLR-4/My D88蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),低温刺激可降低气道上皮细胞内TLR-4/My D88的蛋白水平(P<0.05);而使用mi R-21抑制物处理,可部分抑制低温诱导的TLR-4/My D88的蛋白水平下调(P<0.05)。结论低温刺激可能通过提高气道上皮细胞内mi R-21水平,降低TLR-4/My D88蛋白水平,影响气道上皮免疫功能。
- 许瑞黄华萍韩忠李敏超周向东
- 关键词：冷空气气道免疫失调
- 丙烯醛调控糖皮质激素受体类小泛素化水平对气道黏液高分泌的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨丙烯醛调控的糖皮质激素受体（GRs）类小泛素（SUMO）化水平对气道黏液高分泌的影响。方法构建重组真核表达载体质粒pcDNA3．1．EGFP．flag．SUM01，酶切电泳鉴定。常规培养16HBE细胞，随机分为9组：A：空白对照组；B：丙烯醛刺激组；C：地塞米松组；D：丙烯醛刺激＋地塞米松组；E：SUMO相关修饰物1（SUM01）转染组；F：空质粒转染组；G：SUM01转染＋丙烯醛刺激组；H：SUM01转染＋丙烯醛刺激＋地塞米松组；I：空质粒转染＋丙烯醛刺激＋地塞米松组。每个实验组设5复孔，重复4次实验用于统计学分析。荧光显微镜下观察转染成功率，通过免疫共沉淀以及Western印迹法分析各实验组GRsSUMO化水平的变化，反转录-PCR法比较各实验组中黏蛋白（MUC）5AC转录水平的差异。用酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液中MUC5AC的分泌量。结果B组GRsSUMO化水平（0．079±0．023）低于A组（0．446±0．068）（t=-23．13，P=0．000）；D组GRsSUMO化水平（0．574±0．018）低于c组（0．843±0．028）（t=-36．34，P=0．000）。H组的MUC5ACmRNA转录水平（0．330±0．063）低于D组（0．617±0．190）（q=-7．80，P=0．000）。细胞培养上清液中MUC5AC分泌水平显示，G组与B组差异无统计学意义，而H组[（0．416±0．092）μg／L）]显著低于D组[（0．663±0．104）μg／L]和G组[（0．740±0．343）μg／L]（q=-7．31，-9．59；P=0．001，0．000）。结论丙烯醛可下调GRsSUMO化水平，并降低地塞米松对MUC5AC转录的抑制作用。
- 许瑞李琪周向东尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫
- 关键词：丙烯醛黏蛋白类
