- 连续贴壁法分离培养人外周血来源树突状细胞及其超微结构的观察被引量：4
- 2007年
- 目的改进人外周血单个核细胞分离培养树突状细胞的方法,电镜观察树突状细胞超微结构。方法利用连续贴壁法分离获得CD14+前体细胞,经人重组粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白介素-4(rhIL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导产生成熟DC,流式细胞仪检测DC表面标志物表达水平,透射电镜(TEM)观察树突状细胞超微结构。结果连续贴壁法体外分离培养人外周血DC,所获得DC数量和纯度均都多于以往一次贴壁分离培养的DC。培养1周的DC高表达CD1a、CD40、HLA-DR、CD80、CD86。透射电镜观察到不同状态树突状细胞的超微结构。结论连续贴壁法可分离培养数量较大、纯度较高的人外周血来源DC。
- 马斌曲萍张秀敏张云飞胡沛臻葛伟司少艳黄杨李侠隋延仿
- 关键词：树突状细胞透射电镜
- 联合表位肽诱导HLA-A2^+人PBMC产生抗原特异性CTL及杀伤活性研究被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨MAGE-3,MAGE-n抗原表位体外联合诱导的CTL,并研究其特异性杀伤活性。方法:候选抗原表位以固相多肽合成技术合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定,以流式细胞仪筛选HLA-A2+人外周血PBMC,T2细胞负载抗原肽反复刺激活化诱导抗原特异性CTL,LDH检测其杀伤活性。结果:联合表位肽体外刺激人PBMC,能够较强地诱导抗原特异性CTL并产生特异性杀伤。结论:MAGE-3与MAGE-n的HLA-A2限制性CTL表位肽的联合应用能够产生较强的体外抗肿瘤免疫反应。
- 张秀敏隋延仿司少艳胡沛臻黄杨葛伟李侠马斌
- 关键词：MAGE-3MAGE-N表位
- VFM技术评价CRT短期左室内收缩期流场的变化特征
- 齐伟马斌左蕾刘丽文
- 超抗原单次和多次诱导T细胞膜表型及细胞因子释放的变化特征被引量：3
- 2007年
- 目的:观察超抗原SEA体外单次和多次诱导T细胞的细胞膜表型及细胞因子释放的变化特征。方法:SEA体外单次和多次诱导小鼠脾淋巴细胞,用流式细胞术检测CD4、CD8、CD69、CD25、CD28及细胞膜上和细胞内CTLA-4(CD152)的表达,并测定细胞培养上清中IL-2、INFγ-、TNFα-、IL-4和IL-10的水平。结果:1次SEA诱导组(1×SEA组)中,CD4、CD8、CD69、CD25和CD28的表达均显著增加,CTLA-4的表达低,IL-2、INFγ-、TNF-α的水平显著增加。2×SEA组中,CD4、CD8、CD25和CD28的表达也有较明显的增高,CD69的表达未继续上升,CTLA-4的表达显著增加;IL-4和IL-10的水平明显增高。3×SEA组中,CD4和CD8的表达无明显增减,CD69、CD28和CTLA-4的表达显著降低,CD25的表达与2×SEA组相似;IL-10的水平仍继续上升。结论:SEA初次诱导小鼠脾淋巴细胞时,能显著促进T细胞的活化和增殖;经SEA多次刺激(3次)可诱导T细胞的无反应性。
- 黄杨司少艳葛伟张秀敏胡沛臻李侠马斌隋延仿
- 关键词：超抗原T细胞细胞因子
- 稳定表达人MAGE-1基因小鼠黑色素瘤细胞系的建立
- 2006年
- 目的:构建真核表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中稳定表达。方法:用PCR方法扩增质粒pUC19-MAGE-1中目的基因MAGE-1,连接到真核表达载体pCDNA3.1中,构建真核表达pCDNA3.1-MAGE-1,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞。G418筛选阳性克隆(B16-MAGE-1),用RT-PCR和Western blot检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达;分别以2×105个B16细胞和B16-MAGE-1接种于C57BL/6小鼠右侧背部皮下,观察B16-MAGE-1细胞的致瘤能力。结果:用PT-PCR与Western bolt分别在B16-MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组共20只小鼠均皮下成瘤,且肿瘤大小没有明显差异。结论:成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1,获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系,并保持很好的致瘤能力,为研究MAGE家族在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了基础。
- 李侠隋延仿胡沛臻司少艳张秀敏黄杨马斌葛伟
- 关键词：黑色素瘤抗原基因转染肿瘤免疫治疗
