向卫军
- 作品数：17 被引量：50H指数：5
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖南省科技重大专项国家自然科学基金湖南省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病RT-PCR快速鉴别诊断方法的建立与临床应用被引量：18
- 2008年
- 根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因的缺失信息,设计了3条特异性引物,以含高致病性PRRSVNsp2基因的质粒pMDNSP2及普通PRRSVVR2332株RNA为模板,建立了快速诊断高致病性PRRSVRT-PCR方法。通过对临床组织病料的总RNA进行不同稀释倍数检测,结果表明该方法能从0.265pg的总RNA中检测到PRRSV的基因,说明敏感性高。用该方法对猪瘟病毒(CSFV)、Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、伪狂犬病病毒(PRV)、链球菌(Streptococcus)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)和大肠杆菌(Escherichiacoli)同条件检测,结果都为阴性。进一步对36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料细胞培养物、2株PRRSV商品活疫苗以及52个猪场所送检的184份临床样品进行了检测应用,结果36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料的细胞培养物有5份样品为阳性且都为高致病性PRRSV,2株PRRSV商品活疫苗为普通PRRSV,52个猪场中有42个猪场(123份样品)呈阳性,其中只有1份为普通PRRSV。实验表明该方法能够准确地鉴别诊断高致病性PRRSV和普通PRRSV,且具有快速、敏感和特异的特点,具有临床实用性。
- 刘忠华余兴龙李润成黄泽彬廖立珊白霞李晶向卫军汪镇南丁建
- O型口蹄疫病毒VP1基因与大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因的融合表达及表达产物的免疫原性分析被引量：1
- 2009年
- 以质粒pMDTLT为模板、用PCR的方法扩增出LTB基因,然后将其插入到pETVP1质粒中VP1基因的上游,构建了含有融合基因LTBVP1的表达质粒pETLTBVP1。转化宿主菌BL21(DE3)LysS后进行诱导表达,诱导菌经SDS-PAGE显示重组蛋白以包涵体的形式表达,分子量约为39kD;Western blotting分析表明,重组蛋白能与FMDV阳性血清及兔抗霍乱毒素(CT)血清反应,说明融合蛋白保持了LTB和VP1各自的免疫学活性。小鼠免疫实验表明:该融合蛋白通过腹腔接种小鼠能诱导产生较强的免疫应答反应,免疫鼠产生的血清抗体水平高于试验中商品口蹄疫疫苗免疫组。
- 李润成余兴龙白霞向卫军葛猛黎满香
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因LTB基因抗体效价
- 湖南地区Ⅰ型乙型脑炎病毒的分离鉴定及E基因序列分析被引量：1
- 2017年
- 为探寻湖南汨罗地区猪场蚊子携带乙型脑炎病毒(JEV)的情况,对该地区3个猪场蚊子开展JEV的病原学调查研究。从该地区3个种猪场采集约3 900只蚊子,用RT–PCR方法扩增JEV NS5基因,结果从40份样品中检出17份样品呈阳性。将阳性样品研磨液接种BHK–21细胞分离病毒,经3次传代后获得了1株JEV,将新分离株命名为HNML1株。根据JEV的E基因序列设计1对引物,用RT–PCR方法扩增HNML1株的E基因,并进行序列测定和同源性分析,结果表明,该E基因的核苷酸序列与减毒活疫苗株SA14–14–2相应序列的同源性为86.9%;该E基因的氨基酸序列与减毒活疫苗株SA14–14–2相应序列的同源性为97.0%,二者存在15个氨基酸的差异(其中包括8个与关键毒力相关的氨基酸)。基因同源性分析结果表明,HNML1株为基因Ⅰ型JEV毒株。
- 向卫军杨涛涛李润成余兴龙
- 关键词：猪场蚊子乙型脑炎病毒
- 猪圆环病毒2型ORF2基因的改造及在大肠杆菌中的高效可溶性表达
- PCV2-ORF2为702或705bp，编码病毒的衣壳蛋白(Cap)，与PCV2的复制以及抗原性密切相关，是进行PCV2疫苗研究以及免疫活性研究的首选。最初衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中成功表达并用于检测PCV2特异性抗体...
- 葛猛余兴龙李润成罗维李微李晶王亚向卫军
- 关键词：ORF2基因大肠杆菌可溶性表达基因改造
- 文献传递
- 猪硫氧还蛋白与IFN-α融合表达及其抗猪圆环病毒2活性
- 猪圆环病毒2(PCV2)在养猪业生产中的危害较大,是影响养猪业健康发展最重要的一类疾病。干扰素(Interferon,IFN)是一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤和增强免疫作用的细胞因子。一般情况下,在许多的IFNα研究过程中,...
- 向卫军
- 关键词：IFNIFNΑPCV2可溶性表达
- 文献传递
- 三种亚群PCV-2感染性克隆的构建及体内外感染性试验
- 本研究通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)三个亚群(1A、1B和1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8、P0、P4-1,将重组质粒...
- 李薇李晶余兴龙罗维白霞李润成黎满香葛猛王亚向卫军
- 关键词：感染性克隆PCR扩增
- 文献传递
- O型口蹄疫病毒代表性抗原VP1基因的人工合成与表达及其免疫原性检测被引量：4
- 2008年
- 通过对GenBank近10年内收录的O型口蹄疫(FMD)病毒VP1基因序列的同源性比较分析,并根据中国、老挝、缅甸等国家FMDV流行毒株的基因序列,设计并合成了有群内抗原代表性的结构蛋白VP1全基因序列.将合成的序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建了VP1的表达质粒pETVP1.SDS-PAGE和Western-blot分析表明,该质粒的BL21(DE3)LysS转化菌在IPTG诱导下可特异性表达VP1蛋白,该重组蛋白以包涵体的形式存在,相对分子质量约30 000,能与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生特异性反应.动物接种试验表明,重组蛋白能诱导小白鼠产生特异性抗FMDV抗体.
- 李润成余兴龙白霞侯强红罗维刘忠华向卫军
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因免疫原性
- BHK-21单细胞克隆敏感株筛选及日本脑炎病毒分离被引量：1
- 2017年
- 为筛选出日本脑炎病毒(JEV)敏感度高的BHK-21细胞株,采用终点稀释法从母代BHK-21混合细胞中分离单细胞克隆株,应用接种BHK-21克隆株方法,从JEV阳性蚊子样品研磨液中分离病毒,筛选出的3号单细胞克隆株经3次传代后细胞产生明显病变,分离到1株JEV,5号单克隆株培养物核酸检测呈阳性,但是不产生细胞病变,母代混合细胞没有病变,JEV核酸检测阴性。根据1、3型JEV的prM与E基因设计4对引物初步鉴定分离株基因型,鉴定分离株为1型JEV。综合以上结果,构建的BHK-21单细胞克隆株比BHK-21混合细胞对分离JEV株敏感,更适合JEV的分离与培养。
- 向卫军杨涛涛李润成余兴龙
- 关键词：病毒分离鉴定
- 猪巨细胞病毒gB蛋白抗原表位富集区的表达和抗原性的分析被引量：5
- 2010年
- 为表达猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因,本研究根据GenBank登录的PCMV gB基因序列设计1对引物,以感染PCMV猪肺细胞总DNA为模板,采用PCR扩增得到gB基因片段,克隆于pMD-18T并进行核苷酸序列测定。利用DNAStar分析gB蛋白的抗原表位,选择抗原表位富集的2个基因片段(命名为PCMVgB1和PCMVgB2)分别克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒并转化Rosetta(DE3)宿主菌。结果显示:扩增的gB基因与GenBank登录的PCMV gB基因的核苷酸同源性在97.6%～98.9%之间,推导的氨基酸同源性在97%～98.6%之间。经IPTG诱导的含pET-gB1和pET-gB2重组质粒的宿主菌可表达重组gB1和gB2蛋白,SDS-PAGE显示分子量约为62ku和36ku。Western blot和间接ELISA结果表明,重组gB1和gB2蛋白均具有反应原性。
- 李晶余兴龙李润成黄泽彬葛猛向卫军李薇王亚
- 关键词：GB基因间接ELISA
- 猪巨细胞病毒的PCR检测及其gB基因特征分析被引量：9
- 2009年
- 根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全长gB基因,并将其克隆到pMD18-T载体,核苷酸序列测定和结果分析表明,所获得PCMVgB基因序列全长2580bp,编码860个氨基酸,与国外PCMV分离株的核苷酸同源性为97.6%～98.9%,氨基酸同源性为97.0%～98.6%,且PCMV可分为2个群:一群为中国湖南株、英国株和德国株,命名为A群;另一群为日本株、瑞士株和西班牙株,命名为B群.抗原表位优势、亲水性、表面可及性预测分析表明,PCMVgB蛋白是理想的免疫学抗原候选蛋白.
- 李晶余兴龙李润成罗维向卫军李薇王亚葛猛
- 关键词：PCRGB基因
