刘任强
- 作品数：17 被引量：51H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家杰出青年科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 柔嫩艾美耳球虫组织蛋白酶B和L的生物学特性研究
- 组织蛋白酶B和组织蛋白酶L是半胱氨酸蛋白酶木瓜蛋白酶样家族的主要成员,在生物体普遍存在,并具有广泛的生物学功能。在寄生虫学领域,组织蛋白酶B和组织蛋白酶L已在复顶亚门多种原虫报道,并证明参与了虫体入侵、免疫逃避、移行、脱...
- 刘任强
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫表达谱酶动力学
- 融合域点突变的埃博拉病毒GP蛋白重组新城疫病毒的构建与免疫评价
- 2021年
- 扎伊尔型埃博拉病毒(EBOV)的感染会引起人类以严重出血和发热为主要症状的传染病,死亡率高达90%,对公共卫生构成严重威胁。EBOV囊膜蛋白(GP)是病毒主要的免疫原性蛋白。本团队前期的研究表明,以新城疫病毒(NDV)为载体构建表达EBOV GP蛋白的重组病毒rLa-EBOVGP改变了NDV的侵入方式。为了研制出安全性更高的埃博拉候选疫苗株,本研究将EBOV GP蛋白的融合域I532突变为R后插入NDV LaSota疫苗株(rLa)基因组中,通过反向遗传学操作拯救表达EBOV GP(I532R)蛋白的重组NDV,并将经PCR鉴定正确的重组病毒在鸡胚中连续传代检测了其的体外遗传稳定性。RT-PCR鉴定结果显示,EBOV突变的GP(I532R)蛋白基因正确插入了NDV基因组中,表明获得了重组病毒rLa-EBOVGP(I532R);在鸡胚中连续传20代后,经RT-PCR扩增EBOV GP(I532R)基因后经测序鉴定,结果显示rLa-EBOVGP(I532R)能够保持良好的遗传稳定性。利用蔗糖梯度超速离心法纯化rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)病毒,分别进行western blot检测。结果显示,EBOV GP和GP(I532R)蛋白均能够正确表达;将rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)分别感染BHK-21细胞后,利用激光共聚焦试验分析EBOV GP(I532R)的表达和定位,结果显示GP(I532R)能够表达且位于BHK-21细胞的细胞膜上;对纯化病毒利用免疫电镜观察病毒颗粒,结果可见rLa-EBOVGP(I532R)与亲本病毒rLa结构特征相似,且GP(I532R)蛋白能够嵌合在重组病毒粒子表面;生长动力学试验结果表明,rLa-EBOVGP(I532R)与亲本株rLa在鸡胚中的生长特性基本一致,且能够稳定增殖;分别将重组病毒rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)经肌肉注射和滴鼻两种途径免疫小鼠,经稀释血清固定病毒的方法分别检测各组小鼠针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。结果显示rLa-EBOVGP(I532R)能够诱导小鼠产生较高的针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。以上结果表明rLa-EBOVGP(I532R)具有作为防控EBOV感染的储备性�
- 张海琳王金良王翀温志远刘任强步志高葛金英
- 关键词：重组新城疫病毒
- 鸡的IL-2,IL-18,IL-12基因的克隆及表达
- 有研究证明IL-2,IL-18,IL-12都能够促使,Th0细胞分化向Th1分化,有助于提高鸡的细胞免疫应答能力。本研究根据GenBank上公布的鸡白介素-2,IL-18,IL-12的序列设计了特异性引物,通过RT-PC...
- 张蕾刘任强张静汪明
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫cathepsin B基因的克隆及原核表达研究
- 柔嫩艾美尔球虫是一种鸡的专性胞内寄生原虫,每年可对养禽业造成巨大的经济损失。通过对与其同属的其他顶复合门原虫的研究表明,寄生虫自身分泌的组织蛋白酶B对于该类寄生虫入侵相关蛋白的加工成熟及虫体完成入侵过程起到至关重要的作用...
- 刘任强蔡建平汪明
- 文献传递
- 埃博拉和马尔堡病毒囊膜糖蛋白嵌合型重组水泡性口炎病毒的构建及鉴定被引量：4
- 2016年
- 埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)属于丝状病毒科,能够导致人和动物发生致命的埃博拉出血热和马尔堡出血热,这两种病是重要的尚未传入我国的烈性人兽共患病。为研制安全有效的储备疫苗,本研究利用水泡性口炎病毒(VSV)反向遗传操作技术,将VSV自身糖蛋白(GP)分别替换为EBOV或MARV的GP,构建了表达扎伊尔型EBOV、苏丹型EBOV及MARV GP的嵌合VSV重组病毒r VSV△G/ZEBOVGP、r VSV△G/SEBOVGP及r VSV△G/MARVGP。Western blot和间接免疫荧光试验表明这3种GP蛋白在重组病毒感染的细胞中均能够正确表达。电镜观察结果显示,3种重组病毒均与亲本病毒具有相同形态特征,表明这3种外源GP蛋白均能够嵌合在重组病毒粒子表面。本研究构建的这3种重组病毒为进一步的动物免疫试验并评价其免疫效果奠定了基础。
- 邵钰王金良刘任强张会雷王喜军葛金英温志远步志高
- 关键词：埃博拉病毒马尔堡病毒囊膜糖蛋白水泡性口炎病毒
- 莱斯顿型埃博拉病毒GP蛋白嵌合型水泡性口炎病毒的构建与免疫原性研究被引量：2
- 2016年
- 莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV GP蛋白嵌合型VSV(r VSV△G*GFP-REBOV-GP),并对其生物学特性进行分析,评估其作为REBOV活疫苗的安全性和有效性。激光共聚焦和western blot试验显示REBOV GP蛋白在嵌合病毒中获得正确表达;病毒生长动力学结果显示,r VSV△G*GFP-REBOV-GP与亲本株具有不同的生长特性;将r VSV△G*GFP-REBOV-GP接种小鼠,未引起小鼠发病,体重增长趋势与对照组一致,表明嵌合病毒具有良好的安全性;中和试验结果表明该嵌合病毒能够诱导小鼠产生针对REBOV GP的高滴度中和抗体。本研究制备的r VSV△G*GFP-REBOV-GP为进一步的动物免疫实验奠定了基础。
- 祖述龙宋继军邵钰刘任强温志远周微微王雪莲葛金英步志高
- 关键词：水泡性口炎病毒
- 柔嫩艾美尔球虫C1类半胱氨酸类蛋白酶功能研究
- 目的：本研究旨从柔嫩艾美尔球虫(Eimer tenella)中克隆C1类半胱氨酸类蛋白酶基因，为进一步研究他们的基因表达和基因功能奠定基础。方法：选用柔嫩艾美耳球虫houghton株，利用RT-PCR的方法克隆基因的cD...
- 刘任强蔡建平汪明
- 关键词：致病机制半胱氨酸蛋白酶基因功能
- 柔嫩艾美耳球虫感染鸡的盲肠上皮间淋巴细胞表达白介素17的动态变化被引量：3
- 2012年
- 以1×104个柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊感染10日龄AA肉鸡,于感染后第24、48及72小时分离鸡盲肠上皮间淋巴细胞(IELs)。提取鸡盲肠IELs总RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-17的表达动态;然后用FITC标记的抗鸡CD4单抗和PE标记的抗小鼠IL-17单抗作为抗体对盲肠IELs进行荧光抗体染色,再进行流式细胞术分析,检测了表达IL-17的CD4+盲肠IELs在柔嫩艾美耳球虫感染后的动态变化。实时荧光定量PCR结果表明,鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后能够显著上调IL-17mR-NA的表达水平,流式细胞分析结果表明,在球虫感染后表达IL-17的CD4+细胞数量显著上升。这些结果表明,IL-17参与了宿主抵抗球虫感染的反应。
- 张蕾马立平刘任强汪明
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫白介素17
- 柔嫩艾美耳球虫Cathepsin B基因的克隆表达及活性研究被引量：2
- 2015年
- 旨在利用同源克隆法从柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)中克隆组织蛋白酶B基因(Etcat B),为进一步研究其基因表达和基因功能奠定基础。选用未孢子化的柔嫩艾美耳球虫Houghton株,通过对已公布的柔嫩艾美尔球虫序列进行分析,利用RT-PCR的方法克隆EtcatB基因的cDNA序列,并将其重组于transE1原核表达载体中,鉴定后,重组质粒转入大肠杆菌Rosetta进行诱导表达。利用纯化所得Etcat B蛋白制备兔抗多抗,同时利用明胶酶谱法初步验证其活性。利用Real-time PCR和Western blot的方法检测Etcat B在球虫发育不同阶段和孢子化不同阶段的表达水平。成功克隆得到一个长度为1 539bp的Etcat B基因,并重组表达了球虫的组织蛋白酶B。SDS-PAGE电泳结果显示,在1mmol·L-1 IPTG 37℃诱导4h下,主要以包涵体的形式表达;4℃过夜诱导可以使之转为可溶性表达。表达产物在低pH、有还原剂存在的环境中,可以降解明胶,初步证明重组表达的酶具有一定的活性,Etcat B在配子体和裂子体时期表达较高,未孢子化和子孢子阶段表达相对较低,孢子化过程中表达逐步增加。Etcat B基因的克隆和表达研究,为进一步探究该基因在鸡球虫入侵及其他生物学功能中所起的作用提供了理论基础。
- 刘任强蔡建平汪明
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫组织蛋白酶B克隆
- 柔嫩艾美尔球虫cathepsin L基因的克隆及原核表达
- 究主要目的是研究柔嫩艾美尔球虫组织蛋白酶L的基因和蛋白结构,揭示其原核表达规律.选用未孢子化的柔嫩艾美尔球虫houghton株,通过与弓形虫的cathepsinL进行BLASTP找到其保守结构域,利用RT-PCR和RAC...
- 刘任强刘爱军蔡建平汪明
- 关键词：兽医学柔嫩艾美尔球虫基因克隆原核表达
