刘龙飞
- 作品数：7 被引量：6H指数：1
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- 重组猪蛔虫抗菌肽cecropin P1在毕赤酵母中的表达及抑菌活性
- ＜正＞为在毕赤酵母中表达重组猪蛔虫抗菌肽cecropin P1,根据已发表的基因编码序列设计引物,采用RT-PCR方法从猪肠道蛔虫中扩增出cecropin P1基因,并将其插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信...
- 李巍仲飞李秀锦张峰刘龙飞王幸兴潘素敏韩冬梅
- 文献传递
- 猪肠激酶催化亚基基因的克隆及其在毕赤酵母和大肠杆菌中的表达
- 肠激酶(Enterokinause,EK)是哺乳动物十二指肠上皮产生的一种异源二聚体丝氨酸蛋白酶,由1条重链和1条轻链组成,酶的催化活性部位于轻链上。EK是蛋白酶类中专一性较高的一种酶,它能够专一性识别蛋白质分子中由连续...
- 刘龙飞
- 关键词：基因克隆融合蛋白蛋白表达
- 狐狸生长激素基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 为制备重组狐狸生长激素(fGH),采用RT-PCR方法,从银狐垂体中扩增fGHcDNA基因,利用SnaBI和NotI位点将fGH基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽的下游,构建成fGH基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/fGH,载体经SalI酶切线性化后,通过电转移将线性化的pPIC9K/fGH转化到组氨酸缺陷型酵母宿主菌GS115中。然后利用不含氨基酸的以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选出高拷贝fGH基因的重组酵母,经摇瓶发酵培养和甲醇诱导使fGH进行分泌表达。结果表明本实验扩增的fGH基因序列与GenBank发表的序列基本一致,发酵液经SDS-PAGE和Western blotting检测证明构建的重组酵母能够分泌表达fGH,表达的fGH占发酵液总蛋白的34%,表达量达119mg/L发酵液。
- 李巍李秀锦仲飞靳慧君解民刘玉芝刘龙飞苏清洁
- 关键词：CDNA毕赤酵母分泌表达
- 重组猪β防御素-2在大肠杆菌中的融合表达及抑菌活性分析
- 2012年
- 猪β防御素-2(porcine beta-defensin-2,pBD-2)是猪体内重要的天然抗菌肽,具有广谱抗菌活性,在动物抗菌饲料添加剂中有潜在的应用前景。为在原核表达系统中制备重组猪β防御素-2,我们首先利用Trizol试剂从猪血白细胞中提取总RNA,然后通过RT-PCR的方法,扩增得到pBD-2基因,并通过EcoRI和NotI酶切位点将其插入到原核表达载体pET-32a(+)上。
- 张峰仲飞李秀锦李巍刘龙飞李凌李楠
- 关键词：Β防御素DEFENSIN活性分析ECORI广谱抗菌活性
- 猪肠激酶催化亚基基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
- 2011年
- 依据GenBank猪肠激酶催化亚基(EKL)基因的编码序列设计引物,通过RT-PCR方法从猪小肠黏膜组织中扩增EKL cDNA基因,利用SnaBⅠ和NotⅠ酶切位点,将该EKL片段插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K质粒中,并与载体中的α因子信号肽序列融合,构建EKL基因分泌型酵母重组质粒载体pPIC9K/EKL。重组质粒载体经SalⅠ线性化后,以电转化的方法将其转移到组氨酸缺陷型的酵母宿主菌GS115中。然后利用以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选获得高拷贝猪EKL基因的重组酵母。经PCR检测证明EKL基因已整合到毕赤酵母的染色体中。重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE及酶促活性检测,结果显示在酵母菌培养基中检测到相对分子质量为35 000的重组蛋白。经过对制备的胰蛋白酶原进行酶促水解检测,证明该重组蛋白具有激活胰蛋白酶原的活性,表明制备的重组猪EKL具有生物活性。
- 刘龙飞李秀锦仲飞李巍潘素敏张峰潘宏丽芦山
- 关键词：基因克隆毕赤酵母分泌表达
- 重组猪蛔虫抗菌肽cecropin P1在毕赤酵母中的表达及抑菌活性被引量：4
- 2011年
- 根据已发表的蛔虫抗菌肽cecropin P1基因编码序列设计引物,采用RT-PCR方法从猪肠道蛔虫中扩增出cecropin P1基因,并将其插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽下游的SnaBⅠ和NotⅠ位点之间,构建成cecropin P1基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/cecropin P1。载体经SalⅠ酶切线性化,电转化到组氨酸缺陷型的酵母宿主菌GS115中,然后利用以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选得到高拷贝cecropin P1基因的重组酵母。经PCR检测证明cecropin P1基因已整合到毕赤酵母的染色体中。重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,通过Tricine-SDS-PAGE检测,重组酵母能够分泌表达重组cecropin P1,同时表达的cecropin P1对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。
- 李巍仲飞李秀锦张峰刘龙飞王淼李凌王幸兴韩冬梅潘素敏
- 关键词：猪蛔虫抗菌肽CECROPINP1毕赤酵母抑菌活性
- 猪肠激酶催化亚基基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
- ＜正＞为制备重组猪肠激酶催化亚基（EKL）,依据GenBank猪EKL基因的编码序列,通过RT-PCR方法从猪小肠粘膜组织中扩增EKL cDNA基因,利用SnaBⅠ和NotⅠ酶切位点,将该EKL片段插入到酵母分泌型表达载...
- 刘龙飞李秀锦仲飞李巍张峰芦山
- 文献传递
