张秀敏
- 作品数：94 被引量：248H指数：9
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 脂多糖通过自噬作用促进氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞的形成被引量：2
- 2014年
- 目的:研究脂多糖(LPS)促进氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞形成的机制。方法:人源性THP-1细胞的培养,经ox-LDL诱导形成泡沫细胞。采用油红O染色鉴定泡沫细胞的形成,免疫荧光和Western blot方法检测自噬活性,观察自噬作用对泡沫细胞脂质沉积的影响。结果:①经形态学观察,脂多糖可以促进ox-LDL诱导的泡沫细胞的形成。②脂多糖可以激活自噬作用,并且自噬活性在16h达到最强。③脂多糖可以增强自噬激活剂雷帕霉素(Rap)的促自噬作用(P<0.05),并且削弱自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)的作用。④Rap单独作用不能影响泡沫细胞中脂质的累积,然而脂多糖能够增强Rap的作用,显著促进脂滴在泡沫细胞中的累积(P<0.05);3-MA可以抑制基础水平和脂多糖诱导后泡沫细胞中脂滴的积累。结论:脂多糖通过增强自噬作用促进泡沫细胞的形成。
- 袁媛张利军王超郑鹏飞张秀敏叶菁冯旭阳
- 关键词：脂多糖自噬泡沫细胞OX-LDL
- 超抗原SEA(D227A)的构建及其免疫活性鉴定被引量：7
- 2004年
- 目的 构建SEA(D2 2 7A)基因的原核表达载体 ,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定。方法 采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使SEA基因第 6 80位碱基由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7位氨基酸残基由天冬氨酸 (GAT)突变为丙氨酸 (GCT) ,构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,在大肠杆菌DH5α中原核表达 ,再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定。结果 构建的SEA(D2 2 7A)基因经测序证实与设计的序列一致 ;成功地构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌DH5α ,通过IPTG诱导、GSTrapFF柱分离纯化及凝血酶切除GST后 ,得到Mr 为 2 70 0 0的目的蛋白。淋巴细胞增殖实验显示 ,10 0ng mL重组SEA(D2 2 7A)可明显刺激淋巴细胞增殖。结论 成功地构建了SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 ,所得重组SEA(D2 2 7A)能够刺激淋巴细胞增殖 ,但作用与野生型SEA相比较温和。该结果为寻找有效、毒副作用低的超抗原提供了线索。
- 宋宏萍隋延仿叶菁李增山陈广生张秀敏
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A超抗原原核表达点突变
- 肿瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测及合成鉴定被引量：13
- 2003年
- 目的 采用表位重建技术 ,对预测MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位结合活性进行研究。方法 用SYFPEITHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法 ,筛选新的MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位作为候选表位。对预测的抗原表位进行多肽合成 ,并用HPLC进行纯化 ,质谱法 (MS)鉴定。候选表位与HLA A2位点的亲和力及结合稳定性用竞争结合抑制实验、T2结合稳定性实验及MHC 肽复合体稳定性实验测定。结果 用表位预测法筛选MAGE n抗原 5个HLA A2限制性CTL表位为候选表位。QLVFGIEVV(15 9 16 7)、IMPKTGFLI(195 2 0 3)和FLIIVLVMI(2 0 1 2 0 9) 3个表位具有较高的HLA A2结合力 (IC50 <15 μM)和结合稳定性 (DT5 0 >6h) ,可作为MAGE n抗原HLA A2限制性CTL候选表位进行进一步研究。结论 表位预测结合表位重建方法可提高肿瘤抗原CTL表位研究的效率。MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位经免疫学鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 ,为临床肝癌特异性治疗奠定基础。
- 董海龙隋延仿叶菁李增山曲萍张秀敏陈广生禄韶英
- 关键词：肿瘤抗原MAGE-NHLA-A2细胞毒性免疫学鉴定
- MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建
- 目的构建MAGE-1(melanoma antigen 1)与人HSP70(heat shock protein70)融合基因的真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法利...
- 陈广生隋延仿宋宏萍叶菁黄亚渝马加海张秀敏
- 文献传递
- MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的构建MAGE-1(melanomaantigen1)与人HSP70(heatshockprotein70)融合基因的真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法利用PCR方法扩增人HSP70基因,经测序后连入真核表达载体pCDNA3.1,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因,测序后插入HSP70基因的5'端,构建了MAGE-1与人HSP70融合基因表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70。结果成功地扩增了人HSP70基因与MAGE-1基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致,成功地构建了pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70真核表达载体。结论成功地构建MAGE-1与人HSP70融合基因的真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1-HSP70,为进一步DNA肿瘤疫苗研究提供了实验基础。
- 陈广生隋延仿宋宏萍叶菁黄亚渝马加海张秀敏
- 关键词：融合基因
- 腺病毒介导的肝癌靶向SEA-CD80基因治疗及免疫学机制的初步研究被引量：9
- 2008年
- 目的:观察肝癌靶向性葡萄球菌肠毒素A(SEA)/CD80基因重组腺病毒载体对肝癌的疗效,并对其免疫学机制进行初步研究。方法:利用AdEasy腺病毒系统分别构建并制备甲胎蛋白(AFP)启动子和增强子Ⅰ调控的SEA和/或CD80基因重组腺病毒载体,然后采用瘤体内直接注射的方式对小鼠皮下移植性肝癌进行治疗,采用RT-PCR和Western blot方法检测腺病毒注射部位的SEA和CD80 mRNA和蛋白的表达情况;采用ELISpot方法和LDH释放实验分别检测脾脏淋巴细胞中肝癌特异性IFN-γ分泌细胞的频数和细胞毒性T细胞(CTLs)对Hepa1-6细胞的特异杀伤活性;通过观察荷瘤小鼠经治疗后肿瘤体积的变化及生存时间,评价重组腺病毒对肝癌的治疗作用。结果:我们构建的腺病毒能够使SEA和/或CD80 mRNA和蛋白靶向地在肝癌组织中表达;与空载体组和PBS对照组相比,双基因组和单基因组分泌IFN-γ的T细胞数量均明显增多,CTL对Hepa1-6细胞的特异性杀伤作用均明显增强,荷瘤小鼠肿瘤体积明显减小,生存期明显延长;双基因组的疗效和对免疫系统的激活作用明显高于单基因组;CD80和SEA的组之间、空载体和PBS组之间无明显差异。结论:我们制备的肝癌靶向性重组腺病毒对肝癌有良好的治疗作用,联合基因治疗优于单个基因治疗。
- 司少艳胡沛臻黄杨李侠葛伟张秀敏隋延仿张建中张铭
- 关键词：葡萄球菌肠毒素ACD80共表达肝癌
- 葡萄球菌肠毒素A和B7.1双刺激分子共转染人肝癌细胞及其免疫学效应被引量：1
- 2003年
- 超抗原(SAg)是来源于细菌和病毒家族的蛋白组份,可未经处理而直接结合于组织相容性复合物Ⅱ分子并激活含特定Vβ成份的T细胞。为开辟超抗原在T细胞介导的肿瘤免疫排斥中的新途径,我们将葡萄球菌肠毒素A(SEA)超抗原分子及共刺激分子B7.1的基因直接转入人肝癌细胞,从而诱发强的免疫排斥反应。
- 李增山隋延仿叶菁张秀敏
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A免疫学效应超抗原
- MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建及在小鼠黑色素瘤细胞内的表达
- 本文采用MAGE-1作为肿瘤特异性抗原,通过建立MAGE-1与Hsp70的融合基因PIRES2-EGFP-MAGE-HSP70构建,为肿瘤DNA疫苗研究奠定了基础.
- 叶菁隋延仿陈广生宋宏萍黄亚渝马加海张秀敏
- 关键词：DNA疫苗小鼠黑色素瘤细胞MAGE-1融合基因真核表达载体
- 文献传递
- PHA-CD3AK细胞的体外诱导及其生物学特性初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的:研究PHA-CD3AK细胞的体外诱导方法及其生物学特性,并与LAK细胞进行比较。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),采用植物血凝素(PHA)、单克隆抗体(anti-CD3McAb)和基因重组人白细胞介素2(rhIL-2)、共同诱导制备PHA-CD3AK细胞;应用流式法分析PHA-CD3AK细胞的免疫表型、乳酸脱氢酶法(LDH)检测PHA-CD3AK细胞的杀伤活性,并观察其形态;吉姆萨染色法观察其核型。结果:微量anti-CD3McAb(0.05μg/ml)辅以少量rhIL-2(300U/ml)和PHA(100μg/ml)共同培养,即能诱导和大量扩增PHA-CD3AK细胞,其扩增倍数显著高于LAK细胞,维持高扩增的时间也远较LAK细胞持久;当效靶细胞比为80:1时,PHA-CD3AK细胞对体外肿瘤细胞(K562)杀伤的百分率为56.5%;免疫表型检测PHA-CD3 AK细胞中CD3^+、CD4^+、CD8^+细胞的比率分别为(86.5±5.89)%、(38.20±5.27)%、(42.63±3.50)%;核型为正常二倍体,染色体数目为46条。结论:PHA-CD3AK细胞是以CD3^+、CD4^+、CD8^+细胞为主的异质细胞群,并具有淋巴母细胞样特征,PHA-CD3AK细胞为正常二倍体细胞。PHA-CD3AK细胞是易于体外诱导、扩增能力强,体外存活时间长、杀瘤活性高的一种具有广阔应用前景的肿瘤过继免疫效应细胞。
- 郝建峰夏禾爱田敏张秀敏
- 关键词：体外诱导生物学特性
- 肝癌靶向SEA/CD80共表达腺病毒在小鼠体内的分布和表达
- 2016年
- 目的:研究肝癌靶向SEA/CD80共表达腺病毒(A-S-C)在小鼠体内的分布。方法:局部注射A-S-C后,采用实时定量PCR方法检测不同时间点BALB/c小鼠血液和粪便中腺病毒的含量。免疫组织化学染色检测腺病毒在BALB/c小鼠体内各组织中的分布情况。Western blot检测目的蛋白SEA和CD80在NOD/SCID小鼠种植瘤中的表达。结果:用药后BALB/c小鼠血液和粪便中腺病毒含量迅速上升,分别在第3天和第5天达到峰值,然后又迅速降低,到第14天时基本消失。免疫组化检测5型腺病毒抗原,结果发现腺病毒主要分布在小鼠的肝组织中,其他组织中均为阴性。免疫印迹结果显示目的基因SEA的表达量也在用药后第3天达到峰值,逐渐降低,至第14天降到最低水平。结论:肝癌靶向免疫基因治疗剂A-S-C在小鼠体内代谢稳定,目的基因能够在移植瘤中特异性表达。同时,初步结果显示A-S-C对正常器官无明显毒副作用。
- 袁媛吴雅岚张秀敏石剑宽孙超张利军
- 关键词：肝癌葡萄球菌肠毒素ACD80腺病毒
