陈建武
- 作品数：8 被引量：51H指数：4
- 供职机构：中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 苏云金杆菌辅助蛋白基因p19和orf1-orf2对杀虫晶体蛋白Cyt1 Aa表达的影响(英文)
- 2003年
- 为检测苏云金杆菌辅助蛋白P19和ORF1 ORF2对杀虫晶体蛋白Cyt1Aa表达的影响 ,构建了 5个重组表达质粒。 5个质粒都含有cyt1Aa基因 ,但pT1只含有cyt1Aa基因 ,pT2同时含有p19基因 ,pT3同时含有orf1 orf2串联基因 ,pT4同时含有p19基因和p2 0基因 ,pT5同时含有orf1 orf2串联基因和p2 0基因。将这 5个表达质粒和质粒pWF4 5电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型 4Q7中 ,分别获得转化菌株Bt T1、Bt T2、Bt T3、Bt T4、Bt T5和Bt WF4 5。SDS PAGE结果显示 ,菌株Bt T1、Bt T2和Bt T3只产生少量的 2 7kDCyt1Aa蛋白 ,而且部分降解为大约 2 4kD的蛋白。而Bt T4和Bt T5能产生大量的Cyt1Aa蛋白 ,但Bt T4和Bt T5的Cyt1Aa蛋白产量都明显少于Bt WF4 5。电镜观察和生物测定结果表明Bt T4和Bt T5与Bt WF4 5的晶体大小和杀蚊毒力没有显著性差异。研究表明P19和ORF1 ORF2对Cyt1Aa蛋白的合成显示可能有抑制作用。
- 汤慕瑾曾少灵陈建武师永霞徐炜袁美妗庞义
- 关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白
- 苏云金芽孢杆菌vip3A基因的检测及保守性分析被引量：10
- 2003年
- Vip3A蛋白是苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)在营养期分泌的一类新型杀虫蛋白。用PCR方法从 114个Bt菌株和 4 1个Bt标准菌株中筛选到 39株即约 2 5 %的菌株含有vip3A基因。利用所制备的Vip3A蛋白的多克隆抗体对以上含有vip3A基因的Bt菌株进行Western印迹分析 ,发现多数PCR反应为阳性的菌株都产生 89kD大小的蛋白 ,其中有 4株没有Vip3A蛋白的表达。从以上菌株中挑选 2个对夜蛾科害虫具有较高和较低毒力的菌株 ,即S10 1和 6 11,并分别进行vip3A基因的克隆和测序 ,再与GenBank上所登录的其它 6个全长vip3A基因和 2个已报道的但未登录GenBank的vip3A基因进行核苷酸和氨基酸序列比较 ,结果表明 ,vip3A是一个极其保守的基因。将以上所克隆的 2个vip3A基因即vip3A S10 1和vip3A 6 11分别插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP S10 1和pOTP 6 11,转化到大肠杆菌M15 ,经 1mmol LIPTG诱导后均表达 89kD大小的Vip3A蛋白。蛋白可溶性试验表明 ,Vip3A S10 1和Vip3A 6 11分别有 4 8%和 35 %的蛋白是可溶的。将Vip3A S10 1和Vip3A 6 11蛋白和已报道的Vip3A S184蛋白对初孵斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,3个Vip3A蛋白对斜纹夜蛾幼虫毒力没有显著性差异 ,这说明了Vip3A个别氨基酸的?
- 陈建武唐丽霞宋少云袁美妗庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌VIP3A基因保守性克隆
- 苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响被引量：5
- 2003年
- 苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C 半端缺少了一段含 4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定 ,报道苏云金杆菌辅助蛋白P2 0帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT310 1构建 3个表达质粒 ,即pT1B、pP1B和pDP1B ,3个质粒都含有cry1Ab基因 ,不同在于pT1B没有p2 0基因 ,pP1B含有p2 0全基因 ,而pDP1B不仅含有p2 0全基因 ,且在p2 0基因前插入cry1A(c)启动子。分别将这 3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中 ,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Westernblot表明cry1Ab基因在这 3株菌中均表达了 130kD的蛋白 ,部分降解为大约 6 0kD的蛋白。蛋白定量分析显示 ,3株菌 130kD蛋白量的比为 1∶1.4∶1 5 ,降解后的 6 0kD蛋白量的比为 1∶1.1∶1.6 ,Cry1Ab蛋白总量的比为 1∶1∶2∶1 6。镜检发现 ,Cry1Ab在 3株菌中都形成典型的菱形晶体 ,其晶体大小为T1B
- 汤慕瑾袁美妗陈建武师永霞曾少灵余健秀庞义
- 关键词：苏云金杆菌辅助蛋白杀虫晶体蛋白CRYLAB生物杀虫剂
- 苏云金杆菌vip3 A基因的克隆、表达及杀虫活性分析被引量：16
- 2002年
- 用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 89kD大小的Vip3A S184蛋白 ,并得到Westernblot证实。蛋白可溶性试验表明 ,目的蛋白中约有 19%是可溶的 ,用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此 ,可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体 ,用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾 (Spodopteraexigua)、斜纹夜蛾 (S .litura)和棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)等 3种害虫的初孵幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,Vip3A
- 陈建武唐丽霞汤慕瑾师永霞庞义
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆抗体
- 苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对营养期杀虫蛋白Vip3A杀虫毒力的影响被引量：1
- 2006年
- 为检测苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20和cyt1A基因与vip3A基因连接构建了重组质粒pHVC20,然后电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株CryB中进行了共表达,以单独表达Vip3A蛋白的CryB(pHPT3)作为对照菌株。Westernblot结果显示,Vip3A蛋白在CryB(pHVC20)菌株中的最大表达量约为在CryB(pHPT3)菌株的2倍,这可能是由于前者中的辅助蛋白P20增加了Vip3A表达量的缘故,晶体蛋白Cyt1A的存在对Vip3A的正常表达没有影响。生物测定结果表明,CryB(pHVC20)和CryB(pHPT3)菌株对斜纹夜蛾初孵幼虫的LC50值分别为10.62!g/ml和78!g/ml,前者的毒力比后者提高了6倍,这表明Cyt1A蛋白和Vip3A蛋白对目标昆虫的毒力可能存在着协同增效作用。
- 师永霞马文丽袁美妗陈建武庞义
- 关键词：苏云金杆菌生物测定
- 苏云金杆菌辅助蛋白P20对营养期杀虫蛋白Vip3A表达的影响被引量：4
- 2006年
- 为检测苏云金杆菌辅助蛋白P20对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20基因与vip3A基因相连构建了重组质粒pHVP20,然后电激转化至Bt中进行了共表达,以仅携带vip3A基因的质粒pHPT3作为对照质粒。Westernblot结果显示,当vip3A基因和p20基因在Bt无晶体缺陷株CryB中共表达时,Vip3A蛋白的最大表达量约是其在CryB(pHPT3)菌株中单独表达的1.5倍。生物测定结果表明,CryB(pHVP20)和CryB(pHPT3)菌株对初孵斜纹夜蛾幼虫的LC50值分别为48.79μg/mL和78.00μg/mL,这说明P20蛋白可以促进vip3A基因在Bt中的表达,但对提高Vip3A蛋白的杀虫毒力没有显著性帮助。
- 师永霞袁美妗陈建武孙钒庞义
- 关键词：苏云金杆菌营养期杀虫蛋白生物测定
- 苏云金芽胞杆菌vip3A基因的研究
- 营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins,VIPs)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白,它对鳞翅目昆虫具有...
- 陈建武
- 关键词：苏云金芽胞杆菌VIP3A基因营养期杀虫蛋白基因克隆基因表达
- 文献传递
- 苏云金杆菌营养期杀虫蛋白的研究被引量：29
- 2002年
- 营养期杀虫蛋白 (vegetativeinsecticidalproteins ,VIPs)是苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白。VIPs主要分为VIP1、VIP2和VIP3三种。VIP1和VIP2构成二元毒素 ,对鞘翅目叶甲科的昆虫具有杀虫特异性 ;而VIP3对鳞翅目昆虫具有较广谱的杀虫活性。VIP1和VIP2的杀虫作用机理还不清楚 ;VIP3通过诱发细胞凋亡 ,最终导致昆虫死亡 ,这种作用机理与Bt杀虫晶体蛋白的作用机理完全不同 ,这为筛选新的杀虫活性物质提供了新的思路。vip基因现已被应用于转基因杀虫植物的构建 ,得到高效抗虫的多价转基因玉米。此外 ,VIPs嵌合蛋白的构建、vip及其融合基因导入其它许多宿主微生物等方面的研究也具有诱人的潜在应用前景。
- 陈建武余健秀胡晓晖庞义
- 关键词：苏云金杆菌营养期杀虫蛋白转基因植物
