谭诗
- 作品数：13 被引量：9H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过表达突变的NPM1基因对THP-1白血病细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 mA蛋白的细胞株(THP-1 mA),同时设立空载体转染组(THP-1 C1)和未处理组(THP-1)为对照。MTT实验观察细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期和凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白(BAX和BCL-2)mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比较,实验组THP-1 mA细胞体外增殖能力明显增强(P<0.05),S期细胞比例明显增高(P<0.05),G1期细胞比例显著减低(P<0.05);而3组细胞凋亡率无显著差异,BAX,BCL-2的mRNA和蛋白表达以及BAX/BCL-2比值亦未见明显改变。结论 NPM1突变基因能够促进白血病细胞的体外增殖能力,而对白血病细胞凋亡无显著影响。
- 覃凤娴邵会媛陈先春谭诗张慧娟肖玲张伶
- 关键词：白血病凋亡
- NPM1突变基因调控K562白血病细胞侵袭表型的相关机制
- 2011年
- 目的探讨CXCR4、Angs在NPM1突变参与调控的白血病细胞浸润转移中的作用，以期进一步明确NPM1突变在白血病浸润转移中的调控机制。方法通过基因转染构建稳定表达NPM1突变蛋白的K562白血病细胞株（K562-mA）。qRT—PCR检测各组细胞CXCR4、Ang-1／2的mRNA表达水平；Western免疫印迹和流式细胞仪分别检测细胞CXCR4总蛋白和膜蛋白的表达。结果建立了稳定表达NPM突变基因的K562-mA细胞株。与未处理组和空载体转染组相比，K562-mA细胞CXCR4的mRNA和蛋白表达水平显著增高；Ang-1mRNA表达水平明显降低、Ang-2mRNA表达水平明显增高。结论CXCR4、Ang-1／2可能在MPM1突变调控白血病细胞的浸润转移中发挥重要作用。
- 陈先春覃凤娴谭诗张慧娟邵会媛张伶
- 关键词：白血病趋化因子受体4血管生成素
- NPM1突变通过NF-κB调控白血病细胞化疗药物敏感性
- 覃凤娴邵会媛陈先春谭诗张慧娟张伶
- 干细胞标志Musashi2基因RNAi腺病毒载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的:构建人干细胞标志分子Musashi2(Msi2)RNAi腺病毒载体,并检测其在膀胱癌细胞株BIU87中的干扰效果及对细胞增殖的影响。方法:将2对干扰片段msi2-1和msi2-2及阴性对照scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,经酶切鉴定及测序后,将测序正确的克隆经PmeⅠ酶切后与pAdeasy-1骨架质粒在BJ5183菌内重组,重组质粒经PacⅠ酶切后转染入293A细胞,进行腺病毒的包装和扩增。Real-time PCR和Western blotting法分别检测腺病毒感染BIU87细胞后Msi2的mRNA和蛋白表达水平,MTT实验检测干扰Msi2对BIU87细胞增殖的影响。结果:成功将干扰片段和scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,构建出pAdeasy-1-pSES-HUS-msi2和pAdeasy-1-pSES-HUS-scramble重组腺病毒载体并包装扩增出腺病毒。与scramble组比较,msi2-1和msi2-2组的Msi2mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P<0.05)。干扰Msi2后,BIU87细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论:成功构建Msi2RNAi腺病毒载体,其可有效抑制膀胱癌细胞株BIU87内Msi2的表达并抑制细胞增殖。
- 张慧娟谭诗陈莎娜王娟覃凤娴陈先春张伶
- 关键词：RNA干扰腺病毒载体
- 人干细胞标志Musashi2在急性髓系白血病细胞分化中的表达变化被引量：1
- 2013年
- 目的探讨人干细胞标志Musashi2(Msi2)在佛波酯(phorbol myristoyl acetate,PMA)诱导急性单核白血病细胞株THP-1分化过程中的表达变化。方法 PMA作用THP-1细胞0、6、12、24 h后,倒置显微镜下观察THP-1细胞形态学改变,计算分化细胞百分数;流式细胞仪检测THP-1细胞表面分化抗原CD11b的表达;定量PCR和Western blot检测Msi2的基因及蛋白表达水平;定量PCR检测Msi2下游信号分子Numb的mRNA水平;定量PCR和Western blot检测Numb下游分子Notch1的mRNA和蛋白表达水平。结果 PMA处理24 h后可诱导THP-1细胞出现巨噬细胞样分化表型,实验组分化细胞的百分比显著高于未处理组(P<0.05)。同时24 h组CD11b表达量(59.30±8.70)较未处理组(0.32±0.08)显著增加(P<0.05)。实验组白血病细胞经PMA处理24 h后,Msi2的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.33±0.08)和(0.50±0.01),显著低于未处理组(P<0.05);PMA处理12 h后Numb的mRNA相对表达量为(2.92±0.33),较未处理组明显升高(P<0.05);而PMA处理24 h后Notch1的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.31±0.03)和(0.23±0.01),较未处理组显著下降(P<0.05)。结论干细胞标志Msi2表达随THP-1细胞分化而下降,Msi2-Numb-Notch1通路可能参与白血病细胞的分化调控。
- 张慧娟谭诗陈莎娜王娟覃凤娴陈先春张伶
- 关键词：分化佛波酯THP-1细胞
- MicroRNA-10b在NPM1突变急性髓系白血病细胞分化阻滞中的作用探讨
- 第一部分探讨NPM1基因突变对急性白血病细胞分化的影响
核仁磷酸蛋白基因（nucleophosmin，NPM1）突变在急性髓系白血病的发生发展中发挥至关重要的调控作用，而与白血病分化阻滞的关系尚未阐明。为探讨NPM...
- 谭诗
- 关键词：细胞系急性白血病
- NPM1突变基因通过MMPs参与调控白血病细胞体外侵袭被引量：1
- 2011年
- 核仁磷蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变是目前急性髓系白血病(AML)中突变率最高的基因改变,在白血病的发生发展过程中发挥重要的调控作用。为探讨NPM1突变参与调控白血病髓外浸润的分子机制,将表达质粒pEGFPC1-NPM1-mA转染THP-1细胞系,筛选稳定表达NPM1突变蛋白的白血病细胞株(THP-1-mA)。利用RT-PCR及Western blot分析了THP-1-mA细胞与亲代细胞间MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的差异。结果显示,具有体外高侵袭能力的THP-1-mA组细胞MMP-2的mRNA水平和蛋白水平均明显高于两对照组,而MMP-9 mRNA表达水平虽有所增高,但蛋白表达水平却明显降低。同时,与空载体转染组和未处理组细胞相比,THP-1-mA组细胞TIMP-2的mRNA水平和蛋白水平表达显著降低,差异具有统计学意义;TIMP-1表达水平无明显改变。提示MMP-2及其抑制剂TIMP-2在NPM1突变参与调控的白血病细胞髓外浸润中可能发挥重要作用。
- 邵会媛苗宗玉覃凤娴陈先春谭诗张慧娟张伶
- 关键词：白血病MMPSTIMP
- MicroRNA-10b通过调控锌指蛋白KLF4阻滞白血病细胞分化
- 2013年
- 探讨microRNA-10b(miR-10b)通过调节锌指蛋白Krüppel-like factor 4(KLF4)的表达对急性白血病细胞分化的影响。Real-time PCR及Western blot分别检测不同分化程度的白血病细胞系中miR-10b与KLF4的表达;1,25-二羟基维生素D3(1,25D3)诱导人白血病细胞系HL60向单核系分化,检测此过程中miR-10b及KLF4的表达变化;利用体外合成的寡核苷酸(miR-10b mimics)转染HL60细胞,瑞氏–吉姆萨染色观察1,25D3诱导后细胞分化形态学的改变;流式细胞术检测单核细胞表面标志CD14的表达。结果显示,miR-10b在分化早期的KG-1a细胞中表达最高,在分化晚期的U937、THP-1细胞中表达最低(P<0.01),而KLF4的表达与之相反;1,25D3诱导HL60向单核系分化过程中,miR-10b表达呈时间依赖性降低,KLF4表达则逐渐增高;HL60细胞中过表达miR-10b后可抑制1,25D3诱导的细胞分化形态特征的改变及CD14的表达(P<0.05)。提示miR-10b通过负调控KLF4的表达阻滞白血病细胞HL60单核系的分化。
- 谭诗张慧娟王娟陈莎娜全静鲜敬荣张伶
- 关键词：MIR-10BKLF4急性髓系白血病细胞分化
- 核仁磷酸蛋白基因突变对K562白血病细胞分化的影响
- 2012年
- 核仁磷酸蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变在急性髓系白血病的发生发展中发挥着重要作用,而与白血病分化阻滞的关系尚未完全阐明。为探讨NPM1基因突变对白血病细胞体外分化的影响,将携带NPM1 A型突变(NPM1-mA)的表达质粒载体pEGFPC1-NPM1-mA转染白血病K562细胞系,构建稳定表达NPM1-mA蛋白的细胞株(K562 mA),同时设立野生型NPM1转染组(K562 wt)、空载体转染组(K562 C1)和未处理组(K562)为对照。利用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)诱导各组细胞分化,瑞氏–吉姆萨染色观察细胞分化的形态改变,计算诱导分化率;相差显微镜计数贴壁细胞数量;流式细胞术分析细胞表面分化抗原CD41的表达。结果显示,PMA作用72 h后,与对照组相比,K562 mA组细胞的诱导分化率及贴壁细胞数明显降低(P<0.05);同时,CD41的表达受到显著抑制(P<0.01)。提示NPM1基因突变能够阻滞白血病细胞系K562的体外分化。
- 谭诗张慧娟王娟陈莎娜覃凤娴陈先春张伶
- 关键词：白血病细胞分化K562细胞系
- NPM1基因突变对急性白血病细胞系体外侵袭能力的影响被引量：3
- 2010年
- 核仁磷酸蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变是目前急性髓系白血病发生突变率最高的基因改变,与白血病的发生发展密切相关。为探讨NPM1突变对白血病细胞体外侵袭能力的影响,将载体pEGFPC1-NPM1-mA转染THP-1白血病细胞系,筛选稳定表达NPM A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病细胞株(THP-1-mA)。通过transwell迁移实验、Matrigel侵袭实验以及细胞粘附实验来观察THP-1-mA细胞体外浸润转移能力的改变。结果发现,THP-1-mA细胞的体外迁移能力和侵袭能力明显高于亲代THP-1细胞;此外,THP-1-mA细胞对纤维连接蛋白的粘附能力也显著高于THP-1细胞。因此,我们的研究结果提示,NPMI突变可增强白血病细胞的体外侵袭能力,这有利于进一步明确NPM1突变基因在白血病细胞恶性转化中的调控作用。
- 邵会媛苗宗玉覃凤娴陈先春谭诗高玉洁张伶
- 关键词：白血病基因突变细胞侵袭
