您的位置: 专家智库 > >

姜佩佳

作品数:4 被引量:1H指数:1
供职机构:中国医科大学基础医学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金辽宁省自然科学基金更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 2篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 3篇蛋白
  • 2篇荧光
  • 2篇荧光蛋白
  • 2篇原核表达
  • 2篇质粒
  • 2篇胃癌
  • 2篇细胞
  • 2篇绿色荧光
  • 2篇绿色荧光蛋白
  • 1篇蛋白载体
  • 1篇增强子
  • 1篇增强子结合蛋...
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇融合蛋白
  • 1篇重组质粒
  • 1篇转染
  • 1篇胃癌SGC-...
  • 1篇胃癌细胞
  • 1篇结合蛋白

机构

  • 4篇中国医科大学

作者

  • 4篇陈薇
  • 4篇姜佩佳
  • 4篇王孝会
  • 4篇王桂玲
  • 1篇周颖

传媒

  • 1篇世界华人消化...
  • 1篇中国医科大学...
  • 1篇解剖科学进展
  • 1篇医学分子生物...

年份

  • 4篇2011
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
人pEGFP-PKARIIβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达
2011年
目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RIIβ(PKARIIβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARIIβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARIIβ编码序列,用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后,亚克隆至含有GFP标签的融合表达载体pEGFP-C1中.测序正确后,将重组质粒转染到胃癌细胞BGC-823中,提取细胞蛋白进行Westernbolt检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-PKARIIβ在人胃癌细胞BGC-823内的定位.结果:将人全长PKARIIβ编码序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1.2kb,在预期的位置产生条带.Western blot检测到了融合蛋白正确表达,分子量约为72000Da.并观察到GFP-PKARIIβ在HEK293和BGC-823细胞内都有表达,且定位以细胞质为主,在细胞核内少量表达.结论:成功构建了人全长PKARIIβ编码序列的pEGFP-PKARIIβ真核表达载体,证实GFP-PKARIIβ蛋白在BGC-823细胞质内特异表达,为进一步研究PKARIIβ的在胃癌中的功能提供了重要的实验材料.
王桂玲姜佩佳王孝会陈薇
关键词:真核表达绿色荧光蛋白基因转染胃癌细胞
C/EBPα不同截短功能域GST融合蛋白表达载体的构建及表达的研究
2011年
目的构建GST-C/EBPα融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-C/EBPα为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和SDS-PAGE鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并用SDS-PAGE方法证实了GST-C/EBPα全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了C/EBPα原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化C/EBPα蛋白和研究C/EBPα的生物学功能奠定了基础。
王桂玲陈薇姜佩佳王孝会
关键词:质粒原核表达
组蛋白脱乙酰化酶GST-HDAC1融合蛋白载体的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量:1
2011年
目的构建GST-HDAC1融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-HDAC1为模板进行PCR,通过EcoR1单酶切位点将HDAC1插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-HDAC1,并转化E.coli DH5α,通过利用载体上的BamH1酶切位点和HDAC1上Nde1酶切位点来筛选阳性重组子,DNA序列测定正确后,转入化E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定。结果酶切后获得940bp片段为正向;如获得500bp片段为反向。重组质粒测序后与GenBank进行同源性比对证明导入片段为HDAC1,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-HDAC1,并用SDS-PAGE方法证实了GST-HDAC1融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结论成功构建了HDAC1原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化HDAC1蛋白及与其它蛋白的关系奠定了基础。
王桂玲陈薇王孝会姜佩佳
关键词:原核表达
胃癌SGC-7901细胞中人RIPX—GFP融合蛋白载体构建及表达定位
2011年
目的构建真核表达载体pEGFP—RIPX,并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位,并检测外源性RIPX的表达。方法以pBluescriptR—RIPX为模板,采用PCR法进行人RIPX编码序列(CDS)的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP—C1中。将pEGFP—RIPX质粒瞬时转染到胃癌SGC-7901细胞中,用Western印迹方法检测GFP—RIPX融合蛋白的表达;用激光扫描共聚焦显微镜观察RIPX的定位。结果人的RIPX编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP—C1中;证实了GFP—RIPX融合蛋白的表达;转染pEGFP.RIPX后,在胃癌SGC-7901细胞胞质内可见明亮的绿色荧光。结论成功地构建了pEGFP-RIPX载体,鉴定了外源性RIPX的表达;同时证实在胃癌SGC-7901细胞中RIPX主要定位于细胞质,为进一步研究RIPX的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础。
王桂玲王孝会周颖陈薇姜佩佳
关键词:绿色荧光蛋白胃癌SGC-7901细胞
共1页<1>
聚类工具0