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丙型肝炎病毒E2基因DNA免疫实验动物研究被引量：2: 2002年; 将编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白４１７～７５０位氨基酸的ＤＮＡ片段　克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ　３．１（－）中的ＣＭＶ　ＩＥ启动子下游，构建成ＨＣＶ　Ｅ２重组真核表达质粒　ｐｃＥ２。ＥＬＩＳＡ法检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫兔血清中的Ｅ２抗体变化和维持规律，结果显示免疫２０ｄ已有　抗体产生，３０ｄ后开始进入高峰，４０ｄ时达到最高值，至第９０ｄ抗体水平保持平稳，抗体滴度　达到１∶１６００左右。流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫鼠ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞变　化情况，与注射空载体ｐＣＤＮＡ３．１（－）的阴性鼠相比，ＣＤ４＋淋巴细胞水平略有上升，ＣＤ８＋　细胞水平有较大升高，增幅达３５．４６％。免疫组化检测结果显示注射ｐｃＥ２的小鼠组织中有明显　的阳性着色，而注射ｐｃＤＮＡ３．１（－）的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明：ｐｃＥ２　在实验动物内表达出的ＨＣＶ　Ｅ２蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答，尤其　是ＭＨＣ－１限制性杀伤性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平的提高对清除　病毒是十分有利的，因此ＨＣＶ　Ｅ２　ＤＮＡ免疫有可能成为预防和治疗ＨＣＶ感染的一条新途径。; 刘源洁叶林柏徐进平郜金荣冯磊孙明颢李江吴正辉; 关键词：丙型肝炎病毒 HCV DNA免疫 E2基因实验动物

丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究被引量：1: 2002年; 应用ＰＣＲ方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒ｐＢＡＣ２５　中扩增出全长的ＮＳ５Ａ基因ＤＮＡ片段（约１．３４ｋｂ），ＰＣＲ扩增ＮＳ５Ａ基因片段克隆到转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＡ中。重组转移质粒ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ５Ａ　ＤＮＡ与野生型杆状病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染ＳＦ－９昆虫细胞，通过空斑纯化获得带有ＮＳ５Ａ基因的重组病ＡｃＮＳ５Ａ。对重组病毒基因组ＤＮＡ进行　酶切和ＰＣＲ鉴定，证实ＨＣＶ　ＮＳ５Ａ基因已插入重组病毒基因组中。ＡｃＮＳ５Ａ感染ＳＦ－９细胞后，在　细胞中表达出一条６４ｋＤ的蛋白，用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析，结果表明这种蛋白与抗ＨＣＶ　ＨＳ５Ａ特　异性抗体发生强烈反应，说明ＮＳ５Ａ基因已在细胞中得到表达，应用免疫荧光技术与免疫组化　技术进一步研究ＮＳ５Ａ蛋白在昆虫细胞中不同时间的表达情况及其分布，结果表明，ＮＳ５Ａ蛋白　在ＡｃＮＳ５Ａ重组病毒感染细胞２４ｈ后主要分布在细胞质膜上，而在４８ｈ后则同时分布于细胞质膜　和细胞核内　，在７２ｈ则完全布满整个细胞，我们认为ＮＳ５Ａ蛋白定位于质膜和细胞核中，暗示着在病毒复　制过程中ＮＳ５Ａ蛋白可能参与病毒ＲＮＡ在质膜上复制和细胞基因表达的调?; 冯磊叶林柏阮华郜金荣徐进平刘源洁吴正辉; 关键词：HCV NS5A 免疫荧光免疫组化昆虫细胞丙肝病毒

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冯磊

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