丰锋
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省卫生厅科研基金四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠β防御素2、3融合基因载体构建及其抗流感病毒作用被引量：2
- 2010年
- 目的构建mBD2与mBD3融合基因的真核表达载体,检测其在MDCK细胞中的表达情况,并探讨其抗病毒特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD2与mBD3基因片段,通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD2与mBD3通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD2与mBD3。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光检测融合蛋白表达情况,最后采用CCID50测定并分析抗流感病毒作用。结果经鉴定后证实,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2-mBD3正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,CCID50实验结果说明有较好的抗流感活性。结论本研究成功构建mBD2-mBD3融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,该结果为进一步研究防御素抗病毒机制奠定了坚实的基础。
- 张强李明远丰锋巩天祥李婉宜刘冯欢冯艳邝玉王保宁
- 关键词：Β防御素甲型流感病毒融合基因重叠延伸PCR免疫荧光
- 重组MBD2体内抗不可分型流感嗜血杆菌机制的初步研究
- 目的观察实验小鼠体内注射重组鼠β防御素2（MBD2）后细胞因子的变化,评价重组MBD2对不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）感染小鼠的治疗效果并对其抗感染机制进行初步探讨。方法重组MBD2蛋白注射实验小鼠,利用PCR半定量检...
- 丰锋姚锋李燕张强李明远邵京京李婉宜
- 文献传递
- 流感病毒多表位基因盒的设计与预测被引量：1
- 2012年
- 目的预测流感病毒抗原表位并设计合成多表位基因盒。方法收集不同类型流感病毒基因序列,联合运用Syf-peithi、ProPred、Multipred2、Bcepred、Clastal X1.83、SWISS-MODEL等多种生物信息学软件进行分析,预测流感病毒Matrix1(M1)、Matrix2(M2)、Nucleoprotein(NP)和HA蛋白上的抗原表位,设计并合成流感病毒多表位基因盒。结果在不同亚型流感病毒的HA蛋白抗原上成功筛选出2个B细胞表位,在M1、M2及NP蛋白上分别筛选出3个T细胞表位,以一定的间隔序列串联各表位,设计并合成流感多表位基因盒。预测结果显示该多表位基因盒具有良好的同源性及抗原性。结论成功设计出包含T细胞表位及B细胞表位的流感病毒多表位基因盒Eg,为流感多表位基因疫苗的研发奠定了基础。
- 邵京京丰锋张强李虹李明远王保宁李婉宜
- 关键词：流感病毒抗原表位生物信息学分析
- 不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白免疫抗小鼠急性感染的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的：观察重组Hap蛋白免疫抗不可分型流感嗜血杆菌（NHTi）感染的免疫保护效果，初步探讨其保护机制。方法：用纯化的Hap重组蛋白与黏膜免疫佐剂霍乱肠毒素B亚单位（CT-B）联合鼻腔免疫C57BL／6小鼠。NHTi琼脂珠悬液对免疫小鼠进行气管内注射，建立小鼠NHTi急性肺部感染模型。NHTi攻击5d后，收集实验小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞计数，并取其肺组织进行肺部荷菌数检测及肺组织的病理检测。结果：Hap重组蛋白与CT—B的联合免疫能显著降低小鼠BALF中的白细胞总数、中性粒细胞渗出（P〈0．05）及感染小鼠肺组织内NTHi的荷菌数，并减轻感染小鼠支气管、细支气管周围及肺泡内的炎性浸润程度，明显改善其肺组织的病变。结论：鼻腔免疫的Hap重组蛋白在动物体内能发挥良好抗NTHi感染的免疫保护作用，为NTHi新型疫苗的研发提供了理论基础和实验依据。
- 李婉宜王保宁左凤琼曾蔚丰锋邝玉蒋中华李明远
- 关键词：黏膜免疫
- 小鼠β防御素1与甲型流感病毒M2e融合基因表达及其免疫特性研究
- 2010年
- 目的构建mBD1与M2e融合基因的真核表达载体,并检测其在MDCK细胞中的表达情况,初步探讨其免疫特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD1与M2e基因片段,再通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD1与M2e通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD1-M2e。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光、RT-PCR产物序列分析检测融合蛋白表达情况,最后采用MTT法检测mBD1-M2e融合蛋白刺激淋巴细胞增殖能力。结果经鉴定后证实构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,该细胞培养上清液能刺激淋巴细胞增殖。结论本研究成功构建mBD1-M2e融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,这一结果为进一步研究新型高效通用的流感病毒核酸疫苗奠定了坚实的基础。
- 张强丰锋左斌巩天祥李婉宜王保宁李明远
- 关键词：甲型流感病毒Β防御素融合基因重叠延伸PCR免疫荧光
- 重组MBD2体内抗不可分型流感嗜血杆菌机制的初步研究
- 2011年
- 目的观察实验小鼠体内注射重组鼠β防御素2(MBD2)后细胞因子的变化,评价重组MBD2对不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)感染小鼠的治疗效果,并对其抗感染机制进行初步探讨。方法重组MBD2蛋白注射实验小鼠,利用PCR半定量检测小鼠肺组织中TLR2、IL-1β、TNF-α、MBD2和β-Actine mRNA的表达;重组MBD2治疗NTHi肺部感染小鼠,通过肺指数、肺组织病理切片及肺部荷菌数检测,对其治疗效果进行评价。结果体内注射重组MBD2可显著提高实验小鼠肺组织TLR2、IL-1β、TNF-α及MBD2等细胞因子的表达量;重组MBD2的应用能显著降低NTHi肺部感染小鼠的肺指数及肺组织内的NTHi荷菌数,并能减轻感染小鼠肺组织的炎性浸润程度,明显改善其肺部病变。结论重组MBD2在体内对NTHi感染有较好的治疗效果,其作用机制可能与重组MBD2对机体特异性免疫应答的诱导密切相关,为防御素抗感染机制的进一步完善奠定了良好的实验基础。
- 丰锋姚锋李婉宜李燕张强李明远邵京京
- 关键词：不可分型流感嗜血杆菌细胞因子
- 不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白的表达及其生物学活性分析被引量：3
- 2010年
- 目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在E.coliBL21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白进行体外竞争黏附实验,SEM观察及菌落形成单位计数法分析该重组蛋白的黏附活性。纯化蛋白与黏膜免疫佐剂CT-B联合鼻腔免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠抗Hap的IgA及IgG抗体水平。结果纯化产物的SDS-PAGE分析显示获得单一的目的蛋白条带,Gelanalysis软件分析蛋白纯度可达85%,纯化产物超滤浓缩后,测得其蛋白浓度为3.2g/L。体外竞争黏附实验观察到Hap重组蛋白的加入可明显抑制NTHi对胞外基质的黏附,且细菌黏附量的减少与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。该重组蛋白与免疫佐剂CT-B联合免疫小鼠,可刺激机体产生较高水平的IgG或IgA抗体,与重组抗原单独免疫组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论 Hap蛋白在原核系统中获得较高浓度和纯度的表达,纯化Hap重组蛋白具有良好的免疫原性和粘附活性。
- 姚锋李婉宜邝玉李明远丰锋冯伟张强
- 关键词：不可分型流感嗜血杆菌免疫原性粘附活性
- 抗人SOCS1单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的制备高效价的抗人SOCS1单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS1融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力。结果筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blot显示在相对分子量为6.0×104处出现特异性反应带。杂交瘤细胞培养上清效价为1∶1280,腹水效价为1∶102400,Ig亚类为IgG1,相对亲和力达1.17×107L/mol。结论成功制备出能特异性识别人SOCS1的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS1在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础。
- 陈长春李婉宜康熙元姚锋邝玉丰锋
- 关键词：SOCS1单克隆抗体杂交瘤细胞
