孙石静
- 作品数：10 被引量：20H指数：4
- 供职机构：清华大学深圳研究生院更多>>
- 发文基金：江苏省科技厅基金江苏省高技术研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程经济管理更多>>
- 用于转基因海带的通用载体及其在瑞替普酶表达中的应用
- 本发明属于基因工程技术领域，创建一种用于海带转基因的通用表达载体，构建一种用于在海带中表达具有生物活性的蛋白质、多肽的通用表达载体，及其在实现目的基因在海带中活性表达的应用，尤其是在海带中表达瑞替普酶的应用。该载体具有通...
- 沈子龙廖建民孙石静张新元秦松
- 文献传递
- 硫氧还蛋白-(His)_ 6 融合的瑞替普酶的表达、纯化和活性检测(英文)被引量：5
- 2004年
- 目的 :构建硫氧还蛋白 (His) 6 瑞替普酶融合表达载体 ,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量 ,简化rPA的分离纯化。方法 :将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白 (组氨酸 ) 6标签下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中用乳糖进行诱导表达。采用一步稀释法对融合蛋白体外复性后 ,使用Ni2 + 亲和层析柱 ,对包涵体复性液进行初步纯化。采用体外溶圈法对复性后和纯化后的融合蛋白进行生物活性的测定。结果 :得到分子量约为 5 6kDa的融合蛋白 ,表达量达到总蛋白的 30 %以上。比本实验室构建的非融合表达载体表达量提高了约 5 0 %。经过一步Ni2 + 亲和层析 ,融合蛋白纯度达到80 %以上。体外溶圈法实验表明融合蛋白复性后和纯化后具有溶栓活性。结论 :与非融合表达相比 ,融合表达的表达量明显提高。即使N端额外融合一段融合多肽 ,rPA仍然具有生物学活性。
- 张新元廖建民孙石静沈子龙
- 关键词：硫氧还蛋白瑞替普酶纯化活性
- 瑞替普酶(reteplase)在海带中表达的鉴定分析被引量：4
- 2006年
- 为验证本实验室构建的瑞替普酶(reteplase,r-PA)基因是否成功转入海带,本文通过FAPA、PCR、Southern blotting和Western blotting等方法分别从体外纤溶活性、DNA的整合以及目的蛋白的表达等三个方面进行鉴定,并运用固定化金属离子亲和层析对表达的蛋白进行了初步分离纯化。FAPA结果表明转基因海带蛋白具有溶栓活性,PCR和Southern Blotting显示在1 100 bp处有特异性条带,Western blotting在39 ku处有蛋白条带,证明r-PA基因已成功转入海带而且获得稳定表达,海带中表达的r-PA不需复性就具有溶栓活性,同时说明在r-PA N端设计的(His)6有助于我们利用亲和层析分离纯化目的蛋白。
- 孙雄华廖建民孙石静张新元徐寒梅沈子龙
- 关键词：海带瑞替普酶
- 组织型纤溶酶原激活剂突变体的复性分离纯化方法
- 本发明属于医药生物技术重组蛋白分离纯化技术领域，公开了一种用低廉、普通级别的常用试剂咪唑和尿素，以它们的浓度梯度在合适的条件下，使在大肠杆菌中与(His)<Sub>6</Sub>融合表达的组织型纤溶酶原激活剂瑞替普酶正确...
- 沈子龙廖建民孙石静张新元
- 文献传递
- 组织型纤溶酶原激活剂突变体的复性分离纯化方法
- 本发明属于医药生物技术重组蛋白分离纯化技术领域，公开了一种用低廉、普通级别的常用试剂咪唑和尿素，以它们的浓度梯度在合适的条件下，使在大肠杆菌中与(His)<Sub>6</Sub>融合表达的组织型纤溶酶原激活剂瑞替普酶正确...
- 沈子龙廖建民孙石静张新元
- 文献传递
- 人重组t-PA突变体与β2糖蛋白Ⅰ的相互作用被引量：4
- 2007年
- 利用重组DNA技术和原核表达,得到了人体组织型纤溶酶原激活剂t-PA的缺失型突变体r-PA和Kringle2功能区,并在变性条件下通过金属螯合层析纯化得到纯度较高的r-PA和Kringle2重组蛋白.用纤维蛋白活性平板检测到复性的r-PA和Kringle2都具有体外纤溶活性,并且β2糖蛋白Ⅰ(β2-glycoprotein Ⅰ,β2GPⅠ)对r-PA的体外纤溶活性有显著的促进作用:在β2GPⅠ浓度为1μmol/L和4μmol/L时,r-PA的纤溶活性分别提高1.8和2.1倍.ELISA方法检测发现,β2GPⅠ与r-PA,Kringle2均有特异性结合,并且随着β2GPⅠ浓度的增加,它与包被在酶标板上的重组蛋白r-PA和Kringle2的结合都有趋于饱和的趋势,但其饱和浓度却均远高于β2GPⅠ与t-PA结合的饱和浓度.
- 张春娥孙石静蔡国平
- 关键词：T-PA纤溶活性ELISA
- 近年来世界饲料生产状况回顾
- 2003年
- 近年来，全世界饲料总产量呈稳步增长趋势，尤其是２００２ 年和１９９７ 年均达到了历史最高水平。探讨饲料市场的发展趋势，分析其增长原因以及影响因素，对于我国饲料业发展很有益处，为此，本文的内容值得参考。
- 孙石静刘玉良
- 关键词：饲料生产饲料原料欧盟地区
- r-PA真核表达载体的构建与鉴定被引量：6
- 2005年
- 用SV40和CaMV35S两种启动子分别启动瑞替普酶(reteplase,rPA)和标记基因bar基因,构建能在海带中表达外源基因的重组表达载体。通过PCR方法扩增CaMV35S启动子、bar基因和rPA基因,将扩增的3个片段分别克隆到pGEMTEasyVector上。将CaMV片段亚克隆到pCAT3control载体上得到重组质粒pCAT/CaMV;再将bar基因切下插入到CAT/CaMV上得到重组质粒pCAT/CB,最后将rPA基因片段切下后插入到pCAT/CB上获得重组质粒pSVrPA/CB。PCR、酶切及测序结果均表明已成功扩增出CaMV35S、rPA和bar基因片段,并已顺次正确插入到真核表达载体PCAT3control上,最终成功构建了能在海带中表达rPA的真核表达载体,用基因枪法转入海带中表达,FAPA法测定得到有体外纤溶活性的阳性海带,为后续研究工作打下坚实的基础。
- 孙石静张新元孙雄华廖建民沈子龙
- 关键词：瑞替普酶真核表达载体海带
- 瑞替普酶融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其复性被引量：5
- 2005年
- 目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率。方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响。运用金属螯合层析对融合蛋白进行纯化和复性。结果与结论:LB培养基pH值为6,Amp浓度为100μg/mL,乳糖浓度为5 mmol/L的条件下39℃诱导4 h可获得高效表达的r-PA融合蛋白,其表达量占全菌蛋白的70%,其产物主要以包涵体形式存在。融合蛋白运用金属螯合层析一步纯化复性,其复性率可达10%,比活为55.7 U/μL。
- 孙石静张新元孙雄华廖建民沈子龙
- 关键词：瑞替普酶融合蛋白复性
- 一种在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法
- 本发明公开了一种在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法。本发明所提供的在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法是将瑞替普酶基因插入到原核表达载体的多克隆位点，得到重组表达载体，再将该重组表达载体与质粒pREP4共转化大肠杆菌，得到重组大肠...
- 孙石静张春娥蔡国平
- 文献传递
