袁美妗
- 作品数：28 被引量：51H指数：4
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 斜纹夜蛾核多角体病毒的侵染机理及疾病流行规律研究
- 庞义王珣章余健秀杨凯李朝飞代小江苏德明李广宏陈其津袁美妗宋少云温小昭何敏儿
- 该项目是在原来工作的基础上，选择斜纹夜蛾和甜菜夜蛾核多角体病毒为对象，应用分子生物学、现代生物技术和遗传工程的原理和方法，着重研究病毒与宿主细胞的识别、入侵及复制，测定SpltMNPV基因组全序列，找出病毒与侵染宿主直接...
- 关键词：
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒功能基因
- Bt Cry1Aa和Cry3A结构域编码区的融合及融合基因表达
- 袁美妗
- 关键词：苏云金芽孢杆菌结构域融合基因表达
- 文献传递
- 苏云金杆菌辅助蛋白P19对杀虫晶体蛋白Cry11Aa表达的影响被引量：2
- 2006年
- 苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因。将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异。该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平。
- 师永霞曾少灵袁美妗孙钒庞义
- 关键词：苏云金杆菌生物测定
- 苏云金芽孢杆菌的cry2A芽孢期启动子和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa蛋白表达的影响被引量：1
- 2008年
- 【目的】分析苏云金芽孢杆菌的cry2A型芽孢期启动子对晶体蛋白Cry11Aa的协调作用和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa表达的促进功能。【方法】3个包括cry11Aa编码区的重组质粒pHcy1、pHcy2和pHcy4被构建并电激转化到苏云金芽孢杆菌晶体缺陷株4Q7中,其中pHcy1质粒携带cry11Aa基因自身启动子和分子伴侣p19基因,pHcy2携带cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因,pHcy4质粒在pHcy1的上游插入了cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因。SDS-PAGE分析了Cry11Aa蛋白在各重组苏云金菌株中的表达情况,并通过生物测定确定了其对蚊虫的生物活性。【结果】SDS-PAGE结果表明,Cry11Aa蛋白在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)均获得了表达,在4Q7(pHcy2)中未检测到Cry11Aa蛋白,推测晶体蛋白Cry11A不能利用cry2A型启动子进行表达调控;Cry11Aa蛋白在等体积4Q7(pHcy4)培养液中的表达量是4Q7(pHcy1)菌株的1.25倍,暗示着分子伴侣ORF1-ORF2在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量。4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)形成的Cry11Aa蛋白晶体的形状和大小相似,两者对致倦库蚊的生物活性没有明显差异,LC50s分别为59.33ng/mL和66.21ng/mL。【结论】推测晶体蛋白Cry11A能否成功表达与其使用启动子的类型和两者的协调配合有关。分子伴侣ORF1-ORF2虽然在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量,但对提高Cry11Aa蛋白的杀蚊毒力没有显著性帮助。
- 师永霞曾少灵袁美妗孙钒庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌分子伴侣
- 苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响被引量：5
- 2003年
- 苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C 半端缺少了一段含 4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定 ,报道苏云金杆菌辅助蛋白P2 0帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT310 1构建 3个表达质粒 ,即pT1B、pP1B和pDP1B ,3个质粒都含有cry1Ab基因 ,不同在于pT1B没有p2 0基因 ,pP1B含有p2 0全基因 ,而pDP1B不仅含有p2 0全基因 ,且在p2 0基因前插入cry1A(c)启动子。分别将这 3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中 ,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Westernblot表明cry1Ab基因在这 3株菌中均表达了 130kD的蛋白 ,部分降解为大约 6 0kD的蛋白。蛋白定量分析显示 ,3株菌 130kD蛋白量的比为 1∶1.4∶1 5 ,降解后的 6 0kD蛋白量的比为 1∶1.1∶1.6 ,Cry1Ab蛋白总量的比为 1∶1∶2∶1 6。镜检发现 ,Cry1Ab在 3株菌中都形成典型的菱形晶体 ,其晶体大小为T1B
- 汤慕瑾袁美妗陈建武师永霞曾少灵余健秀庞义
- 关键词：苏云金杆菌辅助蛋白杀虫晶体蛋白CRYLAB生物杀虫剂
- 杆状病毒AcMNPV p48基因的研究
- 杆状病毒主要被用作生物农药来控制农、林业害虫，此外，还被广泛地用作外源基因表达载体，在昆虫细胞中表达大量目的蛋白，同时可作为基因转移载体用于基因治疗。到目前为止，已有45株杆状病毒的全基因组序列被测定，在这些已经测定全基...
- 袁美妗
- 关键词：杆状病毒全基因组序列ACMNPV病毒复制亚细胞定位蛋白免疫印迹
- 文献传递
- 杆状病毒ODV囊膜形成相关基因的鉴定和分子机理探究
- 杆状病毒的一个重要特征是在其生活周期中能同时产生两种形态的病毒粒子：芽生型病毒粒子(Budded virion,BV)和包埋型病毒粒子(occlusion-derived virion,ODV).ODV介导病毒对昆虫的口...
- 袁美妗魏灯辉王岩张晓梅杨凯
- 苏云金芽孢杆菌cyt1 Aa基因在拟步甲亚种菌株中的表达及重组菌株杀虫活性研究被引量：1
- 2007年
- 将含苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)cyt1Aa基因的质粒电激转化至对鞘翅目害虫有专一活性的Bt拟步甲亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis,简称Btt)菌株中进行表达,获得重组菌株Btt-WF45。对表达产物进行SDS-PAGE分析,显示Cyt1Aa蛋白获得了大量表达。生物测定结果表明,Btt-WF45对鞘翅目小圆叶甲(Plagiodera Redtenbacher)幼虫没有毒力,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)的毒力比对照菌株4Q7-WF45高0.33倍,对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒力比4Q7-WF45高0.63倍。由于在重组菌株Btt-WF45中Cry3A蛋白的表达量太低,所以在该结果中未能显示Cyt1Aa蛋白与Cry3A蛋白是否存在协同增效作用。
- 袁美妗汤慕瑾师永霞王莉庞义
- 关键词：苏云金杆菌AA杀虫活性
- 斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltNPV)基因组EcoRI-G片段的序列分析
- 2002年
- 斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltNPV)基因组EcoRI G片段全长 745 0bp ,包括 7个开放读码框 :vp39、lef 4、cg30、p91、vp33、tlp2 0、AcMNPVORF81同源基因和一个同源区 (hr)。基因组排列比较分析发现 ,这些基因在基因组中的排列 。
- 李镇龙綮新袁美妗贺雄雷庞义王王旬章
- 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒
- SeMNPV持续性感染的甜菜夜蛾细胞株的建立被引量：1
- 2011年
- 在昆虫种群中常常发生杆状病毒持续性感染,持续性感染可转变为增殖性感染而引发病毒流行病。本研究拟建立一个病毒-细胞模型,用于探讨杆状病毒持续性感染分子机制。将甜菜夜蛾核多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV）在其宿主细胞Se301中无稀释连续传代以弱化病毒毒力,用传至第8代的SeMNPV感染Se301细胞后,虽然大部分细胞因病毒感染而裂解,但仍有少量细胞存活并可传代培养,该传代细胞株命名为P8-Se301。P8-Se301细胞在对数生长期的群体生长倍增时间为58~65 h,慢于Se301细胞的生长速度。光镜和电镜观察表明,少部分P8-Se301细胞具有病毒发生基质、病毒粒子、多角体等病毒感染特征。终点稀释法和感染中心测定表明,4.14%±0.99%的P8-Se301细胞可持续释放感染性的子代病毒,但该子代病毒在Se301细胞中的复制速度较野生型SeMNPV慢。结果表明,P8-Se301细胞呈现典型的持续性感染特征。
- 翁庆北肖炜袁美妗杨凯庞义
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒
