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黄芬: 作品数：93 被引量：83H指数：6; 供职机构：昆明理工大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究计划面上项目云南省教育厅科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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提高外源蛋白表达的增强子样基因及其应用: 本发明公开了一种能够在原核细胞提高外源蛋白表达的原核增强子样基因，该基因具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列或其截短序列；通过构建融合表达报告基因重组载体筛选出该基因，融合报告基因由人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1基...; 井申荣闫沁男王应明曾韦锟黄芬; 文献传递

昆明市孕妇人群戊型肝炎病毒血清学调查被引量：4: 2012年; 目的调查昆明市孕妇人群戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)感染情况。方法采用ELISA法检测昆明市不同妊娠阶段孕妇血清标本(149例)中抗HEV IgG抗体。结果昆明市孕妇人群HEV IgG抗体阳性率为10.07%(15/149),其中20～25岁孕妇HEV IgG阳性率为12.07%(7/58),26～29岁孕妇人群HEV IgG抗体阳性率为13.46%(7/52),30岁以上孕妇人群阳性率最低为2.56%(1/39)。妊娠早期孕妇HEV IgG抗体阳性率为6.25%,妊娠中期为10.75%,妊娠晚期为10%。经统计分析,不同年龄阶段、不同妊娠时期的孕妇人群中HEV IgG抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。结论昆明市孕妇人群中HEV感染主要以散发病例形式存在,鉴于HEV对孕妇极高的致死率,急需加强妊娠期间孕妇的HEV检测,以便进行及时有效的治疗。; 李丽马天武曾韦锟黄芬井申荣; 关键词：戊型肝炎病毒孕妇血清学调查

一种呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗及其制备方法，本方法构建了重组表达载体F2/pFN18K，并将重组表达载体转化到大肠杆菌中形成重组工程菌，重组工程菌经过发酵培养，通过鼠李糖诱导在大肠杆菌中获得高效表达Ha...; 井申荣杨靖佳曾韦锟黄芬; 文献传递

一种结核分枝杆菌TB10.4-F1融合蛋白疫苗及制备方法: 本发明公开了一种制备结核分枝杆菌TB10.4-F1融合蛋白疫苗及其制备方法，该方法将结核分枝杆菌TB10.4蛋白基因与呼吸道合胞病毒蛋白的F1蛋白基因连接在一起，转化到大肠杆菌表达菌株中，经IPTG诱导表达TB10.4-...; 井申荣王瑞博曾韦锟黄芬; 文献传递

云南省猪戊型肝炎病毒全基因组扩增及进化分析被引量：1: 2015年; 目的对猪戊型肝炎病毒全长基因组进行扩增,分析其进化关系,为HEV的感染性克隆研究奠定基础。方法利用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR)和RACE技术对猪粪便中HEV样品进行全基因组扩增,利用DNAStar和MEGA4.0软件进行同源性比较和进化树分析。结果 RT-nPCR方法扩增出HEV的5段目的基因序列和RACE技术扩增出HEV的5′和3′端,序列比对结果正确,HEV全长扩增成功。同源性分析显示其与新疆株(GU119961)同源性较高(96.1%)。系统进化树显示该病毒属于基因4型h亚型猪HEV。结论 HEV全基因组序列扩增成功,为深入研究HEV奠定基础。; 杨臣臣龙飞燕毕艳红李云龙王珏禹文海井申荣黄芬; 关键词：猪戊型肝炎病毒

甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子筛选方法的建立: 2015年; 目的:通过构建p CAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。方法:PCR无义突变去除p CAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点,并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点,构建启动子陷阱载体p CAT3。TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组,插入p CAT3载体中,转化至大肠杆菌DH5α,通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌;随机挑取1株提取质粒,测序及比对分析插入序列;根据分析结果设计引物,扩增可能的启动子序列,并插入验证载体p-3lysm-egfp,转化DH5α,荧光显微镜观察。结果:成功构建p CAT3启动子陷阱载体,获得约100启动子文库菌,其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的ORF4启动子;插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。结论:该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子,为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。; 曾韦锟毛普加洪愉冯梦蝶许泽仰宋武战杨洪文赵继华王纪爱黄芬井申荣; 关键词：甲型副伤寒沙门菌噬菌体启动子

一种妊娠恒河猴戊型肝炎病毒感染模型的构建方法: 本发明公开了一种妊娠恒河猴戊型肝炎病毒感染模型的构建方法，其构建的具体步骤包括：S1、将HEV细胞悬液灌胃接种妊娠恒河猴；S2、收集妊娠恒河猴粪便和血清，进行HEV RNA的检测及病毒拷贝的检测；S3、收集新生恒河猴粪便...; 黄芬郝先辉禹文海; 文献传递

携带EGFP基因的戊型肝炎病毒重组质粒的构建及其感染性的验证被引量：1: 2016年; 为了构建携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重组质粒,转染人肺癌细胞A549细胞验证其感染性,PCR法分两段扩增HEV全基因组序列和EGFP基因序列,将EGFP报告基因插入到HEV ORF2基因下游,并克隆到体外转录表达载体pGEM-7Zf(+)上。然后利用脂质体转染法将重组质粒转入A549细胞,24h后在荧光显微镜下观察EGFP的表达;转染72h后,利用免疫荧光法检测HEV ORF2蛋白的表达。转染7d后将发生病变的A549细胞收集作为接种物,接种A549细胞验证携带EGFP的HEV-EGFP重组病毒的感染性。结果显示经酶切和测序鉴定携带EGFP的HEV重组表达质粒pGEM-HEV-EGFP构建成功;EGFP基因与HEV在A549细胞中可融合表达;携带EGFP的HEV重组表达质粒转染A549细胞7d后出现病变,并且连续传代3代仍具有感染性。本研究成功构建了携带EGFP的HEV全基因组重组质粒pGEM-HEV-EGFP,并成功感染A549细胞,为进一步研究HEV的复制机制及致病机理奠定基础。; 李云龙龙飞燕杨臣臣禹文海毕艳红王珏姜典财彭福春井申荣黄芬; 关键词：感染性

人呼吸道合胞病毒与结核分枝杆菌融合蛋白TB10.4-F1的免疫原性: 2013年; 目的在大肠杆菌中表达并纯化人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的融合蛋白TB10.4-F1,检测其免疫原性。方法将重组工程菌TB10.4/pET28a/BL21和TB10.4-F1/pET30a/BL21经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达形式;表达的融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1经His TrapTMHP层析柱进行亲和层析一步纯化后,免疫BALB/c小鼠。小鼠分为TB10.4(30μg/只)、TB10.4-F1(30μg/只)及PBS(200μl)组,分别于0、2、4周免疫小鼠,于每次免疫前1 d经尾部取血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中特异性的IgG水平;于末次免疫2周后摘眼球取血,分离血清,ELISA法检测特异性IgG水平及中和抗体滴度。结果表达的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1的相对分子质量分别约13 300和59 600,均以包涵体形式表达,表达量分别占菌体总蛋白的53.9%和12%;纯化后的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1纯度分别可达95%和80%;与TB10.4组相比,TB10.4-F1组IgG水平明显升高,IgG1/IgG2a值明显降低,但仍大于1;TB10.4-F1组小鼠血清中RSV特异性中和抗体滴度可达log102.699。结论融合蛋白TB10.4-F1免疫原性强,能激发出较为平衡的Th1/Th2反应,并产生抗HRSV的中和抗体。融合蛋白TB10.4-F1有望成为预防HRSV感染的候选疫苗。; 王瑞博井申荣曾韦锟黄芬; 关键词：结核分枝杆菌人呼吸道合胞病毒融合蛋白

一种呼吸道合胞病毒减毒毒株及其应用: 本发明公开了一种呼吸道合胞病毒减毒毒株KM516–AS，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC？NO:V201344；并用该减毒毒株在体外进行细胞培养，收获减毒毒株，进行纯化，制备成呼吸道合胞病毒减毒疫苗，该疫...; 井申荣卿琰陈卫东曾韦锟黄芬; 文献传递

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