单黎然
- 作品数：6 被引量：40H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学农业科学更多>>
- 人SUMO1基因的真核表达载体构建及其RNA干扰靶点筛选
- 2010年
- [目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点。[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中。寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体。用WesternBlot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果。[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确。针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在WesternBlot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达。[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础。
- 吴勇延肖亮单黎然宋振郭泽坤
- 关键词：RNA干涉
- 转录因子Sox2 SUMO修饰位点突变体的构建及真核表达
- 2009年
- 目的:构建Sox2及突变体Sox2 K247R的真核表达载体,并在293FT细胞中表达。方法:以含有Sox2基因全长的馈赠质粒为模板,用循环延伸PCR法得到该基因的突变体Sox2 K247R,并将野生型及突变型基因定向亚克隆到真核表达载体pCMV-HA上。得到的重组质粒经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定。其后用脂质体包埋法将pCMV-HA-Sox2及pCMV-HA-Sox2 K247R分别单独转染或与pCMV-Myc-SUMO1共转染293FT细胞。采用Western blot分析蛋白表达情况及SUMO修饰情况。结果:经酶切和DNA序列测定,重组子序列正确,突变体第247位密码子由AAG转变为CGG。West-ern blot结果显示野生型及突变型的Sox2都在细胞内得到了很好的表达,SUMO修饰位点突变后,Sox2不能与SUMO蛋白结合。结论:Sox2野生型及突变型真核表达载体构建成功,在蛋白水平体现了SUMO修饰的差异性。
- 郭泽坤吴先强单黎然宋振
- 关键词：SOX2SUMO亚克隆定点突变真核表达
- 泛素样小蛋白4(SUMO4)的克隆、原核表达、纯化及鉴定被引量：10
- 2008年
- 【目的】为人类泛素样小蛋白4(SUMO4)多克隆抗体制备和疾病研究奠定基础。【方法】根据Gen-Bank提供的核酸序列,设计7条单链DNA,采用重叠延伸PCR方法,合成SUMO4基因编码区。基因片段经限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pGEX-4T-1中。酶切、测序鉴定后,将重组子转染BL21 RIL菌株,表达及纯化融合蛋白。用SDS-PAGE和Western blot检测纯化效果,鉴定表达产物。【结果】成功合成了长度约为280 bp的SUMO4基因,经双酶切鉴定,SUMO4原核表达载体构建成功,插入片段测序正确。GST-SUMO4融合蛋白在终浓度1mmol/L IPTG、28℃诱导5 h后产量达到高峰,SDS-PAGE证实表达产物以可溶形式存在,分子量约为37 ku,GST亲和层析的纯化效果良好,Western blot验证融合蛋白分子量与预期值相符。【结论】SUMO4蛋白在大肠杆菌中高效表达,并以可溶性蛋白形式存在。
- 单黎然杨振安宁宋振郭泽坤
- 关键词：重叠延伸PCR原核表达蛋白纯化
- 大豆副产物中生物活性物质的生理保健功能被引量：2
- 2006年
- 本文对大豆副产物中的大豆多肽、大豆低聚糖、大豆异黄酮、大豆皂甙,大豆膳食纤维等活性成分与生理功能作了较系统地阐述。
- 贾建光单黎然张蓉
- 关键词：生物活性物质生理保健功能
- 基于双启动子载体的SUMO1 RNA干涉实验
- 泛素样小蛋白（small ubiquitin-like modifier,SUMO）是近年来发现的一种翻译后修饰体,与泛素有类似的结构和修饰过程。SUMO修饰又称SUMO化,它不像泛素化介导蛋白降解,而是发挥着从影响亚细...
- 单黎然
- 关键词：RNA干涉
- 文献传递
- 4种重要功能性低聚糖的研究进展被引量：28
- 2006年
- 对低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、低聚果糖和低聚木糖4种功能性低聚糖的化学组成、分布及生理功效进行了阐述,并分析了功能性低聚糖研究中存在的问题,最后对其应用前景作了展望。
- 单黎然龚月桦贾建光罗瑛婕
- 关键词：功能性低聚糖低聚异麦芽糖大豆低聚糖低聚果糖低聚木糖理化特性
