张新元
- 作品数：11 被引量：29H指数：4
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省科技厅基金江苏省高技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 瑞替普酶(reteplase)在海带中表达的鉴定分析被引量：4
- 2006年
- 为验证本实验室构建的瑞替普酶(reteplase,r-PA)基因是否成功转入海带,本文通过FAPA、PCR、Southern blotting和Western blotting等方法分别从体外纤溶活性、DNA的整合以及目的蛋白的表达等三个方面进行鉴定,并运用固定化金属离子亲和层析对表达的蛋白进行了初步分离纯化。FAPA结果表明转基因海带蛋白具有溶栓活性,PCR和Southern Blotting显示在1 100 bp处有特异性条带,Western blotting在39 ku处有蛋白条带,证明r-PA基因已成功转入海带而且获得稳定表达,海带中表达的r-PA不需复性就具有溶栓活性,同时说明在r-PA N端设计的(His)6有助于我们利用亲和层析分离纯化目的蛋白。
- 孙雄华廖建民孙石静张新元徐寒梅沈子龙
- 关键词：海带瑞替普酶
- 组织型纤溶酶原激活剂突变体的复性分离纯化方法
- 本发明属于医药生物技术重组蛋白分离纯化技术领域，公开了一种用低廉、普通级别的常用试剂咪唑和尿素，以它们的浓度梯度在合适的条件下，使在大肠杆菌中与(His)<Sub>6</Sub>融合表达的组织型纤溶酶原激活剂瑞替普酶正确...
- 沈子龙廖建民孙石静张新元
- 文献传递
- 用于转基因海带的通用载体及其在瑞替普酶表达中的应用
- 本发明属于基因工程技术领域，创建一种用于海带转基因的通用表达载体，构建一种用于在海带中表达具有生物活性的蛋白质、多肽的通用表达载体，及其在实现目的基因在海带中活性表达的应用，尤其是在海带中表达瑞替普酶的应用。该载体具有通...
- 沈子龙廖建民孙石静张新元秦松
- 文献传递
- 生长抑素DNA疫苗在COS细胞中的瞬时表达被引量：6
- 2002年
- 构建了生长抑素DNA疫苗质粒 pCHSS(pCDNA/HBsAg/SS) ,并在COS细胞中的获得较高水平的瞬时表达 ,用HBsAgElisa检测试剂盒跟踪发现 ,约有 2 7%的融合蛋白分泌到细胞外 ,说明SS的插入没有影响HBsAg的免疫反应性和分泌表达。免疫电镜观察 ,HBsAg可以组装成 2 2nm～ 30nm的颗粒 ,说明SS的插入没有影响HBsAg的组装 ,该实验为动物实验打下基础。
- 孙迎基汪兴生张新元沈子龙
- 关键词：生长抑素DNA疫苗COS细胞
- 抗HIV抗生素研究进展被引量：2
- 2004年
- 获得性免疫缺陷综合症 (AIDS)是人类尚未攻克的一道医学难题 ,目前上市的抗HIV药物还存在很多不足 ,仍有许多科学家致力于寻找新的抗HIV药物。从天然产物中筛选抗HIV药物是其中一条重要的途径。抗生素作为一大类天然产物 ,为寻找新抗HIV药物提供了丰富的资源。
- 顾觉奋张新元
- 关键词：获得性免疫缺陷综合症药物靶点细胞融合蛋白酶药物作用
- 硫氧还蛋白-(His)_ 6 融合的瑞替普酶的表达、纯化和活性检测(英文)被引量：5
- 2004年
- 目的 :构建硫氧还蛋白 (His) 6 瑞替普酶融合表达载体 ,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量 ,简化rPA的分离纯化。方法 :将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白 (组氨酸 ) 6标签下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中用乳糖进行诱导表达。采用一步稀释法对融合蛋白体外复性后 ,使用Ni2 + 亲和层析柱 ,对包涵体复性液进行初步纯化。采用体外溶圈法对复性后和纯化后的融合蛋白进行生物活性的测定。结果 :得到分子量约为 5 6kDa的融合蛋白 ,表达量达到总蛋白的 30 %以上。比本实验室构建的非融合表达载体表达量提高了约 5 0 %。经过一步Ni2 + 亲和层析 ,融合蛋白纯度达到80 %以上。体外溶圈法实验表明融合蛋白复性后和纯化后具有溶栓活性。结论 :与非融合表达相比 ,融合表达的表达量明显提高。即使N端额外融合一段融合多肽 ,rPA仍然具有生物学活性。
- 张新元廖建民孙石静沈子龙
- 关键词：硫氧还蛋白瑞替普酶纯化活性
- 组织型纤溶酶原激活剂突变体的复性分离纯化方法
- 本发明属于医药生物技术重组蛋白分离纯化技术领域，公开了一种用低廉、普通级别的常用试剂咪唑和尿素，以它们的浓度梯度在合适的条件下，使在大肠杆菌中与(His)<Sub>6</Sub>融合表达的组织型纤溶酶原激活剂瑞替普酶正确...
- 沈子龙廖建民孙石静张新元
- 文献传递
- r-PA真核表达载体的构建与鉴定被引量：6
- 2005年
- 用SV40和CaMV35S两种启动子分别启动瑞替普酶(reteplase,rPA)和标记基因bar基因,构建能在海带中表达外源基因的重组表达载体。通过PCR方法扩增CaMV35S启动子、bar基因和rPA基因,将扩增的3个片段分别克隆到pGEMTEasyVector上。将CaMV片段亚克隆到pCAT3control载体上得到重组质粒pCAT/CaMV;再将bar基因切下插入到CAT/CaMV上得到重组质粒pCAT/CB,最后将rPA基因片段切下后插入到pCAT/CB上获得重组质粒pSVrPA/CB。PCR、酶切及测序结果均表明已成功扩增出CaMV35S、rPA和bar基因片段,并已顺次正确插入到真核表达载体PCAT3control上,最终成功构建了能在海带中表达rPA的真核表达载体,用基因枪法转入海带中表达,FAPA法测定得到有体外纤溶活性的阳性海带,为后续研究工作打下坚实的基础。
- 孙石静张新元孙雄华廖建民沈子龙
- 关键词：瑞替普酶真核表达载体海带
- 溶栓药物Reteplase在海带和大肠杆菌中表达的研究
- 该研究构建了海带表达r-PA的质粒pSVrPA/C-B,采用基因枪法将带有r-PA基因的质粒导入海带雌配子体,经过鉴定得到有溶栓活性的海带孢子体,初步建立了海带表达r-PA或其它生物药物的技术平台.大肠杆菌表达系统具有生...
- 张新元
- 关键词：海带大肠杆菌复性
- 文献传递
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)与绿色荧光蛋白(GFP)在转基因烟草中的融合表达被引量：3
- 2004年
- 构建人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)与绿色荧光蛋白 (GFP)融合表达的植物表达载体pCA130 2NSF tPA。将重组载体转入根瘤农杆菌GV310 1中 ,通过叶圆盘法转化烟草。转化植株经PCR鉴定整合有t PA基因 ,通过荧光显微镜可检测到绿色荧光蛋白 (GFP)的表达。
- 王庆华王永中陈宇坤张新元叶波平奚涛
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂绿色荧光蛋白转基因烟草
