邓文生
- 作品数：7 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 核酶介导的抗猕猴免疫缺陷病毒和马铃薯纺锤形块茎类病毒的研究 玉米粗缩病毒基因组第七组份基因克隆、表达和功能分析
- 邓文生
- 关键词：核酶玉米植物病毒
- 专一切割猴免疫缺陷病毒3′端LTR 10拷贝自切割核酶的制备及体外催化活性动力学分析被引量：1
- 2000年
- 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 .人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在 p Bluescript SK的 Xho - Sal 位点 .通过连续 4次克隆获得 1 0拷贝核酶基因的载体 .体外转录单体核酶和 1 0体核酶后 ,37℃温育 1 5min,至少 85%的 1 0体核酶发生自切割 ,并释放出单体核酶 .反式切割研究表明 ,1 0体核酶表现出极高的催化活性 .尽管 1 0体核酶的浓度不到单体核酶的十分之一 ,在反应初始 2 5min内 ,1 0体核酶的催化产物平均超过单体核酶1 3.31 % .1 0体核酶一级反应速度常数是单体核酶的 1 .86倍 .从这些数据可以推断 ,1
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- 锤头型核酶作用机理的研究进展被引量：4
- 1999年
- 概述了锤头型核酶的二级结构特征， 动力学反应的特点以及核酶切割反应的催化机制，
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- 玉米粗缩病毒基因组第七组份的cDNA克隆及序列分析被引量：9
- 2000年
- 从采自中国河北滦城感病的玉米材料中提取玉米粗缩病毒 (MRDV)的双链RNA。根据已知MRDV的部分序列设计引物 ,反转录、PCR扩增 ,克隆并测序分析了MRDV的第七片段 (S7)cDNA序列。结果表明 ,S7cDNA序列全长为 1 936bp ,与国外所测的MRDVS7的序列长度相等 ,而且S7包含的两个阅读框 (ORF1和ORF2 )位置无变化。它们的核苷酸和最大开放阅读框 (ORF1 )同源性分别为 87 7%和 91 6% ,然而 ,MRDVS7的片段与水稻黑条矮缩病毒 (RBSDV)S8片段的核苷酸和最大开放阅读框 (ORF1 )有更高的同源性 ,分别为 95 5%和93 5%。
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- 关键词：玉米粗缩病毒S7序列同源性
- 快速制备RNA小分子质量标记的新方法
- 2000年
- 在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列 ,使之成为自切割的核酶 .将自切割核酶基因合成 ,扩增并克隆在质粒pBluescriptSK上 ,经连续 4次克隆获得含 10个拷贝的自切割核酶基因的载体 .5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示 :体外转录过程中多体酶发生了自切割 ,核酶转录物切割成从 70nt到 70 6nt的RNA等梯度带 ,因此 。
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- 自切割核酶介导的转基因淋巴细胞有效抑制猴免疫缺陷病毒的感染和致病被引量：1
- 2001年
- 目的 获得抗猕猴免疫缺陷病毒 (SIV)转基因的淋巴细胞。方法 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 ,人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescriptSK的XhoI SalI位点 ,通过连续 4次克隆获得 10拷贝核酶基因的载体。转染前测定自切割核酶的体外活性并将之转移至哺乳动物表达载体上 ,脂质体法转染含核酶基因的表达载体 ,转染细胞在含 40 0mg/LG418的培养介质中筛选。转基因细胞对猴免疫缺陷病毒的抗性通过免疫荧光测定来估测。结果 37℃孵育 15min后 85 %的十体核酶自切割成单体核酶。在初始 2 5min的反式切割反应中尽管10体核酶摩尔数不足单体核酶十分之一 ,但十体核酶平均超过单体核酶 13 31%的切割产物。Northern点杂交证明单体核酶基因和十体核酶基因已经转入细胞并在细胞中获得表达。SIV攻毒试验表明 ,SIV接种 6d后转染单体核酶基因的细胞生长正常 ,不出现融合细胞 ,绝大多数转染十体基因的细胞生长良好 ,只发现极少数的融合细胞 ;转染单体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率达到10 0 % ,转染十体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率为 91 2 % ,转空表达载体细胞为 48%。结论 转自切割核酶基因的细胞对SIV的感染和致病均表现较强的抗性 ,但单体核酶比
- 邓文生张奉学杨希才符林春康良仪
- 关键词：免疫缺陷病毒感染基因治疗
- 特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒负链的多价核酶的构建和体外活性测定被引量：12
- 2000年
- 根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成并克隆了特异切割马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd)负链RNA不同区域位点的双价和三价锤头型核酶基因。通过体外转录 ,将PSTVd负链RNA分别与双价和三价核酶混合 ,37℃温育 2h。结果表明 ,双价核酶和三价核酶均表现出较高的切割活性 ,其中双价核酶处理的切割产物的大小与理论值相符合。三价核酶虽表现出较高的切割活性 ,但只是其中一价核酶在起作用。讨论了二价和三价核酶的应用前景。
- 邓文生杨希才康良仪田波
